蛹虫草胞外多糖的提取纯化及免疫活性研究

目的 提取纯化蛹虫草发酵液中的胞外多糖,初步研究其结构及免疫活性.方法 乙醇沉淀多糖,用Sevag法除去蛋白质、透析法除去小分子物质,经CM-52纤维素柱层析后得纯品.用紫外光谱测定多糖纯度,用凝胶柱层析法测定相对分子质量,高效毛细管电泳和红外光谱分析其分子结构,检测胞外多糖对小鼠巨噬细胞系RAW264.7产生NO的影响.结果 蛹虫草胞外多糖经脱蛋白、CM-52纤维素柱层析后可获得单一对称峰的纯多糖,相对分子质量为3.49 × 104,含羟基、糖醛结构和羰基结构,单糖基之一为甘露糖.多糖可显著刺激巨噬细胞分泌NO,具有活化免疫细胞、增强机体免疫力的作用.结论 该方法可获得高纯度蛹虫草胞外多糖,并证明它对巨噬细胞有活化作用.     

蛹虫草胞外多糖的提取纯化及免疫活性研究

目的提取纯化蛹虫草发酵液中的胞外多糖,初步研究其结构及免疫活性。方法乙醇沉淀多糖,用Sevag法除去蛋白质、透析法除去小分子物质,经CM-52纤维素柱层析后得纯品。用紫外光谱测定多糖纯度,用凝胶柱层析法测定相对分子质量,高效毛细管电泳和红外光谱分析其分子结构,检测胞外多糖对小鼠巨噬细胞系RAW264.7产生NO的影响。结果蛹虫草胞外多糖经脱蛋白、CM-52纤维素柱层析后可获得单一对称峰的纯多糖,相对分子质量为3.49×10^4,含羟基、糖醛结构和羰基结构,单糖基之一为甘露糖。多糖可显著刺激巨噬细胞分泌NO,具有活化免疫细胞、增强机体免疫力的作用。结论该方法可获得高纯度蛹虫草胞外多糖,并证明它对巨噬细胞有活化作用。     

蛹虫草高产胞外虫草素和虫草多糖的诱变育种

通过诱变获得高产胞外虫草素和虫草多糖的蛹虫草菌株.采用紫外线诱变(UV)、化学诱变(LiCl)、复合诱变(UV-LiCl) 3种方式对蛹虫草孢子进行诱变;发酵检测存活菌株的胞外虫草素和虫草多糖的含量.结果:以胞外虫草素为指标,3种诱变方式的最大正突变率分别为化学突变(29.2％)＞紫外突变(28.6％)＞复合诱变(26.5％);以胞外多糖为指标,最大正突变率分别为紫外诱变(35.7％)＞复合诱变(33.3％)＞化学诱变(27.0％).紫外诱变突变株Z-5-1胞外虫草素产量达0.842g/L,比出发菌株高311％;紫外诱变突变株Z-4-7胞外虫草多糖产量达5.250g/L,比出发菌株高148％.在连续培养5代后,仍具有较好的遗传稳定性.紫外诱变能获得较高的蛹虫草正突变率,同时能获得高产虫草素、虫草多糖的突变株.     

蛹虫草胞外锌多糖抗氧化能力的研究

以蛹虫草为材料通过液体深层富锌培养获得胞外富锌多糖,测定了蛹虫草胞外富锌多糖的锌含量和抗氧化性能,即清除氧自由基、羟自由基和DPPH的能力。实验结果表明:蛹虫草富锌培养基内ZnSO4浓度在150μg/mL下,可以显著提高胞外锌多糖的有机锌含量(P<0.01),使有机锌含量达到0.87mg/g,比对照提高295%。有机锌对提高胞外锌多糖清除自由基的能力有显著的促进作用(P<0.01),清除氧自由基、羟自由基和DPPH的能力分别是对照的7.05%、23.5%和17.49%;胞外锌多糖对自由基的清除能力与多糖浓度呈明显的剂量-效应关系(P<0.01)。     

