超高压对高产洛伐他汀红曲霉菌株的诱变选育

利用超高压对红曲霉出发菌株进行诱变处理,并基于粗糙脉胞菌对洛伐他汀的生物敏感性,对菌株进行初筛,再通过HPLP法检测其发酵液体浓度含量进行复筛。结果表明,培养13 d的菌株处于对数生长期,适宜于试验;压力值为200 MPa时能获得最大的诱变率;成功选育出一株高产洛伐他汀的突变菌株,其抑菌圈直径高达25 mm,比对照高出42.9%;洛伐他汀产量高达3.43 mg/mL,比对照高出52.4%。     

洛伐他汀转化菌株的筛选及发酵条件

利用薄层层析法和HPLC法对 30 0株放线菌进行筛选 ,结果发现一株菌ST4 8对洛伐他汀有转化作用 .研究其菌龄、菌体干重、分批加入底物及底物诱导等条件对转化率的影响表明 ,菌株ST4 8在预培养基中培养 4 8h后接入转化培养基 ( 5 %接种量 ) ,此时菌体量最高 ,加入 0 .3mL底物后 ,继续培养 4 8h转化率最高 ( 2 0 .78% ) .一次性加入底物和分批加入底物的转化率分别为2 0 .0 2 %和 2 0 .0 8% ,并且这种转化作用不需要底物诱导     

双重抗性筛选辅酶Q10高产菌株

以米曲霉（Aspergillus oryzae）Asp11为出发菌株,利用紫外线诱变处理,以制霉菌素和维生素K₃双抗性为筛选标记,获得制霉菌素抗性突变株Asp11-N006和制霉菌素及维生素K₃双重抗性突变株Asp11-N006-V01,其合成辅酶Q₁₀的能力较出发菌株显著提高。Asp11-N006和Asp11-N006-V01的辅酶Q₁₀产量分别为28.27mg/L和38.46mg/L,较出发菌株分别提高了0.34倍和0.82倍,且遗传性状稳定。     

超高压对洛伐他汀生产菌株的诱变研究

为了选育出生产用的高产洛伐他汀菌种,利用超高压对土曲霉出发菌株进行诱变处理,并基于粗糙脉胞菌对洛伐他汀的生物敏感性,对菌株进行初筛,再通过HPLC法检测进行复筛.研究表明,培养3d的菌株处于对数生长期,适宜于试验;压力值为200MPa时能获得最大的诱变率.成功的选育出一株高产洛伐他汀的突变菌株,其抑菌圈直径达25.5mm,比对照高出37.8%;洛伐他汀产量达2.89mg/g,比对照高出18.9%,这一突变菌株具有挖掘潜力,并用于工业生产.     

高通量筛选葡萄糖酸钙高产菌株

以黑曲霉为研究对象,建立了高通量筛选葡萄糖酸钙高产菌株流程。结果表明:紫外线-LiCl复合诱变处理的黑曲霉孢子悬浮液,高通量筛选得到4株高产菌株,传代后发酵性能稳定。菌株P-9,其发酵液葡萄糖酸钙含量达到23.04 g/100 mL,比原始菌种高5.86 g/100 mL。相较于传统摇瓶发酵筛选工作量大,周期长,该方法显著提高了筛选效率。     

剑南春酒曲中高产洛伐他汀菌株的选育

研究从剑南春中酒曲中选育到一株高产洛伐他汀的霉菌。结合菌株的形态、生理生化特征和18Sr DNA基因序列分析该菌株定性为紫红曲霉。通过固态发酵条件优化得出该菌株在温度30℃,培养10天,外加葡萄糖浓度1%,蛋白胨浓度1.5%时,该紫红曲霉菌株产洛伐他汀最高,可达135mg/kg。     

高产洛伐他汀红曲霉氮离子束诱变育种

为了提高洛伐他汀产量,以红曲霉M14为出发菌株进行N+束诱变。诱变剂量分别为:78×1013、130×1013、182×1013、234×1013N+/cm2,通过高效液相色谱检测诱变菌株发酵产物中洛伐他汀的含量,筛选正突变菌株。结果显示,诱变剂量为130×1013N+/cm2时表现出相对较高的正突变率。最优诱变菌株M50-2洛伐他汀产量4.42 mg/g,相对于出发菌株提高70%。对其进行12次传代培养,发现产洛伐他汀的能力下降了2.3%,表现为良好的遗传稳定性,该菌株具有潜在的应用价值。     

