异源表达CkLEA1基因增强了拟南芥对非生物胁迫的耐受性

植物在生长过程中会受到各种非生物胁迫的伤害,导致生长发育和产量受到严重影响,胚胎晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant proteins,LEA蛋白)在植物抵抗非生物胁迫过程中起着重要的保护作用。在前期的研究基础上,将受多种胁迫诱导的柠条锦鸡儿Ck LEA1(Gen Bank登录号KC309408)基因转入野生型拟南芥,通过实时荧光定量PCR从7株T_3代纯合体中筛选出3个转基因株系做进一步研究。种子萌发率实验发现,在200 mmol/L NaCl和400 mmol/L甘露醇处理下,转基因株系萌发率均高于野生型拟南芥。干旱处理2周大的幼苗后,转基因株系明显比野生型更抗旱,存活率高于野生型,并且失水率低于野生型。同时,转基因株系积累了较少的丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量也高于野生型。这些结果表明,柠条锦鸡儿Ck LEA1基因在种子萌发阶段提高了拟南芥对盐和渗透胁迫的耐受性,并且提高了转基因拟南芥幼苗生长阶段对干旱胁迫的抵抗能力。     

过表达水稻MYB转录因子OsARM1对转基因拟南芥冷冻耐受性的提高

克隆水稻MYB转录因子OsARM1全长编码序列(coding sequence,CDS)并构建植物过表达载体,转化获得过表达OsARM1的拟南芥。冷冻处理结果显示,OsARM1能明显提高转基因拟南芥的冷冻耐受性,与野生型对照处理后存活率只有37.04%相比,转基因过表达OsARM1的拟南芥存活率达到83.33%与86.11%。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR)分析结果表明,在低温处理下OsARM1主要通过影响低温响应相关基因CBF和下游COR基因的表达水平来提高转基因拟南芥的冷冻耐受性。同时,GUS染色结果显示,OsARM1只在转基因拟南芥的叶柄和叶片输导系统中特异性表达,推测其可能通过参与脯氨酸和可溶性糖等的转运和分布来提高植物的冷冻耐受性。     

黄瓜花叶病毒2b蛋白C末端无抑制局部RNA沉默的活性

目的:黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)编码的2b蛋白具有RNA沉默抑制子的功能,其C末端氨基酸序列非常保守。为了明确2b蛋白C末端保守序列在RNA沉默抑制中的作用,构建了CMV Q株系野生型2b及其C末端缺失突变体2bdelC的植物瞬时表达载体。通过农杆菌共渗滤法对野生型2b及其C末端突变体的沉默抑制子活性进行了分析。结果与结论:烟草接种叶片中野生型2b及其C末端突变体的Western blot检测表明,野生型2b蛋白与其C末端突变体在植物中积累水平变化不大,说明2b蛋白C末端氨基酸残基在维持2b蛋白在植物细胞中的稳定性方面无作用。在整株、细胞和分子水平上分别比较了野生型2b及其突变体2bdelC对共表达GFP的表达量影响,结果表明在所有的测定结果中二者均无明显地差异,说明2b蛋白C末端94-111位氨基酸在抑制局部RNA沉默上无生物学活性,讨论推测C末端应不存在与小RNA结合的结构域。     

柠条锦鸡儿香豆酸-3-羟化酶基因克隆及其功能初步研究

香豆酸-3-羟化酶(Coumarate 3-Hydroxylase,C3H)是木质素生物合成途径中的关键酶之一。以柠条锦鸡儿为材料,利用RACE技术克隆了C3H基因。对柠条锦鸡儿C3H基因的gDNA和cDNA全长分析显示该基因具有3个外显子,2个内含子,编码框长度为1530bp,编码509个氨基酸。预测该基因编码蛋白的等电点位7.67,分子量约57.61kDa。氨基酸序列分析显示具有一个保守的P450结构域。系统进化分析表明该蛋白与大豆C3H具有最高的同源性,将该基因命名为CkC3H,GeneBank登录号为HQ829858。构建了35S启动子驱动的CkC3H基因植物表达载体,互补拟南芥C3H(CYP98A3)基因突变体ref8,转基因植物表型得以部分恢复。这些结果说明柠条锦鸡儿CkC3H与拟南芥C3H至少具有部分相同的功能。     

