一种基于PCR技术的沙门氏菌血清分型试剂盒与传统血清分型方法比较

目的 评估一种基于PCR技术的沙门氏菌快速血清分型试剂盒效用,并与传统血清学分型鉴定方法进行对比,为研究人员提供一种更高效、简便的沙门氏菌血清学鉴定分型方法。方法 从本实验室菌株库中选取59株沙门氏菌,分别采用沙门氏菌血清分型PCR试剂盒和传统血清凝集法对所有菌株进行分型鉴定,比对两种分型方法的符合率。结果 59株沙门氏菌均通过传统血清凝集方法完成分型,分型率100%。59株菌株均通过沙门氏菌血清分型PCR试剂盒成功分型,分型率100%,两种方法鉴定沙门血清型符合率100%。结论 沙门氏菌血清分型PCR试剂盒能达到较高的分型率,大大缩短检测时间,减少常规血清分型的工作量及昂贵的血清消耗,节约成本,可以作为一种沙门氏菌快速血清分型方法进行应用。     

沙门菌属特异性检测靶点碱基差异位点的识别及其血清型决定力

以美国国家生物技术信息中心(NCBI)已公布的28株沙门菌(14个血清型)全基因组序列为研究对象,对前期研究获得的7个沙门菌属特异性检测靶点在不同血清型间的单核苷酸多态性进行比较分析,结果表明,S9和S69为碱基差异位点最多的两个靶点,具有沙门菌分子血清分型的潜在能力。随后,通过分析S9和S69在沙门菌不同血清型菌株中的差异位点,分别绘制两个血清分型靶点的差异位点表,从而获得了这两个靶点同时用于14个沙门菌血清型的快速分子血清分型的差异位点组合。在这些组合中,同一血清型具有相同的差异位点,不同血清型可以通过差异位点得以区分。最后,采集食品样品192份,用国标方法获得疑似沙门菌21株;利用血清分子分型靶点S9和S69进行快速分型,并同时用传统玻片凝集反应鉴定方法进行验证,两种方法鉴定结果的符合率为100%。鉴定结果为:21株沙门菌共包括4个不同血清型,其中肠炎沙门菌10株、鼠伤寒沙门菌7株、鸡沙门菌2株、纽波特沙门菌2株。基因组序列分析结果和分离株分型结果均表明,沙门菌特异分子检测靶点S9和S69相结合具备沙门菌的分子血清分型能力,以差异位点表为基础建立的血清分型方法有望替代传统的玻片凝集血清分型这一繁杂步骤,从而降低沙门菌血清鉴定的时间与成本,为聚合酶链式反应技术应用于沙门菌分子血清分型提供新思路。     

乌鲁木齐市零售牛羊肉中沙门氏菌的调查

目的通过对乌鲁木齐零售牛羊中的沙门氏菌检测分离并分型,了解乌鲁木齐市牛羊肉的污染状况。方法按照沙门氏菌检验国家标GB/T 4789.1-2010对乌鲁木齐零售牛羊肉检测分离并进行血清型分型。结果2013~2014年共检测535份零售牛羊肉样品,共分离得到30株沙门氏菌,总体感染率为5.6%,羊肉的感染率为6.5%,牛肉感染率为4.3%,经血清分型鉴定可以分为5个血清群,12个血清型主要有哈达尔沙门氏菌、伦敦沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、姆班达卡沙门氏菌和哈瓦那沙门氏菌等。结论新疆乌鲁木齐地区零售牛羊肉中存在沙门氏菌污染,沙门氏菌菌株为不同的表型,需要加强对零售牛羊肉市场的卫生检疫,防控沙门氏菌疾病。     

沙门氏菌的血清分型及分子鉴定研究进展

沙门氏菌(Salmonella)是常见的食源性致病菌,该菌属型别繁多。沙门氏菌血清型的划分对菌株的分类与鉴定有着重要的意义。本文主要介绍了沙门氏菌的O抗原、H抗原和Vi抗原的特性及结构特征,阐述了多种分子鉴定方法在血清分型检测中应用的进展情况,这些方法大多是以PCR为基础建立的,如多重PCR、基因芯片、高分辨率熔解曲线技术等,使用的引物是根据沙门氏菌的O抗原、H抗原和Vi抗原的编码基因设计的。此外,本文还介绍了两种高通量鉴定方法,通用探针沙门氏菌血清分型法和PremiTest沙门氏菌分型法,但是这两种方法的探针设计比较复杂,使用的设备较为特殊,不易推广。环介导等温扩增(LAMP)方法是等温扩增方法之一,虽然简单、快速、灵敏,但是只适合于单一血清组或血清型的检测。     

