一种基于双重ddPCR的肉制品中牛源性成分的定量分析方法

将低价肉类原料掺入高价肉制品是一种典型的肉类掺假方式，为准确鉴别牛肉及牛肉制品的真伪，建立一种基于双重微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chain reaction，ddPCR）的牛源性成分定量分析方法。通过对14 种动物的Beta-actin单拷贝基因序列进行分析，设计牛源性特异性引物、探针与动物源性成分通用引物、探针并建立双重ddPCR体系，推导出牛源性成分质量与其特异性扩增拷贝数之间的计算公式，对牛源性成分进行定量检测该方法得到牛源性成分质量M牛（mg）与其特异性扩增拷贝数浓度C牛（copies/μL）之间的计算公式为M牛=0.033C牛＋2.37，对已知牛肉质量的混合肉样品与不同部位的牛肉样品进行检测，结果显示牛肉定量检测值与实际质量基本一致。同时拷贝数相对含量可辅助判断肉制品中是否存在非牛源性的其他动物源性成分掺假。对市售样品的检测发现，存在目标肉样含量不达标以及不同程度的动物源性成分等掺假现象，说明该检测方法可为牛肉制品掺假量化判定和混合源性产品分级鉴定提供技术支撑。     

基于实时荧光定量PCR和数字PCR的肉制品中牛源性成分检测

为了能够快速有效的检测出肉制品中牛源性成分,采用实时荧光定量PCR和数字PCR检测方法,检测肉制品中牛源成分。先依据牛肉单复制基因组特异区域,通过多序列比对设计特异性引物与探针,再利用苯酚-氯仿法提取标准品基因组DNA,确立实时荧光定量PCR和数字PCR两种方法的反应条件,测定DNA模版纯度及浓度可得实验提取的DNA溶液不含杂质,在此基础上构建牛源性成分荧光定量PCR标准曲线,检测两种方法的特异性、抗干扰性与肉制品中牛源性成分。分析实验结果可知,引物与探针在两种方法中均对牛肉有荧光信号显示,两种方法具有牛源性特异性,检测数值与实际样品数值基本一致,且两种方法抗干扰性较好,当存在其他肉类干扰时,仍可准确监测出牛源性,两种方法的最大误差分别为3.8%和4.0%;可定量检测不同肉制品中牛源性成分,两种方法均未检测出样品10牛肉丸中牛源性成分,验证了市面上确实存在假肉情况。说明所用方法能够准确、快速地检测出肉制品中的牛源性成分,适用于市场中肉制品的检测,对保障消费者的权益和健康具有十分重要的意义。     

普通聚合酶链式反应鉴定牛肉及其制品中的牛源性成分

依据牛种属的线粒体细胞色素b(cytochrome b,Cytb)基因上的保守序列设计牛源特异性引物对,建立一种特异性强、灵敏性高、耗时短的鉴定食品中牛源性成分的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。选取牦牛、水牛、黄牛品种及羊、猪、鸡、鸭、鹅、兔、马、驴、鱼、大豆、玉米等动植物源成分进行特异性试验。结果显示:所建立的方法高度特异于牛源性检测,其他非牛动植物源成分均无扩增条带。采用常见的牛品种进行灵敏性试验,结果显示所建立的方法可检测到的最低牛DNA量为0. 2 pg;将牛肉分别与猪肉、驴肉、羊肉、大豆组织混合进行PCR测定,结果表明最低检测限为鲜样品含0. 01%质量分数的牛源成分,高压121℃、0. 1MPa,20 min处理样品含0. 01%质量分数的牛源成分。对市售食品中牛源性成分检测结果与现行PCR牛源性成分检测标准方法的检测结果 100%一致。     

肉制品中牛源性成分多重实时荧光PCR检测 方法的建立及初步应用

目的建立肉制品中牛源性成分的荧光PCR检测方法。方法根据牛特异性线粒体DNA片段,设计合成两对引物,以生、熟牛肉及超市牛肉加工品为材料,建立肉制品中牛源性成分的多重实时荧光PCR检测方法,并用该法与国标法同时对市售的25份肉制品同时进行检测,通过对其他种类的肉源DNA进行扩增验证方法的特异性;对含有不同比例牛肉成分的DNA样本进行检测确定检出限。结果该方法可成功检测出肉制品中的牛源性成分。在25份肉制品检测中,与国标法检测结果一致。该法的特异性为100%,灵敏度检测线为1%。结论本研究成功建立牛源性肉制品的检测方法,该方法快速简便,且具有较高的特异性和灵敏度,可用于市售肉制品中牛源性成分的鉴定。     

