海洋放线菌AM8发酵条件的优化及抑菌活性物质的初步研究

以海洋放线菌AM8发酵液抑菌物质的活性为评价指标,采用单因素实验对海洋放线菌AM8的基础发酵培养基和发酵条件进行优化,并对抑菌活性物质进行了初步研究。确定最佳培养基为:胰蛋白胨17g·L~(-1),大豆胨3g·L~(-1),蔗糖2.5g·L~(-1),NaCl 5g·L~(-1),K2HPO42.5g·L~(-1),海盐20g·L~(-1);最佳发酵条件为:pH值7,温度28℃,接种量5%,转速200r·min~(-1),发酵时间5d。该抑菌活性物质为中等极性物质,具有良好的耐酸性和一定的热稳定性,在强碱、高温环境下易失活。     

海洋放线菌BM-2菌株产生抑菌物质的发酵条件

海洋放线菌BM-2菌株在不同配方的培养基和不同的发酵条件对进行液体发酵,以植物病原真菌禾谷镰刀菌为指示菌,采用打孔法测定发酵液的抑菌活性,研究其产生抑菌物质的发酵条件.结果认为:海洋放线菌BM-2菌株产生抑菌物质的最佳培养基为可溶性淀粉14 g、乳糖16 g、黄豆粉16 g、磷酸氢二钾3 g、碳酸钙4 g、氯化钾0.4 g,海水1000 mL,初始pH值7.5;发酵条件为接种量7%(体积分数)、温度28 ℃、装瓶量80 mL(250 mL)、转速190 r/min、培养时间5 d.     

鱼腥草多糖提取工艺及抑菌活性研究

以鱼腥草为原料,采用单因素实验和正交实验优化了鱼腥草多糖的提取工艺,并对其抑菌活性进行了研究。确定最优提取工艺条件为:提取温度80℃、料液比1∶40(g∶mL)、提取时间6h,在此条件下,提取率为9.74%。鱼腥草多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌作用,而对枯草芽孢杆菌无明显的抑菌作用。该研究对鱼腥草在食品和药品等方面的进一步开发和应用奠定了基础。     

放线菌YIM31249发酵液萃取物的抗菌活性初步研究

从云南洱源采集的土壤样品中分离到一株放线菌YIM31249,进行摇瓶发酵,然后用乙酸乙酯萃取发酵液,对萃取物进行体外抗菌实验。试验表明：对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(HIC)为0．24mg/mL,最低杀菌浓度(MBC)为1．88mg／mL;对灰霉和黑曲霉的MIC和MBC均为0．022mg／mL。因此,放线菌YIM31249菌发酵液中具有天然抗菌活性物质,且抗菌作用明显,有较广的抗菌谱。     

水稻黄单胞菌生物抑制剂的发酵及条件优化

本研究通过分析不同的培养基条件下海绵放线菌对水稻黄单胞菌的抑菌效果,以获取最优的发酵培养基配方。研究发现7种培养基中,ISP2培养基是最优的海绵放线菌的发酵培养基,添加不同种类和浓度的附加碳源和氯化钠对发酵液的抑菌效果没有明显的改善。由实验结果可知,添加15 g/L硫酸铵的ISP2培养基是用于产活性物质抑水稻黄单胞菌生长的海绵放线菌发酵培养的最佳配方。     

铜绿假单胞菌产抗菌代谢产物发酵条件的优化

以分离的铜绿假单胞菌作为实验菌株,以对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抑制效果及菌体干重为评价指标,采用单因素实验、正交实验优化铜绿假单胞菌产抗菌物质的培养基组分和发酵条件。结果表明:优化的培养基组分为黄豆粉2.5 g·L~(-1)、大豆蛋白胨10 g·L~(-1)、磷酸氢二钠10 g·L~(-1),优化的发酵条件为接种量2%、初始pH值7、发酵时间96 h。     

放线菌MY-048菌株中活性成分的初步研究

从四川绵阳地区的药用植物根际分离筛选到一株放线菌MY—048菌株,其发酵液对几种细菌有抑制作用,尤其对金黄色葡萄球菌的作用效果明显。对发酵液进行稳定性测定,结果表明MY—048的发酵液在中性及酸碱条件下都稳定,在强酸和强碱条件下抑菌活性丧失:发酵液能经受75℃水浴60 min仍保持原来的抗菌活性,温度升高到100℃时活性丧失;对MY—048的生长与活性物质产量进行比较,发现在培养的144 h时活性物质的产量及菌体生长量均达到最高峰;通过硅胶柱层析,制备型薄层色谱,得到一个有活性的化合物,高压液相(HLPC)检测纯度为97%。     