蛹虫草菌胞外多糖发酵动力学的研究

对蛹虫草胞外多糖的发酵过程和发酵动力学进行了研究。基于菌丝体的定义(dCx/dt=μCx)和菌丝体比生长速率μ[μ=μ(t)],得到了描述发酵过程中菌丝体生长和胞外多糖生成的数学模型,同时对实验数据与模型进行了比较,结果拟合良好,说明此模型较好地反映了蛹虫草胞外多糖的发酵过程及其动力学机制。      

乳酸菌胞外多糖免疫活性的研究进展

乳酸菌胞外多糖是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的一种天然高分子化合物。由于其能够改善发酵乳制品风味与质地,并具有多种生理活性,近年来受到国内外学者的普遍关注。根据近年来国内外乳酸菌胞外多糖免疫活性的研究现状,综述了产胞外多糖乳酸菌的种类、产量以及乳酸菌胞外多糖对特异性和非特异性免疫方面的影响,并对乳酸菌胞外多糖免疫调节活性及结构性质之间的构效关系进行了总结,旨在为乳酸菌胞外多糖的进一步开发和利用提供一定的理论基础。     

关于蛹虫草菌多糖发酵及培养基的研究

研究了蛹虫草胞外多糖发酵过程，分析不同因素对胞外多糖得率的影响，获得了比较适宜的培养基组成和发酵条件。蛹虫草胞外多糖优化发酵培养基组成为：蔗糖12％，玉米浆2％，酵母膏2％，硝酸钾0．45％；发酵培养条件为：pH值6．5，温度20℃。此条件下蛹虫草胞外多糖得率为1．188g／100mL，菌丝体干重为1．221g／100mL。     

蛹虫草多糖的提取工艺优化及其抗氧化活性研究

以蛹虫草多糖(Cordyceps militaris polysaccharides,CMP)的提取得率为指标,通过单因素和响应面法对CMP的提取工艺进行优化。采用乙醇分级法,将CMP进行乙醇分级,分别得到4种多糖组分(CMP20、CMP40、CMP60和CMP80),并对不同多糖的得率、组分含量及抗氧化活性进行比较。结果表明,CMP的最优提取条件为温度84℃、液料比33∶1(m L/g)和时间128 min。在此条件下,实际提取得率为7.83%;CMP20、CMP40、CMP60和CMP80的得率分别为7.06%、15.07%、17.83%、25.23%。其中,CMP80的得率最高,蛋白含量最低,仅为1.47%;5种多糖均具有一定的抗氧化活性,CMP60的还原力和DPPH自由基清除率均为最高,CMP80的羟自由基的清除率最高。     

金针菇胞外多糖的化学结构及其抗氧化活性分析

对金针菇胞外多糖(Flammulina velutipes exopolysaccharides,FEPS)经过离子交换柱层析和凝胶柱层析法得到的2种组分(FEPS-1和FEPS-2)的化学结构特征进行了分析。采用高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)、红外光谱(IR)等手段对其化学结构特征进行解析,并对其抗氧化活性进行分析。结果表明:FEPS-1主要由鼠李糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成,其含量分别为28.51%,62.94%,2.08%和6.47%,对应的摩尔比为15.7∶31.3∶1.1∶3.3;FEPS-2主要由鼠李糖、葡萄糖和半乳糖组成,含量分别是68.23%,21.48%和10.29%,相应的摩尔比为37.5∶10.8∶5.2。FEPS-1和FEPS-2均有较强的抗氧化活性,且FEPS-2更为显著。     