2020—2021年绍兴市水产品和腹泻患者来源的霍乱弧菌耐药性与分子特征分析

目的 了解2020—2021年绍兴市霍乱弧菌的血清型、霍乱毒素编码基因（ctxAB）携带率、耐药性及分子分型情况。方法 收集2020—2021年分离自水产品、腹泻患者粪便的霍乱弧菌68株,使用玻片凝集法进行血清分型;利用实时荧光PCR检测ctxAB基因;采用微量肉汤稀释法和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分别进行药物敏感试验和分子分型。结果 68株霍乱弧菌只有3株为O1群小川型,其余65株均为非O1/O139血清群;所有菌株均未检出ctxAB基因;菌株对头孢他啶、头孢他啶/阿维巴坦和复方新诺明的耐药率分别为45.6%、38.2%和36.8%,对四环素、替加环素、阿奇霉素、阿米卡星敏感,17株菌对3种及以上抗生素耐药;菌株经Not I酶切后的PFGE图谱呈多样性,水产品分离株与病例分离株的分子分型差别较大。结论 2020—2021年绍兴市霍乱弧菌主要为非O1/O139血清群,不携带毒力基因ctxAB,对多种抗生素耐药,分子特征复杂多样。     

2011~2018年红河州食品中沙门氏菌血清分型及脉冲场凝胶电泳分型研究

目的 了解红河州2011~2018年食品中沙门氏菌血清型分布及分子分型特征, 初步建立沙门氏菌脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)分型的数据库。方法 使用全自动微生物鉴定系统对收集的49株沙门氏菌进行鉴定, 依据沙门氏菌White-Kauffmann-LeMinor抗原表用沙门氏菌属诊断血清确定血清型, 参照国家食源性疾病分子溯源网络(TraNet)的沙门氏菌PFGE分子分型法进行基因分型, 用Bionumerics(7.6)软件聚类分析。结果 49株沙门氏菌属于B、C、D、E和G群5个群25个血清型; 伦敦沙门氏菌是主要血清型, 占24.5%(12/49); 49株沙门氏菌分成了42个PFGE带型(P001-P042), 其中P038型包含8株菌, 其余各型分别只包含1株菌。结论 红河州食品中沙门氏菌具有不同血清型及PFGE型别, 相同血清型菌株PFGE型别聚集成簇。     

乳粉能力验证中沙门氏菌的分离鉴定和血清分型

目的参加编号为NIFDC-PT-220的能力验证,考核从乳粉中检出沙门氏菌及血清分型能力。方法参照国标方法对中国食品药品检定研究院提供的随机乳粉样品(CODE140、CODE121)进行沙门氏菌的检验,并将荧光酶联免疫法和荧光定量PCR技术作为辅助方法。对分离出的疑似菌进行生化鉴定,并且采用全自动微生物鉴定系统进行全面鉴定。结果编号CODE140血清分型为O:4,5,12, H:i; 1,2被确定为鼠伤寒沙门氏菌。编号CODE121未检出。结论荧光酶联免疫法和荧光定量PCR技术缩短了检测时间,特异性和敏感性好,与国标方法配合可确保实验结果的准确性。     

南京地区猪肉源中沙门氏菌分子分型及耐药性分析

沙门氏菌是造成我国食源性疾病的常见细菌之一,也是肉类消费过程中密切监测的重点对象。在2018年~2021年期间,共计采集了南京市545份猪肉源食品样本,利用选择性培养法分离得到44株沙门氏菌,采用血清学方法和分子生物学方法（MLST）对其进行分型鉴定,并分析其耐药性。结果表明,市售样本中共计检出44株沙门氏菌,平均检出率为8.07%,其中内脏样本检出率相对最高（检出率为30.49%）;血清型分析表明,检出的菌株中以鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）、罗森氏沙门氏菌（Salmonella rissen）、德尔卑沙门氏菌（Salmonella derby）和伦敦沙门氏菌（Salmonella london）4种血清型沙门氏菌最为常见;基因分型表明,ST19型为猪肉源中优势沙门氏菌株,占比为20.45%;检出的沙门氏菌中,38株菌株对四环素具有明显耐药性,占全部检出菌株的86.36%,而对头孢他啶、头孢噻肟和头孢西丁的耐药不超过10%。此外,对检出的1株多重耐药性沙门氏菌耐药基因分析发现,共筛查出了包括7大类抗生素及与耐药相关的基因。该实验详细分析了南京市场猪肉源食品中沙门氏菌污染状况,也为后期沙门氏菌的综合防治提供了理论依据。     

