硫酸二乙酯诱变螺旋霉素高产菌株的选育

以一株螺旋霉素生产菌株为出发菌株,使用硫酸二乙酯(DES)处理进行诱变,获得四株效价较高的突变株,其中有一株经过5代后遗传性状稳定。该菌株在摇瓶试验中能提高效价约6.5%左右,发酵生产中能提高放罐效价6%左右,该高产菌株的获得对提高螺旋霉素发酵生产效率有着重要的意义。     

亚硝基胍诱变螺旋霉素高产菌株的选育

以一株螺旋霉素生产菌为出发菌株,使用亚硝基胍(NTG)处理进行诱变,获得三株效价较高的突变株,其中有一株经过5代后遗传性状稳定。该菌株在摇瓶试验中能提高效价约7.7%左右,对下一步生产发酵有着重要的意义。     

利用前体物质定向选育阿维菌素高产菌株

以除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)AV-0105为出发菌株,采用紫外线诱变处理,并结合前体抗性定向选育阿维菌素高产菌株. 通过对致死率的考察,确定了紫外线诱变的最适剂量. 在分离培养基中分别加入不同体积分数的缬氨酸和D -脱氧葡萄糖作为前体物质进行正突变株的定向筛选,选育得到阿维菌素高产菌株 AV-03-35,其摇瓶发酵效价达到4 695 u/mL,较出发菌株提高15.5%. 采用该菌株在2 t罐进行生产验证,平均发酵效价达4 592 u/mL,较出发菌株提高了13%.     

多粘菌素E高产菌株的推理选育

根据多粘菌素E生物合成途径进行高产菌株的推理选育.以多粘类芽孢杆菌(Bacillus polymgxa)C105x为出发菌株,采用紫外线诱变处理,并结合2,4-二氨基丁酸(L-DAB)和2-脱氧-D-葡萄糖(2-DOG)的抗性筛选,选育得到较佳正变株CL7-49.该菌株具有多粘菌素E发酵效价高、遗传稳定性好等特性.将该突变株应用于50 m3发酵罐的生产验证,发酵效价较对照菌株C105x提高了48%.     

抗药性基因突变筛选高产菌株

本文通过洁霉素对盐酸林可霉素产生菌 98-1菌株孢子的致死浓度测定 ,采用诱变剂EMS的四种不同诱变剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含洁霉素 ( 2 0 0 0 0ug/ml)的高氏平板上 ,获得了大量的洁霉素抗性基因突变株 ,然后从 90 0株洁霉素抗性基因突变株中通过初筛获得高于诱变出发菌株产素能力的菌株 5 6株 ,再进一步通过摇瓶复筛 ,并结合菌丝生长及摇瓶代谢情况 ,获得优于出发菌株的诱变菌株 4株。将这 4个菌株连同出发菌株连续三批次进行摇瓶发酵 ,结果 4个突变株的产素能力 (产量 )及摇瓶代谢和菌丝生长情况均优于出发菌株 ,试验筛选出最优菌株 0 2 -0 3 -40 2。将 0 2 -0 3 -40 2进行罐上发酵生产试验 ,结果试验罐比对照罐平均效价提高 1 7.5 6% ,平均产量提高 1 9.3 4%。本文建立了林可霉素高产菌株的洁霉素抗性基因突变诱变快速高效的筛选方法     

泰乐菌素高产菌株的筛选

以弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)TP-116菌株作为出发菌株,采用紫外线、氯化锂和微波三重复合诱变,通过泰乐菌素抗性定向筛选,获得一株高产菌株YBT-06,并对其进行了遗传稳定性试验,结果表明突变株YBT-06生产代谢旺盛,遗传稳定性好,发酵效价比出发菌株提高了25%,达到11066μg/m L。     

聚β-羟基丁酸高产菌株的选育及发酵条件优化

以分离筛选到的1株产PHB的蜡状芽孢杆菌13及其经紫外诱变获得的高产菌13(3)为出发菌株,再进行紫外和亚硝酸双因子诱变,筛选到了稳定高产菌株13-2,其PHB产量比野生型菌株13增加了82.63%,比高产菌株13(3)增加了48.01%。设计正交试验。确定突变株13-2培养的最佳发酵条件是碳源为蔗糖,氮源为蛋白胨,p H值为7.5,发酵温度为37℃,发酵周期为16h。     

