刺参体壁胶原蛋白的检测条件

为了缩短刺参体壁胶原蛋白含量的测定时间,简化实验操作,以及更加准确地检测刺参体壁胶原蛋白质中羟脯氨酸的质量分数,使得检测结果更为真实可靠,采用酸水解法分别对刺参体壁酶促溶性胶原蛋白和酸溶性胶原蛋白的水解条件进行了优化,在110、115、120、125和130℃分别水解2～30 h,确定其适宜水解时间为6h,水解温度为1...     

刺参肠内源酶对体壁胶原蛋白的降解作用

采用明胶酶谱法检测刺参肠内源酶中胶原降解酶的活性,应用流变仪分析刺参体壁粗胶原纤维的流变特性。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和TCA可溶性寡肽含量测定方法,考察了刺参肠内源酶对体壁酶促溶性胶原蛋白的降解作用。结果表明,当粗胶原纤维质量分数为3%时,溶胀的粗胶原纤维显示出明显的凝胶特性,经刺参肠内源酶处理后,其凝胶性明显下降。在pH 9.0和40℃的条件下,刺参肠内源酶作用0.5h后,可显著促进PSC中γ、β及α链的降解;在此过程中,体壁酶促溶性胶原蛋白降解产物中TCA可溶性寡肽含量逐渐增加。研究表明,刺参肠中具有能够降解体壁胶原蛋白的内源酶,并在刺参自溶中发挥重要作用。     

制备条件对胶原蛋白膜拉伸特性的影响

胶原蛋白膜的拉伸特性受以下几个因素的影响：胶原蛋白的浓度、成膜液的pH、成膜液的热处理温度、甘油的添加量以及胶原蛋白膜的干燥温度,本文系统的研究了上述因素对胶原蛋白膜拉伸特性的影响,综合考虑膜的断裂延伸率和抗拉强度,当胶原蛋白的浓度7%、甘油添加量20%、成膜液的pH 6、成膜液的热处理温度50℃、热处理时间20 m in、室温下进行膜的干燥条件下,成膜的机械性能较好,适用于作为包装膜.     

海刺参粘多糖提取分离的最佳工艺条件

采用计算机优化实验设计方法研究了海刺参粘多糖的提取、分离工艺。分析影响提出率的各种因素，选定较优的工艺条件：碱添加量0．46mol／L，碱解时间101min，酶添加量0．37％，酶解时间219min。并对产品的理化性质做定性定量分析。     

重组仿刺参超氧化物歧化酶在大肠杆菌中表达条件的优化及分离纯化

利用基因工程菌BL21(DE3)/pET30a(+)-SOD1,优化表达重组仿刺参超氧化物歧化酶蛋白(rAj-SOD1)。采用摇瓶发酵优化rAj-SOD1可溶性表达的条件,提高蛋白的表达产量。结果表明,在温度30℃、转速200 r/min、0.1 mmol/L IPTG诱导8 h条件下,菌体中rAj-SOD1蛋白表达量最大,达到315.59 mg/L。电泳检测结果表明,rAj-SOD1的纯度为96.7%,符合后续酶活要求。纯化后rAj-SOD1质量浓度为98.73 mg/L,收率为31.28%。邻苯三酚法对rAj-SOD1蛋白进行活性分析,结果表明,纯化的rAj-SOD1蛋白具有明显的抗氧化活性。     

鱼鳞胶原蛋白的研究进展及应用

综述了国内外有关鱼鳞胶原蛋白的研究及应用的最新进展，包括鱼鳞的组织结构、化学组成以及鱼鳞胶原蛋白的提取及研究等，并介绍了鱼鳞胶原蛋白在食品、生物医学、化妆品等领域的应用。     

热水法抽提鳕鱼皮胶原蛋白条件的响应面分析

以鳕鱼皮为原料,先用酸碱浸泡鱼皮,去除脂肪和杂蛋白,并使鱼皮充分膨胀.再利用热水抽提法,以胶原蛋白的产率为主要指标,考察pH、温度,水解时间的变化对指标的影响,并考察这些因素对指标的交互影响.利用响应面法优化得出的胶原蛋白提取最佳工艺条件是pH 5.0,温度为42℃,提取时间为25.72 h.在最优条件下胶原蛋白的提取...     