环介导等温扩增技术快速检测肉及肉制品中的牛源性成分

本文以牛源性线粒体细胞色素B(cyt B)基因为模板,采用软件Primer Explorer Version 4设计并筛选出LAMP特异性扩增引物,通过反应体系优化建立了肉及肉制品中牛源性成分的环介导等温扩增技术检测方法,对该方法的灵敏度、特异性以及稳定性进行了验证,同时采用国标方法和商品化检测试剂盒对市售的12种牛肉及牛肉制品进行对比检测。结果表明该检测方法具有高灵敏度、高特异性和高稳定性,适用于实际的生鲜肉制品及加工肉制品中牛源性成分的鉴定。     

基于荧光定量PCR法鉴定婴幼儿配方羊奶粉中牛源性成分

婴幼儿配方乳粉的配料表中必须如实标明使用的乳制品原料的动物性来源。建立了以线粒体DNA12SrRNA为目标基因,用荧光定量PCR的方法快速鉴定婴幼儿配方羊奶粉中牛源性成分的方法,并采用此方法检测了20个婴幼儿配方羊奶粉。其中2个样品未检出牛源性成分,18个样品检出牛源性成分。此方法可用于婴幼儿配方乳粉标签标识的日常监管。     

Real-time PCR和双向电泳联合鉴别婴幼儿配方羊乳粉的乳源成分

为实现对婴幼儿配方羊乳粉中乳源成分的准确判别,将基因检测作为初筛方法,以蛋白质双向电泳作为确证方法,研究该技术路线下对乳源成分检测的灵敏度、准确性等指标。优化建立的基于嗜热蛋白酶的一步式DNA提取法,仅需通过温控反应在17 min内完成DNA步骤,极大缩短了样品前处理时间;建立的快速实时聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,real-time PCR）程序仅需28 min 26 s即可完成检测。通过牛（家牛、水牛、牦牛）、羊（山羊和绵羊）、山羊、绵羊单一乳源成分,以及哺乳动物内参照检测体系,可以实现对低至10～100 pg/μL DNA的检测,对混合样品中牛源性成分检测的灵敏度可达1%（m/m）。然后结合双向电泳技术进一步确证产品的蛋白成分来源,可以判定牛基因检测阳性的样品是否含有来源于牛乳酪蛋白或乳清蛋白,进而对样品的真实性进行判定。real-time PCR法和双向电泳技术联合检测解决了以往婴幼儿配方乳粉检测中因配料复杂乳源判别困难的瓶颈问题。     

肉制品中牛源性成分荧光定量聚合酶链式反应方法的建立与应用

为了能够快速准确检测出市场中掺假牛肉制品,采用Taq Man探针法,建立一种用于快速有效检测牛肉制品中牛源性成分的荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。选择Gen Bank中牛β-actin基因的保守序列,设计并合成特异性引物及Taq Man探针,以构建的p MD-18T-96-beef质粒为标准品,优化反应条件。结果表明:重组质粒标准品经PCR、测序和酶切鉴定正确,建立的标准曲线Ct值与模板拷贝数对数值之间呈良好的线性关系,相关系数为0.98,斜率为-3.345,敏感度为46.1 copies/μL。特异性实验表明,用该方法检测猪肉、羊肉、鸡肉、鸭肉、鹅肉等非牛肉制品结果均为阴性。批内重复实验变异系数均小于0.98%,批间重复实验变异系数均小于0.33%,表明该方法重复性良好。用建立的荧光定量PCR方法与SN/T 2051—2008《食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时PCR法》同时对市场上40份牛肉加工品进行检测,结果显示,本方法检测有3份样品为牛源成分阴性,与SN/T 2051—2008方法检测结果相同。可见,本实验建立的荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速的特点,适用于检测市场中肉类掺假的行为。     