微生物絮凝剂产生菌的选育及发酵罐放大试验研究

以产微生物絮凝剂的芽孢杆菌DHS-63为出发菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)诱变系统进行诱变,经筛选及稳定性分析得到一株遗传稳定的突变株A265,摇瓶发酵絮凝剂产量达到1.08 g·L~(-1),比出发菌株提高12.9%。对该菌株进行发酵罐放大试验,10 L发酵罐絮凝剂产量为1.64 g·L~(-1),发酵时间48 h,比出发菌株缩短了10 h;70 L发酵罐絮凝剂产量为1.55 g·L~(-1),发酵时间44 h,比10 L发酵罐发酵时间缩短了4 h。     

He-Ne激光与紫外线复合诱变选育西罗莫司高产菌株

以吸水链霉菌为出发菌株,采用He-Ne激光-紫外复合诱变对其单孢子悬液进行诱变筛选高单位突变株,经复筛选育出具有较好遗传稳定性的高产突变株11-1-6#,摇瓶效价达到401.9u/mL,比出发菌株提高了79%。     

头孢菌素C产生菌的诱变育种及发酵应用

以头孢菌素C产生菌顶头孢霉(Cephalosporium acremonium)B-1822-S-04为出发菌株,经过紫外线和丙二酸复合诱变,筛选得到了4株头孢菌素C高产菌株D-G-017、D-G-083、D-G-096和D-G-133,其中菌株D-G-096的效价高达6 816 mg·L~(-1),较出发菌株提高了50.80%,且高产特性稳定;50 L发酵罐小试结果显示,菌株D-G-096的效价达到了29 270 mg·L~(-1),较出发菌株提高了111.06%,可作为优良高产菌株保存使用。该实验筛选出的高产菌株及其在小试中的应用,可为后期工业化生产提供优质菌种资源,为发酵工艺提供指导。     

紫外线—氯化锂复合诱变吉他霉素高产菌株的选育

以一株北里链霉菌(Streptomyces kitasatoensis)Zn1201为出发菌株,使用氯化锂前处理后照射紫外线进行复合诱变,通过L9(34)正交实验等处理结果得知,1.5%的氯化锂浸泡2 h、UV照射90 s得到的正突变株摇瓶效价提高较大,通过耐高浓度豆油和耐自身代谢物的选择性筛选,获得3株高产突变株,其中Zn1401突变株摇瓶发酵效价比出发菌株提高了14.3%,且该菌株传至5代,遗传性状稳定。该菌株应用于生产之后,产量提高7%左右,年新增利润1091万元。     

产黄青霉菌高能电子诱变选育

为了选育出青霉素高产菌株,以产黄青霉菌10-2-12为出发菌株,经高能电子诱变后分离。经过18批次筛选得到的突变株13-6-55效价比出发株高8.2%,且菌丝状态、传代稳定性好。在试验罐上的平均发酵单位比对照高3.6%。     

夫西地酸生产菌复合诱变育种及发酵培养基的优化研究

利用常压室温等离子体射流诱变和紫外照射对夫西地酸生产菌株进行复合诱变,得到3株产量明显提高的突变菌株,3株菌的平均发酵效价较出发菌株提高14%;然后,采用均匀设计实验对其中发酵效价提高最多的AU-37菌株的发酵培养基碳、氮源进行了优化,得到适合该菌株的发酵培养基优化配方为:糊精1.86%、花生饼粉2.5%、蛋白胨0.3%、氯化铵0.5%、七水合硫酸镁0.3%、硫酸钾0.6%、碳酸钙1%、pH值7.2,在优化的发酵培养基中,AU-37菌株摇瓶发酵效价较出发菌株提高33.8%,为工业化生产奠定了基础。     

