小鼠脾淋巴细胞辐射死亡与凋亡之间的关系

探讨细胞凋亡在小鼠脾脏辐射损伤与重建中的作用及其机制,为急性放射病的防治提供依据.用原位末端标记、DNA电泳和免疫组化技术观察经2～8Gy不同剂量γ射线整体照射后,小鼠脾脏淋巴细胞凋亡的动态变化过程和Bax、Bcl-2蛋白在其中的作用.结果表明,(1)照射后早期淋巴细胞凋亡率迅速增加,如6Gy照射后4h和1d凋亡率分别为对照值的4.9和9.7倍;凋亡率还随照射剂量的增加而迅速升高,照射后8h当照射剂量为2、4、6、8Gy时,凋亡率分别为对照值的3.7、5.4、6.2和8.3倍.(2)透射电镜观察表明,6Gyγ-线照射后,小鼠脾脏淋巴细胞出现早、中、晚期典型凋亡细胞的形态学特征.DNA凝胶电泳显示6Gy照射后4和6h,脾脏淋巴细胞出现特征的DNA梯形谱;末端标记法显示6Gy照射后4h凋亡率约为照前值的3.4倍.(3)照射后Bax、Bcl-2蛋白的异常表达证实两者在淋巴细胞凋亡的调控中起重要作用.细胞凋亡参与了小鼠脾脏辐射损伤与修复的全过程,Bax和Bcl-2蛋白对淋巴细胞凋亡的调控起重要作用.     

3Gy全身辐射对小鼠小肠粘膜上皮内淋巴细胞数量和功能？…

采用昆明种小鼠３Ｇｙ全身照射为模型,分离培养照后８－１５ｄ共６个时相点全小肠幕 皮内淋巴细胞,并对其数量,细胞增殖活力、细胞毒力、ＴＮＦ－α和ＴＧＦ－β分泌水平进行检测。结果表明小肠上皮内淋巴细胞数量下降,增殖活力和细胞毒力明显受抑,表现为照后８ｈ下降,７２ｈ达低值,上皮内淋巴细胞分泌ＴＮＦ－α和ＴＧＦ－β显著增多,表现为照后８ｈ增高,７２ｈ达峰上肠上皮内淋巴细胞数量减少和功能降低成为全身放射损伤     

低剂量X射线辐射对BALB/C小鼠免疫系统的影响

为评估低剂量辐射对健康机体产生的生物学风险,检测了低剂量X射线照射对BALB／C小鼠免疫系统的影响。采用X射线全身照射,剂量分别为0、0．39、0．55和1Gy,剂量率为0．2Gy／min,照射24h后取血及器官,用流式细胞仪检测免疫细胞周期和凋亡的变化,用重量法得到胸腺和脾脏指数。发现照射后小鼠的外周血淋巴细胞、胸腺细胞和脾脏淋巴细胞的周期被阻滞在G0—G1期;外周血淋巴细胞和胸腺细胞的凋亡比例随剂量的增大而增大,但是脾脏淋巴细胞的凋亡随着剂量的增大而减小;胸腺和脾脏指数随着剂量的增大而减小。故低剂量x射线全身照射可引起试验动物的免疫细胞周期和凋亡比例发生变化,对其造成一定的损伤;对小鼠免疫系统的影响因器官而异。本实验可为辐射防护提供实验依据。     

小鼠全身照射后辅佐细胞与脾淋巴细胞间的相互作用

小鼠全身照射后,分别获取腹腔巨噬细胞、脾辅佐细胞及脾淋巴细胞,观察它们之间的相互作用。结果表明：７５ｍＣｙ照射可增强ＣｏｎＡ刺激的淋巴细胞增殖反应２．０Ｇｙ照射使其明显降低。５次细胞贴壁去除辅佐细胞后,其对ＣｏｎＡ的反应性明显减弱,并且受低剂量照射后的腹腔巨噬细胞和脾辅佐细胞可以增强受低剂量照射后的Ｔ淋巴细胞的增殖反应及ＩＬ－２的产生。     