高产洛伐他汀红曲霉复合诱变育种

为了提高洛伐他汀的产量,对红曲霉进行了紫外线与硫酸二乙酯复合诱变处理,并利用粗糙脉孢菌对洛伐他汀的敏感性进行初筛,再通过HPLC法测定其发酵液中洛伐他汀的产量进行复筛。最终得到一株稳定高产的目的菌株,命名为Monascus sp.UV-D-9。其洛伐他汀产量达到(0.289±0.02)mg/m L,相对于出发菌株提高了82.9%。Monascus sp.UV-D-9是一株优良的洛伐他汀生产菌株,有一定的应用价值。     

黑曲霉高产菌株的选育

以高能电子和N—甲基—N'—硝基—N—亚硝基胍为诱变剂,As3.4309(UV—11)的变异株86—1—1和86—3—1为出发菌株,进行单因子和复合因子处理,选育出了糖化酶活力较高的变异株C—1—3C—9—11、P—5—1、P—5—7,并对突变株产酶条件及C—1—3菌株产酶特性进行了探讨。     

高产木聚糖酶菌株的诱变筛选及其产酶性质

以青霉M1-1为出发菌株,经过紫外诱变和透明圈筛选得到两株遗传性状稳定的高产木聚糖酶菌株M128和M195,同时对其产酶特性进行了研究。结果表明,M128和M195所产木聚糖酶的最适pH值分别为6．0和5．0,最适反应温度分别为55℃和45℃,M128所产木聚糖酶的温度和pH稳定性以及对底物的亲和性均比M195好。     

氮离子入法筛选ε-聚赖氨酸高产菌株

研究氮离子注入法诱变选育ε-聚赖氨酸高产菌株.本文从土壤筛选的菌株TS02出发,通过注入不同剂量30 keV氮离子,辅以抗性平板法结合抑菌圈法,筛选出了一株ε-聚赖氨酸高产白色链霉菌(Streptomyces albulus)GC11.经多次传代实验结果表明GC11稳定性良好.摇瓶发酵培养24h,GC11抑菌圈直径为23.20mm,比TS02提高了1.32倍;5L自控发酵罐发酵培养72h,GC11ε-PL产量为4.21 g/L,比TS02提高了1.30倍,达到了提高ε-聚赖氨酸产量的目的.     

高产木聚糖酶菌株的筛选

本课题成功地从自然界分离筛选出了X（y-1）、X（y-5）两株高产木聚糖酶菌株，并利用玉米芯为原料制备了木聚糖，对木聚糖的制备殁酶解条件进行了探讨。结果表明：木聚糖最佳的酶解条件为pH5．0、温度50℃，酶解时间18h；用10％NaOH85℃下恒温浸提4h，木聚糖的提取率最高。     

环糊精糖基转移酶高产菌株的快速筛选

以酚酞作指示剂，在琼脂固态培养基上，根据酚酞变为无色所形成变色圈大小筛选环糊精糖基转移酶高产突变株是一种平板快速筛选方法。嗜碱芽孢杆菌1177菌株经紫外线和γ射线诱变处理后，经该法筛选得到突变株圈7—12，该菌株产环糊精糖基转移酶达5600u／ml，较出发菌株提高183％。连续5代传代试验表明，突变株7—12产酶基本稳定。     

L-精氨酸高产菌株的亚硝基胍诱变选育和种子培养基的优化研究

为了筛选L-精氨酸的高产菌株,采用亚硝基胍对出发菌株A TCC 14067 （Brevibacterium flavum）进行诱变,结合抗精氨酸结构类似物D-精氨酸,S-甲基半胱氨酸平板抗性筛选高产菌株,并采用正交试验优化了种子培养基.结果显示,经过1 mg/mL的亚硝基胍诱变处理4min后,采用14 mg/mL的D-精氨酸抗性平板和8mg/mL的S-甲基半胱氨酸抗性平板筛选获得精氨酸高产菌株,由于解除精氨酸自身的反馈调节,L-精氨酸积累增大,产酸量达37.2 g/L,比野生菌株提高了128.2％,得到的高产菌株遗传性状稳定.通过对种子培养基进行正交试验优化,确定最终培养基配方为葡萄糖3.0％,玉米浆2.0％,硫酸铵2.0％,KH2PO4 0.10％,MgSO4·7H2O 0.05％,尿素0.15％,在此发酵条件下,L-精氨酸产量达37.8 g/L.     