牛β-乳球蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制及检测应用

研制了一种可快速检测羊乳及制品中牛源β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-lg)的胶体金免疫层析试纸条。通过杂交瘤技术制备牛β-lg特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),利用柠檬酸钠还原氯金酸,形成30 nm胶体金颗粒,并用于标记牛β-lgmAb。采用竞争法研制免疫层析试纸条,将胶体金标记的牛β-lgmAb包被于金标垫,牛β-lg和羊抗鼠IgG标记于硝酸纤维素膜分别作为检测线(T线)和质控线(C线),牛β-lg和二抗的最佳包被浓度均为1.0 mg/mL。制得的单克隆抗体纯度都在90%以上,效价均在10000以上且特异性较好。该试纸条对牛β-lg的检测限(limit of detection,LOD)值为3.13μg/mL,对牛源α-CN,牛源β-CN,牛源κ-CN,牛源α-LA,BSA均未产生交叉反应,对脱脂羊乳粉中掺杂脱脂牛奶粉的LOD值为5%,并用该方法对市售羊奶及配方羊奶粉进行分析,检测结果与商品化的ELISA试剂盒一致。该方法前处理快速简单,可在5 min内对牛β-lg进行检测,可用于羊乳制品的现场快速检测。     

重组酶介导等温扩增技术快速检测牛肉及 牛肉制品中的牛源性成分

目的建立重组酶介导等温扩增技术快速检测牛肉及牛肉制品中牛源性成分的方法。方法应用重组酶聚合酶等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),根据牛源性线粒体细胞色素b(Cytb)基因序列设计筛选了一对可用于扩增的引物,建立基于重组酶介导的等温扩增技术检测方法,并对该方法进行扩增温度、特异性和灵敏性验证。结果 40℃等温扩增条件下,所设计的引物的特异性为100%,该检测方法的灵敏性可达0.1 ng/μL。结论本研究成功建立了牛源性肉制品的等温扩增方法,该方法快速简便,具有较高的特异性和灵敏性,适用于市售生鲜肉制品及加工肉制品中牛源性成分的鉴定。     

钝顶螺旋藻奶粉的研制

螺旋藻粉经特殊处理所得分散性好,风味清新的螺旋藻液,与鲜牛乳及其他原料混合,可制成具有保健功能的适合各种人群的螺旋藻奶粉。     

低乳糖奶粉的研制

研究了低乳糖奶粉的制作,通过乳糖酶的添加量、乳糖酶的水解温度、水解时间及水解时的pH对乳糖水解率、牛乳中微生物的影响,确定了低乳糖奶粉的水解条件;并对工艺条件进行了讨论。     

关于制定新疆驴乳和驴乳粉地方标准的研究

驴乳具有蛋白质中乳清蛋白比率高，低脂肪、低胆固醇，富舍不饱和脂肪酸等营养特点，有较大的开发利用价值，新疆已在全国率先推出了驴乳粉产品。论述了制定驴乳及驴乳粉地方标准的必要性；根据对驴乳和驴乳粉化学成分的测定结果，参照牛乳和乳粉的相关国家标准和行业标准，提出了制定《生鲜驴乳收购标准》及《驴乳粉和调味驴乳粉》两个地方标准的建议；并对标准中涉及的名称定义、技术要求、项目设定、技术指标等内容提出了具体意见。     

复方SOD奶粉的研究

介绍了复方SOD奶粉的配方成分、设计依据、工艺流程，同时进行了该配方的动物喂养试验，即①小鼠急性毒性试验；②果蝇生存试验；③抗氧化功能试验；④免疫调节作用试验；并对其抗衰老、提高机体免疫力的功能特性进行了讨论。结果表明，复方SOD奶粉除了适合大多数人群外，尤其适合中老年人与脑力、体力疲劳过度者。     

模拟母乳及婴儿配方奶粉的研究

介绍了人乳中的主要功能因子及其对婴儿的生长发育所具有的生理意义。比较、分析了现阶段婴儿配方奶粉与人乳成分中存在的差别及不足，并针对婴儿的生长特点及现阶段生产技术，对婴儿配方奶粉的生产及发展进行了叙述。     

近红外快速检测奶粉乳清粉成分研究

采用Perten8620近红外奶粉分析仪检测奶粉的近红外光谱特性，建立了奶粉近红外检测的校准模型。结果表明，近红外检测技术无需称重和化学试剂，可在1min以内快速检测奶粉和乳清粉的蛋白、脂肪、水分等指标，其准确性和精度可以达到在国际允许的误差范围内。根据近红外技术可能在短时间内收集大量样品的光谱图，开发了新检测项目的校准曲线。     