侧柏内生真菌G21代谢产物稳定性及发酵条件优化

[目的]了解侧柏内生真菌G21代谢产物的稳定性,并对其发酵条件进行优化。[方法]不同p H值(2~12)或不同温度(20~120℃)处理G21发酵液,并利用生长速率法测定其抑菌活性变化。采用正交试验法及响应面法对G21发酵条件进行优化。[结果]G21发酵液具有广谱农用抗真菌活性,对苹果腐烂病菌及葡萄白腐病菌抑制作用显著;其发酵液在中性(p H 6~8)及较低温度(50℃)下稳定。优化G21发酵培养基组成为蛋白胨3.1 g/L、葡萄糖11.8 g/L、硫酸镁0.58 g/L、磷酸二氢钾1.0 g/L。[结论]G21发酵液处理过程应避免酸碱及高温,优化得培养基G21发酵产物抑菌活性显著提高。     

大豆乳清红茶菌发酵液抑菌性研究

红茶菌是以红茶和白糖为基料发酵而成的民间传统酸性饮料,对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有明显的抑菌作用。本试验在优化大豆乳清红茶菌基质的基础上进一步研究其抑菌效果,牛津杯抑菌实验表明,添加大豆乳清发酵红茶菌,可有效增强其对供试的抑菌效果,金黄色葡萄球菌的抑菌圈最大26.2±0.6 mm,黑曲霉的抑菌圈最小为4.2±0.4 mm。热稳定性实验和抑菌时间稳定性实验结果说明了大豆乳清红茶菌发酵液的抑菌作用受温度和放置时间的影响,热处理后,其抑菌效果减弱,但还存在抑菌能力;放置8周之前的大豆乳清红茶菌发酵液有一定的抑菌效果且比较稳定。本研究发现金黄色葡萄球菌对该发酵液的某些成分敏感。     

大孔树脂静态吸附番茄内生菌Brevibacillus brevis W4抑细菌成分

[目的]Brevibacillus brevis W4是从番茄茎中分离得到的1株对灰霉病菌有强烈抑制作用的内生菌.为明确其发酵液抑细菌活性,并探索抑细菌物质的大孔树脂吸附条件.[方法]采用管碟法测定了B.brevis W4发酵液对6种病原细菌的抑制活性.并以金黄色葡萄球菌为指示菌,选用大孔树脂对发酵液中的抑细菌活性物质进行静态吸附条件优化.[结果]B.brevis W4发酵液对供试枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、水稻白叶枯病菌、柑橘溃疡病菌、大白菜软腐病菌、姜青枯假单孢杆菌均有抑制活性,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈突出,直径分别为21.7、20.1 mm.大孔树脂AB-8对活性物质的吸附效果最好,其较优的静态吸附条件为上样液pH值为8.0,上样量为树脂质量的15倍,最佳的洗脱液体积分数为40％甲醇.[结论]B.brevis W4发酵液具有抑制细菌作用,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用最强.AB-8可以作为抑细菌活性成分的吸附树脂.     

深海独岛枝芽孢杆菌A493产活性物质特性与发酵条件优化研究

以一株抗菌谱较窄并且稳定拮抗水稻黄单胞菌的深海独岛枝芽孢杆菌(V.dokdonensis)A493为研究对象,研究了其产活性物质特性及发酵条件的优化。A493产抗菌活性物质可以耐受100℃的高温,在pH值4～10和紫外照射环境中活性稳定,可以通过3kDa的超滤管,对蛋白酶不敏感,只能溶解于水和甲醇。酸沉淀和硫酸铵沉淀实验结果排除了活性物质是脂肽类物质的可能性,初步研究显示该活性物质可能是极性较强的水溶性活性小分子新化合物。确定A493最佳发酵条件为:接种菌龄12h、接种量1%、发酵时间48h、发酵温度28℃、培养转速180r·min-1、250mL锥形瓶中的装液量为70mL。优化后,其单位体积发酵液抑菌效果提高了18.7%,活性物质对水稻黄单胞菌的抑菌效价相当于15.6μg·mL-1的标准链霉素。     