长白山虫草属蛹虫草多糖的抗氧化活性及其对果蝇寿命的影响

以长白山虫草属蛹虫草的胞内与胞外多糖为研究对象,分别检测其体外抗氧化能力。以果蝇种群的半数死亡时间、平均寿命、平均最高寿命及寿命延长率为指标,评价胞内、外多糖对果蝇寿命的影响。试验结果表明:胞内、外多糖具有良好的体外抗氧化能力,且基本随浓度的提高而增强;胞内多糖的高剂量组能显著提高雌性果蝇寿命,延寿率可达11.63%;中、高剂量组均能显著提高雄性果蝇的寿命,延寿率分别达13.20%、16.46%,且对雄性果蝇的延寿作用强于雌性。胞外多糖方面仅中剂量组能显著提高雄性果蝇的寿命,延寿率为9.20%,延寿作用不明显,显著低于胞内多糖。本文通过探究蛹虫草胞内和胞外多糖的抗氧化及延缓衰老的作用,为进一步研发蛹虫草功能性食品提供理论依据。     

蛹虫草子实体多糖抗突变作用

研究蛹虫草多糖(CMPS)对环磷酰胺(CTX)诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核形成率及染色体畸变率的影响,探讨其抗突变作用。采用微核实验和染色体畸变实验技术,镜下观察并计数。结果显示:CMPS三个剂量组小鼠微核抑制率分别为29.75%、36.20%、44.48%,抑制率随剂量增多呈增加趋势,各剂量组与环磷酰胺组比较,均有显著性差异(p<0.05);CMPS三个剂量组染色体畸变率分别为36.7%±5.46%、20.8%±3.52%、18.1%±3.28%,畸变率随CMPS剂量增多呈下降趋势。蛹虫草多糖可降低环磷酰胺诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率及染色体畸变率,具有抗突变活性。      

北冬虫夏草多糖组分的分离纯化及结构研究进展

北冬虫夏草多糖是一类具有重要生理和药理活性作用的功能活性成分,是目前研究的热点之一。本文对北冬虫夏草多糖的提取、分离纯化、结构分析方面的最新进展进行了综述,并指出了当前存在的问题和今后发展的趋势。     

一种蛹虫草多糖的结构特征及体外抗氧化活性

采用分子筛层析法从人工培养蛹虫草子实体中分离纯化得到一种多糖W-CBP80Ⅰ,进而分别采用凝胶渗透色谱（GPC）、气-质联用（GC-MS）、红外光谱（IR）、核磁共振(¹H NMR和¹³C NMR)研究其理化性质和结构特征。结果表明:W-CBP80Ⅰ含有α-糖苷键,并主要由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成。它主要成分为低分子量多糖,分子量为8.93×10³。此外,W-CBP80Ⅰ具有体外清除DPPH,羟基和超氧阴离子自由基活性。      

蛹虫草多糖的化学修饰及体外抗氧化能力

将醇沉法得到的粗多糖,经柱层析得多糖纯品。对多糖纯品进行硫酸化、羧甲基化、乙酰化化学修饰,用于体外抗氧化活性研究。纯化后的蛹虫草多糖可以被多种化学试剂修饰,其取代度大小的顺序是：羧甲基化＞乙酰化＞硫酸化;修饰后的多糖表现出不同程度的抗氧化活性,其中羧甲基化和硫酸化可以明显提高多糖的抗氧化能力,对烷基自由基清除率提高最大,分别达到95.19%和73.58%,其次是清除羟自由基和超氧阴离子自由基,乙酰化修饰后抗氧化能力有所下降。因此,采用合适的修饰方法,可以明显提高蛹虫草多糖的抗氧化活性。     