全脂乳粉和脱脂乳粉在1kHz～10MHz下的介电特征研究

分别研究了各4种不同品种的全脂乳粉和脱脂乳粉在1kHz～10MHz波段的介电特性。结果发现:随着频率的增加,全脂乳粉和脱脂乳粉的ξ’和ξ″值呈单调递减趋势;全脂乳粉的ξ’和ξ″值都高于脱脂乳粉,相同类型乳粉各品种间的ξ’和ξ″差异不大;全脂乳粉的ξ″值在103～105Hz频率段减小趋势明显,且ξ″值的对数与频率的对数成线性反比关系,而脱脂乳粉无此规律;全脂乳粉和脱脂乳粉的穿透深度Dp随频率的提高而减小,两类乳粉的介电特性差异可能与它们各自的脂肪和乳糖含量有关。     

Flavor Variability and Flavor Stability of U.S.-Produced Whole Milk Powder

ABSTRACT:  Flavor variability and stability of U.S.-produced whole milk powder (WMP) are important parameters for maximizing quality and global competitiveness of this commodity. This study characterized flavor and flavor stability of domestic WMP. Freshly produced (<1 mo) WMP was collected from 4 U.S. production facilities 5 times over a 1 y period. Each sample was analyzed initially and every 2 mo for sensory profile, volatiles, color, water activity, and moisture through 12 mo storage. Selected volatiles were quantified using solid phase microextraction (SPME) with gas chromatography/mass-spectrometry: dimethyl sulfide, 2-methylbutanal, 3-methylbutanal, hexanal, 2-heptanone, heptanal, 1-octen-3-ol, octanal, 3-octen-2-one, and nonanal. Multiple linear regression with backwards elimination was applied to generate equations to predict grassy and painty flavors based on selected volatiles. All WMP were between 2% and 3% moisture and 0.11 and 0.25 water activity initially. WMP varied in initial flavor profiles with varying levels of cooked, milk fat, and sweet aromatic flavors. During storage, grassy and painty flavors developed while sweet aromatic flavor intensities decreased ( P  < 0.05). Painty and grassy flavors were confirmed by increased levels ( P  < 0.05) of lipid oxidation products such as hexanal, heptanal, and octanal. Hexanal, 2-heptanone, 1-octen-3-ol, and nonanal concentrations were best predictors of grassy flavor ( R ²= 0.38,  P  < 0.0001) while hexanal, 2-methylbutanal, 3-methylbutanal, octanal, and 3-octen-2-one concentrations were best predictors of painty flavor ( R ²= 0.61,  P  < 0.0001). These results provide baseline information to determine specific factors that can be controlled to optimize U.S. WMP flavor and flavor stability.     

水苏糖对乳制品中微生物的影响

研究了水苏糖对消毒乳、奶粉及酸奶中微生物的影响，结果表明：在消毒乳中添加水苏糖≤1％时，对消毒乳的微生物学指标无明显影响；在奶粉中添加水苏糖≤3％时，对奶粉的微生物学指标无影响，在酸奶中添加水苏糖加量≤5‰时，对酸奶的乳酸菌数无明显影响。     

碳氮稳定同位素鉴别有机奶粉

本文以有机奶粉和非有机奶粉为研究对象,以有机奶粉和非有机奶粉的碳稳定同位素比值和氮稳定同位素比值为研究目标,探索有机奶粉和非有机奶粉的碳、氮稳定同位素组成的差异性。研究结果显示,有机奶粉的碳稳定同位素比值(δ~(13)C)整体趋势更负于非有机奶粉的δ~(13)C值,有机奶粉的氮稳定同位素比值(δ~(15)N)稍低于非有机奶粉的δ~(15)N值。尽管两种样品的δ~(13)C值和δ~(15)N值的数据范围有交叉,但是根据统计分析,有机奶粉的δ~(13)C值和δ~(15)N值与非有机奶粉的δ~(13)C值和δ~(15)N值具有差异性(p0.05)。有机奶粉与非有机奶粉δ~(13)C值和δ~(15)N值的差异性主要受牛奶来源的影响,主要与动物的饲料、牧场土壤及肥料等有关。研究结果虽然经有限的样本获得,但是该方法对监管有机食品的真实性具有一定的参考价值。