能力验证中沙门氏菌的分离鉴定与血清分型

目的通过参加NIFDC-PT-098乳粉中沙门氏菌检验的能力验证,提高本实验室的检测能力,增强实验室竞争力。方法依据GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》中的方法,对2份样品中的沙门氏菌进行分离和血清学鉴定。并以全自动荧光免疫分析系统(MINI VIDAS)进行快速初筛,利用全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2)对分离出的疑似菌进行生化鉴定。结果编号CODE423检出鼠伤寒沙门氏菌,其血清分型为O:4,5,12,H:I;1,2。编号CODE484未检出。结论本次能力验证获得满意结果,发现以国标法为基准,优先选用沙门氏菌属显色培养基平板和XLD平板为参照,同时使用VITEK2和MINI VIDAS作为辅助进行检测,综合这几种方法可确保实验结果的准确性,这为以后检验使用辅助方法检测提供了参考依据。同时本次能力验证也促进了实验室保持较高的检验水平。     

两起肠炎沙门菌所致食物中毒的病原学研究及溯源分析

目的探讨两起同地区连续发生的肠炎沙门菌食物中毒分离株之间的分子流行病学关系。方法参照GB 4789.4—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》方法进行病原分离培养,对检出菌株进行表型鉴定;用VITEK-ⅡCompact全自动微生物分析系统检测菌株抗生素敏感性;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对检出菌株进行分子分型和流行病学特征分析。结果共检出23株肠炎沙门菌,其中从25份患者肛拭样本中检出17株,8份从业人员肛拭样本中检出2株,8份留样食物中检出3株,厨具涂抹样本中检出1株。23株肠炎沙门菌血清抗原式均相同(9∶g,m∶-);生物学性状和药敏试验结果基本一致;PFGE图谱带型完全一致(相似度为100%),且与当地散发病例PFGE图谱带型相似。结论综合流行病学调查、病原学检测和分子分型结果,证实这两起食物中毒是由同一来源的肠炎沙门菌污染所引起。     

奶粉样品中沙门氏菌能力验证结果与分析

目的验证分析实验室对奶粉样品中沙门氏菌检测能力。方法依据GB 4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》、SN/T 1059.7-2010《进出口食品中沙门氏菌检测方法实时荧光PCR法》进行改进,参照能力验证计划参试指导书来进行测定和结果判断。结果通过荧光定量PCR法进行快速初筛,初步判断样品含有阳性沙门氏菌;传统平板法结合生化鉴定套装和VITEK2进行复筛,将可疑沙门氏菌进行血清分型,检出2种血清型O:4,12 H:i,2和O:9,12 H:m,g:-,分别为鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌;同时采用Ribo Printer全自动微生物基因指纹鉴定系统对可疑单菌落进行确证性鉴定,结果与血清分型一致。结论本次实验室的奶粉样品中沙门氏菌检测能力验证结果合格。     

食源性沙门氏菌分离株自动化核糖体分型的研究

目的:对我国食源性疾病监测网地区鸡肉中分离的沙门氏菌株进行核糖体分型研究。方法:采用自动化核糖体分型方法对2003年和2004年我国不同地区鸡肉中分离的134株沙门氏菌进行核糖体分型,运用BioN-umeric软件对分型结果进行聚类分析,并与常规血清学分型方法进行比较。结果:自动化核糖体分型方法的分型能力相对血清学分型有一定优势,不同地区沙门氏菌分离株间的核糖体型既有一定的联系又呈现出一定的差异化;两年间同一地区分离株的核糖体型呈现出一定的延续性。结论:运用Riboprinter○R对我国134株沙门氏菌分离株进行核糖体分型研究,初步建立了食源性沙门氏菌分子分型数据库。     