白花前胡内生菌的筛选及抑菌活性研究

目的:筛选白花前胡的根中具有抑菌效果的内生菌,利用LC-MS技术鉴定其代谢产物。方法:以微量稀释法评价不同的内生菌株对金黄色葡萄球菌以及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌效果,采用HPLC技术分析菌株以及白花前胡代谢产物的差异,以LC-MS分析技术分析菌株与白花前胡的相同代谢产物。结果:内生真菌MG-1对金黄色葡萄球菌以及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度达到0.059 mg/mL,利用LC-MS鉴定其共有代谢产物,分别为紫花前胡素、珊瑚菜内酯、白花前胡丁素。结论:本实验从富含香豆素类化合物的白花前胡中筛选具有抑菌作用的内生菌,为扩大药用微生物资源,筛选具有抗菌活性的新颖化合物提供了借鉴。     

放线菌TL05-22菌株发酵液的抑菌谱及稳定性

[目的]研究放线菌TL05-22发酵液的抑菌谱及稳定性。以16种植物病原真菌和6种细菌为供试菌,采用菌丝生长速率法、杯碟法测定拮抗放线菌TL05-22发酵液的抑菌谱;以苜蓿尖镰孢根腐病菌为指示菌,杯碟法测定发酵液的传代稳定性、热稳定性、酸碱稳定性及紫外线稳定性。[结果]放线菌TL05-22发酵液对16种植物病原真菌和6种细菌均具有不同程度的抑菌活性,其中供试真菌以对苜蓿尖镰孢根腐病菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径达33.68 mm;供试细菌中以对大白菜软腐病菌的抑菌效果最强,抑菌圈直径达29.12 mm。将发酵液于60~100℃处理30、60 min,抑菌活性没有明显变化;发酵液在pH值6~14时抑菌活性未发生明显变化,但在pH<6条件下抑菌活性明显下降;连续培养10代,发酵液抑菌活性无明显变化。[结论]放线菌TL05-22的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值。     

海南全缘褶萼苔内生真菌的分离及抑菌活性的初步研究

研究了海南全缘褶萼苔的表面消毒条件及其内生真菌TX003菌株发酵液的抑菌活性。结果表明,采用75%乙醇浸泡2min,无菌水冲洗4次,再用5.0%次氯酸钠浸泡5min,无菌水冲洗4次,是海南全缘褶萼苔表面消毒的最佳条件。其内生真菌TX003菌株发酵液具有广谱抑菌活性,对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌抑菌圈直径分别达到17mm、16mm、13mm、8mm、11mm。海南全缘褶萼苔内生真菌TX003可以产生具有抑菌活性的次生代谢产物,为新型抗菌药物的筛选提供了新的途径。     

丙酮提取菠萝皮抑菌物的条件研究

采用正交试验法研究丙酮提取菠萝皮抑菌物质的工艺条件。实验结果表明,提取物对大肠杆菌、黑曲霉、金黄色葡萄球菌具有明显的抑制作用,对桔青霉则无抑制作用。对大肠杆菌和黑曲霉的抑菌效果最佳的提取工艺条件为：料液比1∶30,丙酮浓度75%,提取时间40 min,提取温度70℃。对金黄色葡萄球菌最佳的提取工艺条件为：料液比1∶10,丙酮浓度65%,提取时间40 min,提取温度50℃。在优化条件下,菠萝皮的丙酮提取物对大肠杆菌、黑曲霉、金黄色葡萄球菌的MIC分别为60、100、250mg·m L^-1。     

海洋放线菌S187产抗补体活性物质的发酵工艺优化

海洋放线菌S187的代谢产物具有较好的抗补体活性。以抗补体活性为评价指标,在单因素实验的基础上,采用正交实验优化菌株S187产抗补体活性物质的发酵工艺。确定最佳发酵工艺为:可溶性淀粉20 g·L~(-1),大豆粉35 g·L~(-1),(NH_4)_2SO_4 2 g·L~(-1),NaCl 2 g·L~(-1),K_2HPO_4 0.5 g·L~(-1),CaCO_3 5 g·L~(-1),初始pH值7.5,于28℃、220 r·min~(-1)下发酵7 d。在此条件下,菌株S187代谢产物的抗补体活性为69.35%。     