一种辐射防护中药组方对小鼠脾脏辐射损伤的保护作用

探讨由黄芪、刺五加、山药、葡萄籽及酸枣仁提取物混合组成的一种辐射防护中药组方(简称防辐组方)对辐射损伤小鼠脾脏的影响及保护作用。实验小鼠随机分为5组：对照组、模型组、防辐组方低,中,高剂量组(500 mg/kg、1 000 mg/kg、2 000 mg/kg)。6.5 Gy ⁶⁰Co γ射线一次性全身照射建立辐射损伤模型。观察各组小鼠脾脏系数、脾脏组织病理学形态、Caspase-3,Caspase-9及细胞色素C活性、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及P53蛋白表达、脾脏T淋巴亚群CD4⁺、CD8⁺百分比、CD4⁺/CD8⁺比值及各组脾脏细胞DNA损伤程度等指标的变化情况。实验结果显示：与模型组比较,给药组小鼠的体重及脾脏系数均有所增高。其中,中剂量组和高剂量组增高最为显著(p<0.01或p<0.05);给药组小鼠脾脏中的CD4⁺、CD8⁺百分比、CD4⁺/CD8⁺比值及Bcl-2...     

X射线低剂量多次辐射对小鼠外周血淋巴细胞的影响

为了评估低剂量多次辐射对健康机体产生的生物学风险,检测了X射线多次照射对BALB/c小鼠免疫系统的影响.采用X射线全身多次照射,第1天照射0.07 Gy,之后每天照射0.08 Gy共12 d,剂量率0.2 Gy/min,累积剂量为0、0.07、0.23、0.39、0.55、0.71、0.87和1.03 Gy时取样.照射24 h后取血,用流式细胞仪检测外周血中免疫细胞周期和死亡的变化.结果表明,外周血淋巴细胞的周期在0.39和1.03 Gy时,被阻滞在G2/M期,在0.07、0.23、0.71和0.87Gy时,被阻滞在G0/G1期;细胞的死亡随着累积剂量的增加而增加,在0.71Gy时达到峰值.经过X射线多次全身照射小鼠后,可引起外周血淋巴细胞周期和死亡比例发生变化,符合线性平方模型,造成其免疫系统一定的损伤.     

浓缩铀内污染对小鼠脾淋巴细胞DNA损伤修复的作用

研究了不同水平浓缩铀(235UO2F2)对淋巴细胞DNA损伤修复的作用及其机理.应用紫外线诱导的非程序DNA合成 (UDS) 检测,观察浓缩铀(235UO2F2)内污染对小鼠脾淋巴细胞DNA损伤修复的影响.结果表明, 浓缩铀摄入量为0.1-20μg/kg 体重时, 脾淋巴细胞紫外线诱导的UDS显著高于对照组 (p<0.05或p<0.01); 浓缩铀内污染12d时, 脾淋巴细胞未经紫外线照射的UDS显著增加 (p<0.05或p<0.01); PHA组脾淋巴细胞紫外线诱导的UDS显著低于未加PHA组.在一定剂量范围内,低剂量浓缩铀内污染对淋巴细胞DNA损伤修复功能具有明显的刺激作用,并且该剂量范围明显大于外照射;浓缩铀内污染对淋巴细胞DNA具有持续的损伤作用,继而诱发细胞DNA修复功能的增强;PHA刺激但未增殖的脾淋巴细胞DNA损伤修复功能明显减低.     