蛹虫草多糖的酶法修饰及其抗氧化活性

为了提高蛹虫草多糖的抗氧化活性,采用α-淀粉酶对蛹虫草多糖进行酶法修饰。以DPPH自由基清除率为响应值,运用响应面分析法对α-淀粉酶修饰蛹虫草多糖的工艺进行优化,研究酶修饰后蛹虫草多糖清除DPPH自由基、螯合Fe2+和还原力等抗氧化活性,并对其三螺旋体结构进行分析。结果表明:对修饰多糖抗氧化活性的影响因素从大到小依次为:加酶量、酶解温度、酶解pH值;α-淀粉酶修饰蛹虫草多糖的最优工艺条件为:酶解温度48.5℃、酶解pH 5.8、加酶量259.5U/g,在此条件下,酶修饰后蛹虫草多糖对DPPH自由基的清除率预测值为81.4%,验证值为(81.6±1.6)%,结果重现性好,可用于实际预测。抗氧化实验表明,α-淀粉酶法修饰后,蛹虫草多糖清除DPPH自由基和螯合Fe2+的EC50值分别为:0.0247、1.0120mg/mL,分别比酶法修饰前提高了55.1%和39.8%;同时,蛹虫草多糖的还原力也得到了显著提高(P<0.05)。三螺旋体结构分析表明,蛹虫草多糖经α-淀粉酶修饰后,其三螺旋体结构有轻微破坏,但仍然保持三螺旋体结构。     

低分子量蛹虫草多糖降血糖活性的研究

采用高血糖小鼠模型验证低分子量蛹虫草多糖在体内的降血糖活性。以腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建小鼠糖尿病模型,小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、低分子量蛹虫草多糖高、中、低剂量组,研究低分子量蛹虫草多糖对小鼠空腹血糖值、糖耐量、脏器指数、体重、血清总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)等指标的影响。连续灌胃给药4周,与模型组相比,剂量组小鼠的体重呈升高趋势,具有显著性差异(p0.01),高剂量组(200 mg/kg)降糖效果最好,给药4周后空腹血糖降至13.7±2.4 mmol/L,结果表明,低分子量蛹虫草多糖显示出较好的降血糖效果,能明显降低糖尿病小鼠血糖值,且在一定范围内能改善小鼠糖耐量异常,同时能有效减轻高血糖对肾脏和肝脏的损伤和缓解由糖代谢紊乱所引发的体重下降问题。     

山药-蛹虫草双向发酵的抗氧化活性增效性

本实验研究山药-蛹虫草（Cordyceps militaris）双向发酵的抗氧化活性增效性。以超氧阴离子自由基清除率、2,2-二苯基-1-苦基肼自由基清除率和羟自由基清除率为指标，比较分析山药-蛹虫草菌质和山药基质的抗氧化活性。通过抗氧化活性成分含量测定以及高效液相色谱指纹图谱、扫描电子显微镜和傅里叶变换红外光谱分析，研究菌质抗氧化活性的增效原因。结果表明：发酵结束后菌质的自由基清除率显著高于山药的自由基清除率（P＜0.05），菌质中总酚、总黄酮和总皂苷含量显著高于山药（P＜0.05）；菌质不仅含有一些山药中不存在的成分，而且山药中原有6 种成分的含量也发生明显变化；蛹虫草菌丝对山药结构有分解作用；山药中的多糖、纤维素等糖类物质作为碳源被蛹虫草所代谢，转化成多酚类、皂苷类物质。本研究发现，山药-蛹虫草发酵体系在抗氧化活性方面具有增效性，菌质成分的种类、含量变化以及菌质微观结构变化是产生抗氧化活性增效性的主要原因。     

虫草花多糖提取工艺优化及其抗氧化特性

采用超声辅助法提取虫草花多糖,在单因素试验的基础上,通过L9（34）正交试验优化了虫草花多糖提取工艺;并就虫草花多糖对羟基自由基（·OH）、1,1-苯基-2-苦肼基（DPPH）自由基的清除作用和还原能力进行研究。结果表明：虫草花多糖最佳提取工艺条件为超声功率300 W,液料比30∶1（mL∶g）,超声时间30 min,超声温度45 ℃。在此优化条件下,多糖的平均提取率为3.88%。抗氧化活性试验结果表明,虫草花多糖质量浓度在2.9～14.7 mg/L范围内,随着虫草花多糖质量浓度的增加,其OH、DPPH自由基清除能力及还原能力均逐渐增强,虫草花多糖质量浓度为14.7 mg/L时,对·OH和DPPH·清除率分别达到44.39%和56.34%,说明虫草花多糖具有较强的抗氧化活性。