酿酒用高产洛伐他汀红曲菌的筛选

为获得酿酒用高产洛伐他汀红曲菌株,研究以洛伐他汀含量、红曲色素色价、桔霉素含量及红曲菌产酶能力为评价指标,通过固态发酵法从不同产地40份红曲米中筛选出1株高产洛伐他汀的菌株H5-3,经形态观察和分子生物学鉴定,判定该菌株为紫色红曲菌。经过检测,菌株H5-3的洛伐他汀产量高达17.90mg/g,红色素色价3195.27μ/g,糖化酶、液化酶、酸性蛋白酶的活力分别达2514.26、0.32、300.19U/g,且该菌株不产桔霉素,是可应用于红曲黄酒酿造的功能红曲菌。进一步将该紫色红曲菌H5-3应用于红曲黄酒的酿造,制得的红曲黄酒中洛伐他汀质量浓度63.75mg/L,红色素色价22.86μ/mL,酒精度14.86%,总酸4.90g/L,氨基酸态氮0.83g/L。对制得的红曲黄酒风味物质进行分析,发现有机酸质量浓度为12.70g/L,其中乳酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸为其主要成分,分别占总量质量分数的28.2%、21.9%、14.5%、12.2%、5.7%;游离氨基酸质量浓度3540.58mg/L;在挥发性风味物质中,酯类、醇类为主要成分,分别占总量质量分数的48.4%、43.9%,其中乙酸乙酯、乳酸乙酯、丁二酸二乙酯、正丙醇、苯乙醇等含量较高,对风味有较大贡献;有机酸、游离氨基酸和挥发性风味物质含量比例协调。希望研究对传统红曲菌种资源的发掘利用以及红曲黄酒保健功能的提升具有参考价值。     

农用抗生素高产菌株的筛选分离及诱变育种

该实验分离得到4株产农用抗生素菌株,编号1#～4#。 以厚垣镰孢霉（Fusarium chlamydosporum）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）作为指示菌,测定其发酵液的抑菌活性,并对抑菌 活性菌株进行诱变育种。 结果表明,菌株1#对枯草芽孢杆菌（B. subtilis）和金黄色葡萄球菌（S. aureus）抑菌圈直径＞10 mm,抑菌 活性较好。 采用紫外诱变、重金属激活沉默基因复活诱变两种方法诱变菌株1#后,对厚垣镰孢霉、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄 色葡萄球菌抑菌作用分别增加了25.68%、32.11%、34.85%、28.28%。 形态学观察及生理生化实验结果初步鉴定菌株1#为链霉菌属（Streptomyces sp.）。     

产洛伐他汀的红曲霉诱变育种研究

目的:提高红曲霉发酵生产洛伐他汀产量。方法:对红曲霉进行紫外线诱变处理,采用抑菌圈法初筛和HPLC法复筛。结果:筛选得到两株高产突变株,分别命名为UV-7、UV-12,洛伐他汀产量为0.246 mg/m L、0.249 mg/m L,较出发菌株分别提高了55.6%、57.6%;另外,红曲霉产红色素能力以及菌落特征可能与产洛伐他汀能力有一定内在联系。结论:紫外线诱变是提高红曲霉产洛伐他汀产量的一种有效方法。     

高产红曲色素菌株筛选

为了提高红曲色素的产量和质量,以广西当地农家自制的红曲米为出发菌株,通过平板分离和紫外诱变,分离出一株高产色素的菌株。经过10次的传代培养,产色能力基本稳定在950U/g,表明该菌株已具备相对稳定的遗传性质。     

产褐藻胶裂解酶菌株筛选与高产酶菌株的ARTP诱变选育

该研究采用平板酶解圈法从南海海域海藻、动物及沉积物样品中筛选产褐藻胶裂解酶细菌,对筛选菌株进行分子生物学鉴定,并利用常压室温等离子体（ARTP）诱变技术选育高产褐藻胶裂解酶菌株。结果表明,共分离筛选得到酶活较高的细菌14株,16S rDNA比对分析结果表明,它们隶属于3个门、5个纲、7个目、8个科、9个属,其中有5株菌（占35.7%）可能代表着新的分类单元。以高产褐藻胶裂解酶海藻类芽孢杆菌（Paenibacillus algicola）HB172198T作为原始菌株,利用ARTP诱变技术选育获得2株褐藻胶裂解酶活力明显提高的突变株（编号分别为30-19、80-6）,其酶活力分别比原始菌株提高了32.6%和21.6%,且连续6次传代培养诱变菌株的产酶遗传性状稳定。     

利用菌株的乳链菌肽免疫性筛选高产菌株

根据乳链菌肽产生菌的基因分析 ,发展了一种新的筛选方法。对乳酸乳球菌 79UV-S2 2经多种诱变处理后 ,用该方法进行了筛选 ,成功地获得了一株乳链菌肽高产菌株 ,该菌株在遗传上是稳定的 ,使用M 1 7培养基发酵发酵液效价可达 1 5 2 7IU/mL。