亚硝基胍-紫外复合诱变选育高产衣康酸菌株

为提高土曲霉KYK-031发酵生产衣康酸能力,对出发菌株开展诱变育种和高产能力选育研究。采用亚硝基胍（NTG）和紫外（UV）复合诱变方法,通过平板初筛和摇瓶复筛,筛选衣康酸高产突变株。结果表明,亚硝基胍在500μg/mL浓度下的最佳诱变时间为40 min,15 W紫外诱变的最佳诱变时间为2 min,亚硝基胍-紫外复合诱变后筛选得到一株衣康酸高产菌株KYK-1035,摇瓶发酵产量为73.7 g/L,比出发菌株（41.8 g/L）提高了76.3%,糖酸转化率为63.4%。采用亚硝基胍-紫外复合诱变,提高了出发菌株诱变的正突变率,为衣康酸发酵继续放大和工业化生产奠定了基础。     

替考拉宁高产菌株的选育

以替考拉宁产生菌1-16为出发菌株,经热诱变复合替考拉宁抗性筛选高产菌株,获得一株高产突变菌株TC3-25,其替考拉宁产量较出发菌株提高46%。传代试验表明该菌株的发酵水平较稳定。     

红霉素高产菌株的推理选育

推理选育是一种应用广泛的高通量筛选技术,本文以红霉素生产菌红色链霉菌HA-13-36为出发菌株,经过氯化锂、紫外线、DES三重复合诱变后,定向筛选耐丙酸盐高产突变株Ⅰ(B-14-30),耐红霉素高产突变株Ⅱ(H-14-05),再利用原生质体融合技术将Ⅰ和Ⅱ融合后获得新的高产融合子R-15-26,该重组子摇瓶效价为6532u/m L,比原始菌株提高了36.2%,比诱变菌株提高23.9%,比高产突变菌株Ⅰ和Ⅱ分别提高了10.3%和16.0%,且经过多次传代表明具有较强的遗传稳定性,小试效价达到10000u/m L以上。     

大气压冷等离子体诱变产1,3-丙二醇菌株Klebsiella pneumoniae

采用大气压冷等离子体介质阻挡放电法对产1,3-丙二醇的克雷伯氏菌进行诱变,采用诱变与筛选同时进行的单细胞平板诱变方法,同时获得了可耐受高浓度甘油且1,3-丙二醇产量较高的优良突变株. 对诱变后菌的间歇发酵结果表明,诱变菌株比出发菌株1,3-丙二醇的质量转化率提高了23%,对数期比生长速率提高了18%. 批式流加发酵过程中,1,3-PD浓度在发酵36 h时达到70.5 g/L,甘油的质量转化率为0.57 g/g,分别比野生菌提高47%和58%. 该诱变和筛选方法具有操作简单、效率高等特点,对具有工业应用价值的菌株筛选具有实用价值.     

卡泊芬净合成前体Pneumocandin Bo的发酵工艺研究

以Pneumocandin B0 PB5-31为出发菌株,从筛选高产菌株和提高产物中有效组分的比例两方面进行研究,以期提高Pneumocandin B0 的发酵水平.结果表明,紫外线诱变复合氯化锂后处理筛选出高产菌株,其发酵效价比出发菌株提高了72％;发酵培养基中添加0.3％的脯氨酸很好地提高了有效组分B0的比例.     

卡泊芬净合成前体Pneumocandin Bo的发酵工艺研究

以Pneumocandin B0 PB5-31为出发菌株,从筛选高产菌株和提高产物中有效组分的比例两方面进行研究,以期提高Pneumocandin B0 的发酵水平.结果表明,紫外线诱变复合氯化锂后处理筛选出高产菌株,其发酵效价比出发菌株提高了72％；发酵培养基中添加0.3％的脯氨酸很好地提高了有效组分B0的比例.     

链霉素抗性诱变筛选阿维菌素高产菌株

以Y 0909-12为原始菌株,经过亚硝基胍诱变后,采用链霉素进行抗性筛选,得到一株高产菌株Y 0910-67,其效价较对照高出16.9%。