小剂量照射后小鼠脾巨噬细胞对脾淋巴细胞功能的…

采用昆明小鼠，小剂量Ｘ射线全身照射５０ｍＧｙ￣２５０ｍＧｙ，剂量率为１２．５ｍＧｙ／ｍｉｎ。停照后不同时间处死动物，取出脾脏，用贴壁法分离脾巨噬细胞（ＭΦ）和淋巴细胞，检测受照后脾ＭΦ与受照的脾淋巴细胞功能变化的关系。结果表明，小剂量辐射可使脾ＭΦ功能增强，主要表现在７５ｍＧｙＸ射线全身照射后，脾ＭΦ对脾淋巴细胞ＣｏｎＡ（刀豆蛋白Ａ）反应增强，ＩＬ－１（白细胞介素１）分泌增多。受照的脾ＭΦ只对受照     

小剂量照射后小鼠脾巨噬细胞对脾淋巴细胞功能的影响

采用昆明小鼠，小剂量Ｘ射线全身照射５０ｍＧｙ～２５０ｍＧｙ，剂量率为１２．５ｍＧｙ／ｍｉｎ。停照后不同时间处死动物，取出脾脏。用贴壁法分离脾巨噬细胞（Ｍφ）和淋巴细胞，检测受照后脾Ｍφ与受照的脾淋巴细胞功能变化的关系。结果表明，小剂量辐射可使脾Ｍφ功能增强，主要表现在７５ｍＧｙＸ射线全身照射后，脾Ｍφ对脾淋巴细胞ＣｏｎＡ（刀豆蛋白Ａ）反应增强，ＩＬ－１（白细胞介素１）分泌增多，受照的脾Ｍφ只对受照的脾淋巴细胞增强其ＣｏｎＡ反应，而对未受照的脾淋巴细胞无显著影响；未受照的脾Ｍφ也不能增强受照的脾淋巴细胞功能     

不同剂量X射线照射对小鼠胸腺、脾脏、肝脏细胞凋亡及p53基因表达的影响

采用X射线全身照射小鼠,在普通光镜及流式细胞仪（FCM）下检测细胞凋亡,用免疫组织化学方法检测p53蛋白的表达。结果表明,照射剂量在2-8Gy范围内,脾脏、胸腺细胞凋亡率随照射剂量的增加而升高,细胞周期阻滞于G1期,凋亡率最高在照后8-12小时。肝脏细胞凋亡率最高峰出现在照后24小时,S期和G2／M期细胞阻滞增多。脾脏、胸腺细胞中p53蛋白表达阳性,肝脏细胞中p53蛋白表达阴性。     

放射性核素89Sr诱发K562癌细胞凋亡的放射毒理效应的分子机理研究

采用分子病理和定量病理技术研究放射性核素89Sr诱导的K562癌细胞凋亡、剂量效应关系和重要相关基因bcl-2和bax在其中的表达.结果表明,K562细胞经89Sr作用达6h和24h,提取DNA,琼脂糖凝胶电泳图谱上出现典型的"阶梯状"区带,伴有"拖尾",而对照组未见"阶梯状"区带;荧光双标记流式细胞仪法定量检测见89Sr作用6、9、12、24和48h后,K562细胞凋亡率、K562细胞坏死率均较对照组有明显的升高(p<0.01).免疫组织化学染色显示,对照组K562细胞中bcl-2 、bax均有表达,bcl-2表达阳性细胞率82.8%,bax表达阳性细胞率44.4%, bcl-2/bax比值1.86,89Sr作用24h后的K562细胞中, bcl-2表达阳性细胞率31.4%,bax表达阳性细胞率38.2%, bcl-2/bax比值0.82,与对照组相比,差异具有显著性(p<0.05);结果显示,放射性核素89Sr照射K562细胞后,细胞凋亡与细胞坏死并存,且89Sr诱导K562细胞的凋亡可能是通过bcl-2 表达蛋白降低,bcl-2/ bax比值下降而调控的.     