南宁市典型居室内空气污染物污染水平调查

目的了解南宁市居室空气质量情况,探讨室内空气中甲醛和总挥发性有机化合物(TVOC)的污染程度和分布情况。方法采用PPM-400ST甲醛检测仪、Pho Check Tiger-PCT有机气体检测仪等测试分析了南宁市典型居室中客厅、卧室、书房的甲醛和TVOC浓度。结果南宁市居室的书房、卧室、客厅中TVOC合格率分别为97.6%、92.9%、100%,甲醛合格率分别为23.8%、26.2%、71.4%;甲醛污染严重的是书房,甲醛质量浓度超过国家标准1~2倍、2~3倍、3倍以上的比例分别为21.4%、31.0%、23.8%,最高质量浓度为0.901 mg/m3,是国家标准的9.0倍。结论室内甲醛、TVOC质量浓度普遍较高,通风及宽敞的室内空间有利于降低污染程度。     

番茄SlWDR141基因的克隆及功能研究

为研究番茄WD40蛋白基因(SlWDR141)的功能,对SlWDR141蛋白进行生物信息学分析,发现SlWDR141蛋白在进化过程中高度保守,与土豆的同源性最高。在克隆SlWDR141基因全长序列的基础上,构建了亚细胞定位和酵母双杂交表达载体,证实SlWDR141蛋白主要定位在细胞核中,与DDB1具有相互作用。实时荧光定量PCR(real-time PCR)分析SlWDR141基因在组织中的表达谱,发现它在各个组织中均有表达,但在根中的表达量最高。为研究该基因的生物学功能,进一步构建了SlWDR141基因的干涉载体,用农杆菌介导法转化番茄得到转基因阳性番茄,荧光定量PCR鉴定出3个表达量下调的独立转基因株系。NaCl胁迫和Pst DC3000侵染野生型和转基因植株发现,转基因植株相对于野生型植株抗盐性和抗病性均下降,表明SlWDR141基因对盐胁迫和细菌侵染均起正调控作用。     

拟南芥SCBP60g蛋白的亚细胞定位及其功能研究

为了研究SCBP60g的功能,研究利用Gateway克隆技术构建了GFP报告基因与拟南芥SCBP60g基因融合表达载体和基因功能互补表达载体并获得了转基因植物,通过激光共聚焦显微镜观察了SCBP60g蛋白的亚细胞定位情况,利用活体细菌生长量检测实验研究了SCBP60g蛋白在抗病中的功能;同时构建了SCBP60g过表达载体并检测了转基因植物对ABA的响应情况。结果显示,SCBP60g定位于细胞核;SCBP60g基因不能恢复CBP60g基因突变体对丁香假单胞菌的敏感性;过量表达SCBP60g基因不影响拟南芥对ABA的敏感性。表明SCBP60g没有参与拟南芥的抗病防御反应以及对ABA的响应。     

基于分子结构评价的Bacillus subtilis β-1,4-内切木聚糖酶胰蛋白酶抗性的理性设计

饲料用酶在饲喂过程中,不可避免地会受到消化道中蛋白酶的破坏而令其使用效率受到影响,因此,饲料酶的蛋白酶抗性是其十分重要的性质之一。基于酶反应原理与计算化学理论对Bacillus subtilis 168β-1,4-内切木聚糖酶(Xyn A)的胰蛋白酶抗性进行理性设计,最终得到三个突变体——Xyn A~(R121C)、Xyn A~(R121C/K98Q)和Xyn A~(K39I)。酶学性质分析显示Xyn A~(R121C)和Xyn A~(R121C/K98Q)与野生型(Xyn A)的最适反应温度均为60℃,Xyn A~(K39I)为40℃;突变体酶与野生型酶的最适p H都是6.0;人工肠液(p H 6.8,10 mg/ml胰蛋白酶溶液)处理野生型及其突变体后,Xyn A~(R121C/K98Q)和Xyn A~(R121C)的残留酶活力均明显比野生型高,它们的半衰期分别是野生型的2.02倍和1.52倍,Xyn A~(K39I)在胰蛋白酶溶液中的半衰期为90min,比野生型缩短了37 min。     