苦瓜中抑菌成分的提取方法研究

选择不同溶剂提取苦瓜中的抑菌物质,通过抑菌实验,找到合适的提取苦瓜中抑菌物质的方法。实验结果显示,苦瓜中抑菌物质的最佳提取工艺条件为使用85%乙醇作为提取剂,提取温度85℃,索氏提取时间6 h,料液比1∶30(V∶V),浓缩,石油醚脱色,正丁醇萃取,浓缩后以甲醇溶解。在此条件下提取的提取物具有较高的抑菌活性,抑菌效果为对金黄色葡萄球菌大于大肠杆菌;初提物经聚酰胺分离后,50%和70%的乙醇洗脱液很好的保留了抑菌活性,而10%、30%、95%的乙醇洗脱液抑菌效果不明显。定性分析表明,有效的抑菌提取物中同时含有皂苷类、黄酮类、酚类和有机酸等成分。     

解淀粉芽孢杆菌BSK532的发酵条件优化及抑菌活性研究

通过单因素实验和响应面实验对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) BSK532的发酵条件进行了优化。确定最佳发酵条件为：碳源淀粉浓度41.36 g·L^-1、氮源蛋白胨浓度26.13 g·L^-1、pH值7.24、装液量75 mL/500 mL,在此条件下,芽孢数达到195.33×10⁸ CFU·mL^-1,较优化前提高了94.36%;优化后发酵液的粒径分布范围为0～10μm,D₉₀为1.565μm,较优化前(粒径分布范围为0～200μm,D₉₀为95.44μm)大幅减小,减小发酵液粒径可以防止大疆T20植保无人机喷头堵塞;采用平板对峙法测定了优化前、后解淀粉芽孢杆菌BSK532发酵液对6种常见农作物病原菌的抑菌带宽度,优化后的抑菌带宽度较优化前增加了50%～60%,表明提高芽孢数可以增强抑菌作用。为解淀粉芽孢杆菌制剂的开发应用提供了一定的理论基础。     

培养基组成成分对加利利链霉菌AF1发酵过程影响的初步探索

探索影响加利利链霉菌AF1发酵过程的培养基组成成分。碳、氮源试验结果表明菌株AF1能够较好的利用可溶性淀粉和胰蛋白胨。在基础培养基和培养条件不变的前提下,改变可溶性淀粉质量浓度,在质量浓度为3.5%时,菌株AF1的代谢产物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最高,达到15.5 mm。在基础培养基和培养条件不变的前提下,改变胰蛋白的质量浓度,当浓度达到0.25%时,抑菌活性最高,达到13.4 mm。供试的8种氨基酸试验结果表明Arg、Gln和Lys具有明显促进菌体生长的作用,Asn、Phe的促进作用不明显,而其他的氨基酸则表现出对菌体生长无显著效果;在产物合成方面,Arg、Asn、Phe、Tyr、Gln、Lys对产物合成具有较为明显的促进作用,但Met和Cys却表现出对产物合成有抑制作用。不同浓度的各种氨基酸试验结果表明,当基础培养基中Tyr浓度为0.13 mmol/L或者Lys 0.25 mmol/L时菌株生长和活性物质的代谢效果最为明显,100 mL的发酵液中菌体干重和发酵液抑菌活性分别达到0.19 g、14 mm和0.22 g、15.9 mm。     

一株微生物絮凝剂产生菌的筛选、培养条件优化及絮凝实验

从广西大学食用菌废弃物土样中分离出7株絮凝剂产生菌,以发酵液对高岭土悬浮液絮凝效果为指标,衡量其絮凝活性及产絮凝剂能力,经过初筛与复筛,得到1株絮凝剂高产菌F00,初步确定属曲霉属（Aspergillus）,对其产生絮凝剂的条件进行优化并对富营养化湖水进行絮凝实验。确定F00产生絮凝剂的最佳培养基及培养条件为：蔗糖100g,尿素1 g,MgSO4&#183;7H2O 0.5 g,KCl 0.15 g,KH2PO40.08 g,ZnSO4&#183;7H2O 0.01 g,MnSO4&#183;H2O 0.02 g,蒸馏水1000 mL,初始pH值6.5;最佳培养温度为30℃、通气量为80 r&#183;min^-1,F00发酵培养72 h絮凝率最大达到72%。用体积分数2%的F00发酵上清液处理富营养化湖水,10 min后,湖水的澄清度提高70%（OD653去除率达70%）,固形物去除率达62%。