Bcl-2/Bax基因表达对低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

应用密度梯度离心法分离小鼠睾丸组织不同类型生精细胞，流式细胞术检测其细胞凋亡，免疫组织化学方法观察生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达。结果表明，0．025～0．2GyX射线全身照射后，小鼠睾丸组织生精细胞凋亡具有明显的细胞种类规律性。在较低剂量(0．025和0．05y)时，以精原细胞凋亡为主，随剂量增加(0．075—0．2Gy)逐渐累及精母细胞，并且前者凋亡率明显高于后者，很少累及精子细胞和精子。Bax蛋白表达主要见于精原细胞和精母细胞，前者阳性率高于后者，并且随照射剂量增加，阳性率逐渐升高，而精子细胞和精子阳性率较低；Bcl-2蛋白表达主要见于精子细胞和精子，而精原细胞和精母细胞阳性率较低。提示，Bcl-2和Bax基因表达的相互调节是低剂量电离辐射选择性诱导生精细胞凋亡的重要原因之一，这也为深入探讨低剂量电离辐射诱导生精细胞适应性反应的凋亡机制，提供了更深层次实验证据。     

人成纤维细胞株辐射诱导凋亡与辐射敏感性相关性研究

为探讨不同放射敏感性人成纤维细胞株经辐射诱导后的凋亡情况,应用Ｔｕｎｅｌ法及流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞凋亡,以＾６０Ｃｏγ射线处理细胞。结果表明（１）＾６０Ｃｏγ射线照射后,集落形成实验表明,６号细胞株辐射敏感性高于８号细胞株。（２）Ｔｕｎｅｌ法和流式细胞术检测结果表明,凋亡率与辐射敏感性成正比,同样反映出６号细胞株辐射敏感性高于８号细胞株。（３）检测还发现,凋亡率与辐射剂量和辐射后时间成正比。     

人离体血与整体照射诱发淋巴细胞微核率的研究

报道１例淋巴瘤病人进行全身分次Ｘ射一照射后，发现离全与整体照射诱发的微核率无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。经回归分析表明，不仅配合的模式相同，而且同一指标的回归系为九也相当接近。结果表明，在一定的剂量范围内，离体与整体照射的微核剂量效应相同，这使人外周血淋细胞微核率有可能作为估算事故受照人员辐生物剂量的指标。     

荧光法检测辐射所致肿瘤细胞DNA链断裂与3-氨基苯甲酰胺对重接修复的抑制

采用简化的DNA解旋荧光法(FADU),检测HeLa S3细胞在受到γ射线照射后的DNA链断裂,在10 Gy以内,剂量效应曲线呈线性。ADP-核糖基转移酶特异性抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3AB),在无毒浓度下可以抑制HeLa S 3细胞DNA链断裂重接,并可降低H3La S3细胞照后活存率。3AB单独与HeLa S 3细胞保温,不造成DNA链断裂,同时未见对细胞有毒性反应。3AB可以作为有希望的放疗增敏剂深入研究。     

哺乳动物细胞DNA单链断裂与重接修复的研究

本文运用羟基磷灰石柱层析法对~(60)Coγ线引起的中国田鼠肺细胞(CHL)和615小鼠离体脾细胞DNA单链断裂和重接进行了研究。在1～10Gy剂量范围内,两种细胞DNA单链断裂的程度均与剂量呈线性关系。两种细胞每单位剂量诱发的DNA单链断裂的数量是相似的。CHL细胞DNA单链断裂能迅速进行重接,其重接速率和程度与剂量呈负相关。同时,单链重接与培养条件也密切相关,CHL细胞在无血清培养液中比在含小牛血清培养液中其DNA断链重接速率慢、程度低,而离体的小鼠脾细胞DNA断链在无血清培养液中甚至未见重接修复。     

G-CSF促进造血功能恢复及其机理的研究

研究了粒细胞集落生长因子（Ｇ－ＣＳＦ）受辐射小鼠造血功能恢复的作用,并对机理进行了实战探讨。结果表明：Ｇ－ＣＳＦ不仅可以促进受辐射小鼠外周血细胞的恢复,促进脾脏内源性脾结节的形成,而且可以增加骨髓细胞含量和促进骨髓细胞巨噬系造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）的形成,提高受辐射小鼠的生存率,其促进辐射后机体造血功能恢复的机理是通过刺激照射后残余造血干细胞的增殖、分化,该过程需要一段较长的时间,而不是抑制照射