拟南芥AtCAO和AtHEMA1基因共表达载体的构建及转烟草研究

增加作物的叶绿素含量,尤其是叶绿素b的含量,是增强作物耐弱光性的可能途径。将拟南芥叶绿素合成的关键酶——谷氨酰tRNA还原酶(glutamyl-tRNA reductase,HEMA1)的基因和促进叶绿素b合成的关键酶——叶绿素酸酯a加氧酶(chlorophyllide a oxygenase,CAO)的基因,构建于同一个植物双元表达载体,经农杆菌介导整合进烟草基因组。结果显示,弱光下转基因烟草比野生烟草的叶绿素总量增加不显著,但叶绿素b含量增加16%～17%、叶绿素a/b比值降低9%～12%、光合作用增强42%～65%,均达到显著水平,而且生长发育比野生烟草快。为今后改良作物的耐弱光性奠定了基础。     

唐菖蒲GhMYC2基因启动子的活性分析

以唐菖蒲(Gladiolus hybridus)品种"Rose Supreme"为材料,采用hiTAIL-PCR方法克隆得到GhMYC2基因上游906bp的启动子序列。利用植物顺式作用元件查询数据库PLACE分析发现,GhMYC2启动子序列中不仅含有响应茉莉酸(jasmonate,JA)的元件T/GBOXATPIN2,还含有大量与病原菌诱发因子表达调节相关的转录因子WRKY以及抗性元件W-box、E-box等顺式作用元件。在ProGhMYC2::GUS转基因拟南芥中发现,GhMYC2的表达具有时空特异性,且主要在根、叶中表达。对转基因拟南芥进行茉莉酸甲酯(methyl jasmonic acid,MeJA)和灰霉菌(Botrytis cinerea)处理发现,转基因植株中GUS的表达均上调,表明其表达受到MeJA和灰霉菌的影响,此结果可为研究JAs途径调控植物抵御病害提供一定的参考。     

住宅楼安装中央空调的加固案例分析

文章通过两处住宅用房安装中央空调的事例,现场查勘、验算与鉴定,证实了在住宅用房的混凝土梁上钻孔洞安装中央空调管线的做法,影响了房屋结构的安全,同时给出了加固处理意见,提出了个人的几点看法.     

Regularities of development of settling of models of deep footings

Conclusions 1. The effect of relative penetration on the change in magnitude of settlement is substantial. With the same specific pressure on the base the settlement of the model decreases as the relative penetration increases.2. Published data on values of unit friction forces along lateral surfaces of deep foundations were confirmed. The maximum value of resistance along the side surface was 2 tons/m².3. It was established that the realtionship between the settlement of the model and its diameter is nonlinear. This is of great importance in working out a method for calculating foundations of deep footings from deformations especially if one considers that in this case the foundation carries substantial pressures and deforms under conditions of strongly developed shear regions.Translated from Osnovaniya, Fundamenty i Mekhanika Gruntov, No. 6, pp. 11–12, November–December, 1971.     

测量标志普查资料汇集技术处理

为了适应新的形势发展需要,安徽省国土资源厅已启动新一轮测量标志普查工作。与过去不同,此次普查在资料汇集、调查人员组织、调查资料归档与调用等方面做了较大变革,文章简明阐述了变革后的测量标志普查资料汇集技术处理的过程。     

自动扶梯逆行故障成因与分析

对自动扶梯突然反转而导致逆行故障的类别和成因进行了分析,讨论了逆行速度及症状,分析了逆行概率及风险,并针对逆行提出了一些对策。     

浅析步行街的建筑工效学——上海市吴江路步行街建筑工效学调研

从建筑工效学的角度对上海市吴江路休闲步行街进行了调查研究，根据调查结果，分析了其在建筑工效学上的一些特点与不足之处并进行了探讨，以期对步行街的建筑工效学设计提供准确的参考。     

环境的共鸣--大连水产学院图书馆的设计

本文通过对大连水产学院图书馆的介绍,向人们展示了建筑与环境之间相辅相成,共同作用,引起环境共鸣的原则方法.     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础。不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系。无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化。文章综述了几种有效能评价体系的测定技术。     

混凝土碳化深度的灰色预测

混凝土碳化是导致钢筋混凝土结构耐久性损伤的主要原因之一。为了预测混凝土碳化深度,本文建议采用一种基于灰色系统理论的预测模型,该模型可以根据已知的混凝土碳化序列,较精确地预测未来时刻的碳化深度。文章最后以实例说明了该模型的应用。