猪皮中胶原蛋白的提取

对猪皮中胶原蛋白进行提取.用枯草杆菌中性蛋白酶预处理猪皮,再用水抽提的方法提取胶原蛋白.在单因素试验的基础上,通过正交实验确定了胶原蛋白提取的最佳条件:酶处理pH 6,加酶量(E/S)400 U/g,温度35℃,处理时间2 h;水抽提时间4 h,水抽提固液比(g/mL)1∶6.对比试验结果表明:从经过酶处理和未经酶处理的猪皮中提取胶原蛋白,前者的提取率大大高于后者.     

热水法抽提鳕鱼皮胶原蛋白条件的响应面分析

以鳕鱼皮为原料,先用酸碱浸泡鱼皮,去除脂肪和杂蛋白,并使鱼皮充分膨胀。再利用热水抽提法,以胶原蛋白的产率为主要指标,考察pH、温度,水解时间的变化对指标的影响,并考察这些因素对指标的交互影响。利用响应面法优化得出的胶原蛋白提取最佳工艺条件是pH 5.0,温度为42℃,提取时间为25.72 h。在最优条件下胶原蛋白的提取率为83.75%。     

海参体壁酶促溶性胶原的提取工艺

以海参体壁为原料,采用胃蛋白酶水解法提取酶促溶性胶原。以酶促溶性胶原得率为指标,通过正交试验确定了胃蛋白酶水解法获取酶促溶性胶原的最佳条件:温度为4℃,酶加量为14%,料液比为1∶500,提取时间为72 h;在此条件下酶促溶性胶原的得率可达到胶原纤维原料的73.44%。实验还确定盐浓度为0.8 mol/L时酶促溶性胶原的盐析效果最好。     

海参体壁酶促溶性胶原的提取工艺

以海参体壁为原料,采用胃蛋白酶水解法提取酶促溶性胶原.以酶促溶性胶原得率为指标,通过正交试验确定了胃蛋白酶水解法获取酶促溶性胶原的最佳条件温度为4 ℃,酶加量为14%,料液比为1∶500,提取时间为72 h;在此条件下酶促溶性胶原的得率可达到胶原纤维原料的73.44%.实验还确定盐浓度为0.8 mol/L时酶促溶性胶原的盐析效果最好.     

重组海参溶菌酶的表达及其性质

研究了重组海参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)可溶性表达的发酵条件。采用多因素正交优选法,以摇瓶培养方式从培养基组分、发酵条件两个方面对重组海参溶菌酶进行研究,构建了高效分泌型表达重组海参溶菌酶工程菌。研究结果发现,30℃、140r/min、IPTG浓度0.3mmol/L、诱导后继续培养14h,目的蛋白分泌表达量可达到30~40mg/L,且产物以大量可溶性蛋白存在。     

海参肠碱性磷酸酶的提取及粗酶的特性研究

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)是最重要的磷酸酶之一,在生物体内直接参与磷酸基团的转移和代谢过程。本文研究了海参肠碱性磷酸酶粗酶的提取,并分析了其酶学特性。经含有0.2%Triton X-100的Tris-HCl缓冲液(pH 8.9)浸提、正丁醇处理、70%硫酸铵沉淀和超滤等步骤获得海参肠ALP粗酶,纯化倍数达到2.74倍,得率为63.32%。ALP粗酶的最适反应pH为11.0,在pH 10.0～12.0稳定性较好;最适反应温度为45℃,在20～45℃具有很高的稳定性。金属离子Mg2+(1～30mmol/L)、Zn2+(<10mmol/L)对海参肠ALP粗酶具有显著的激活作用;Fe3+、Fe2+、Cu2+和Mn2+(10mmol/L)可明显抑制该酶活力。EDTA-Na2、DTT、Na2WO4及Na2HPO4对海参肠ALP粗酶有明显的抑制作用,抑制程度依次为:EDTA-Na2>DTT>Na2WO4>Na2HPO4。     

海参肠道组织蛋白酶B粗酶提取条件的优化

为了获得具有较高活力的海参肠组织蛋白酶B,研究了其粗酶的提取条件。以Z-Arg-Arg-MCA为特异性底物,采用荧光光度法测定了酶活力。对提取海参肠组织蛋白酶B的浸提缓冲液、浸提时间和硫酸铵饱和度进行优化。结果表明,采用含5 mmol/L L-半胱氨酸、1 mmol/L EDTA、0.2%TritonX-100的50 mmol/L pH5.0的NaAc-HAc缓冲液浸提7 h后,选择80%饱和度的硫酸铵进行沉淀,能够有效地从海参肠道中提取组织蛋白酶B;同时研究了巯基保护剂对酶活力的影响。结果表明,巯基保护剂可提高酶的活力,这符合组织蛋白酶B结构中含有巯基的特性。在提取粗酶的过程中,添加巯基保护剂可有效地保证酶活力。     

海参肠道组织蛋白酶B粗酶提取条件的优化

为了获得具有较高活力的海参肠组织蛋白酶B,研究了其粗酶的提取条件。以Z-Arg-Arg-MCA为特异性底物,采用荧光光度法测定了酶活力。对提取海参肠组织蛋白酶B的浸提缓冲液、浸提时间和硫酸铵饱和度进行优化。结果表明,采用含5 mmol/L L-半胱氨酸、1 mmol/L EDTA、0.2%TritonX-100的50 mmol/L pH5.0的NaAc-HAc缓冲液浸提7 h后,选择80%饱和度的硫酸铵进行沉淀,能够有效地从海参肠道中提取组织蛋白酶B;同时研究了巯基保护剂对酶活力的影响。结果表明,巯基保护剂可提高酶的活力,这符合组织蛋白酶B结构中含有巯基的特性。在提取粗酶的过程中,添加巯基保护剂可有效地保证酶活力。     

海参溶菌酶基因克隆及在毕赤酵母中的表达与纯化

研究构建并筛选了具有抑菌活性的重组海参溶菌酶(Stichopus japonicuslysozyme,SJL)的毕赤酵母工程菌。从海参肠组织中提取总RNA,根据已经测得的SJL的基因序列(GenBank accession No.EF036468)设计引物,以总RNA为模板经RT-PCR获得目的基因,并将该基因与表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-SJL,再转化至毕赤酵母GS115中。利用MD、MM和含抗生素G418的YPD平板培养基筛选出表型为His+Muts的高拷贝阳性菌株。挑选具有抑菌活性的菌株进行甲醇诱导表达液体发酵,其上清液经硫酸铵沉淀、透析后得到溶菌酶粗品,再经CM52-纤维素阳离子交换柱进一步纯化,得到电泳纯的溶菌酶。结果显示,共筛选到7株有抑菌活性的重组酵母菌株,诱导72 h时表达量最高。SJL在毕赤酵母中得到成功表达。     

海参溶菌酶基因克隆及在毕赤酵母中的表达与纯化

研究构建并筛选了具有抑菌活性的重组海参溶菌酶(Stichopus japonicuslysozyme,SJL)的毕赤酵母工程菌。从海参肠组织中提取总RNA,根据已经测得的SJL的基因序列(GenBank accession No.EF036468)设计引物,以总RNA为模板经RT-PCR获得目的基因,并将该基因与表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-SJL,再转化至毕赤酵母GS115中。利用MD、MM和含抗生素G418的YPD平板培养基筛选出表型为His+Muts的高拷贝阳性菌株。挑选具有抑菌活性的菌株进行甲醇诱导表达液体发酵,其上清液经硫酸铵沉淀、透析后得到溶菌酶粗品,再经CM52-纤维素阳离子交换柱进一步纯化,得到电泳纯的溶菌酶。结果显示,共筛选到7株有抑菌活性的重组酵母菌株,诱导72 h时表达量最高。SJL在毕赤酵母中得到成功表达。     

3种微生态制剂对幼刺参养殖水体水质的影响

对3种微生态制剂改善幼刺参养殖水体水质的效果进行了研究。试验设3个处理组,分别在水体中泼洒芽孢杆菌、海洋红酵母和EM菌;另设1个对照组,只投喂基础饵料。试验水体20L,试验期间不换水,每隔2d对pH、化学需氧量、氨氮及亚硝酸盐氮进行检测,氨氮超过0.15mg/L时结束试验。结果表明,在水体中泼洒3种微生态制剂均可改善水质,其中,EM菌和海洋红酵母具有降低化学需氧量的作用,EM菌和芽孢杆菌具有降解氨氮和亚硝酸盐氮的功能,EM菌改善水质的效果最好。