乳制品中沙门氏菌分子检测方法的验证研究

目的验证沙门氏菌、非沙门菌及阳性核酸模板对MICROFAST?沙门氏菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)的特异性和稳定性,同时比对试剂盒法与GB 4789.4—2016培养法定性检测结果的一致性。方法用实验室保存的30株沙门氏菌和15株非沙门氏菌菌株验证MICROFAST?沙门氏菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)的特异性。通过人工添加不同浓度沙门氏菌对30个乳制品样本,采用国家标准法和试剂盒法同时检验,探究方法的一致性。选择制备好的5份阳性核酸模板,每个模板分别使用3个批次的试剂盒进行检测,对实验结果进行重复性和显著性分析,确定不同试剂盒批次间是否存在显著性差异。结果 30株沙门氏菌菌株和15株非沙门氏菌菌株的特异性检测结果表明,MICROFAST?沙门氏菌核酸检测试剂盒(PCR-探针法)对沙门氏菌的特异性符合预期。人工添加的阳性样本检测结果表明,在乳制品样本范围内,试剂盒的假阳性率与假阴性率为0。3个批次的试剂盒对5份阳性模板检测结果之间没有显著性差异,变异系数CV均小于1%。结论该试剂盒方法与国家标准法相比,具有操作简单、快速等优势,适合乳制品加工过程微生物快速检测。     

奶粉中沙门氏菌和阪崎肠杆菌的测定能力验证结果分析

目的 提高实验室用传统生化方法检测沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的能力和水平。方法 用空白添加法和交叉试验检查培养基性能后,以奶粉样品为材料,用传统生化培养方法进行检测。结果 发现在传统生化检测技术中,对于排除非沙门氏菌来说,BS板作用突出,XLD和沙门氏菌显色平板容易受干扰菌影响。W样品检出沙门氏菌,Q样品未检出沙门氏菌;V样品检出阪崎肠杆菌,G样品未检出阪崎肠杆菌。结论 通过该研究,本实验室的沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的传统生化检测技术水平和能力得到了提高。     

2013—2016年泉州市感染性腹泻病例中沙门菌血清学鉴定及耐药性分析

目的 分析2013—2016年泉州市食源性疾病监测哨点医院感染性腹泻病例中沙门菌的血清型及细菌耐药性,为临床合理用药提供参考。方法 对送检的腹泻患者标本进行沙门菌增菌培养和分离鉴定,采用传统玻片凝集法和液相悬浮芯片技术(xMAP)法进行血清学分型,微量肉汤稀释法进行药敏试验,用Excel软件处理数据。结果 460份标本中有73份检出沙门菌,共分离到沙门菌73株(15.87%),检出11个血清型,主要血清型为圣保罗沙门菌(42.47%,31/73)、阿雷查瓦莱塔沙门菌(16.44%,12/73)和布利丹沙门菌(12.33%,9/73)。玻片凝集法检出61株(83.56%,61/73)完整血清型,12株不确定血清型,液相悬浮芯片技术法确定了71株(97.26%,71/73)完整血清型,仅2株未确定。药敏试验显示沙门菌对头孢唑林、头孢替坦和妥布霉素3种抗生素的耐药率高达100.00%(73/73),其次为阿米卡星(95.89%,70/73)和庆大霉素(84.93%,62/73),对厄他培南、环丙沙星、左氧氟沙星、呋喃妥英这4种抗生素不具有耐药性。结论 泉州市感染性腹泻病例中沙门菌已对多种抗生素产生较高的耐药性,临床上应及时了解沙门菌的血清型分布及其耐药情况,合理选择抗菌药物。     

2017年沙门氏菌能力验证的结果与分析

目的 验证塔里木大学分析测试中心对国家食品安全风险监项目中沙门氏菌检测的技术水平。 方法 实验样品前处理方式按照考核方作业指导书要求进行处理, 沙门氏菌分离鉴定的能力验证工作按照GB4789.4-2016《食品安全国家标准 食品微生物检验 沙门氏菌检验》并结合作业指导书进行操作。将生化鉴定结果符合沙门氏菌阳性特征的样品进行血清学鉴定及分型。结果 3 个样品中, 样品1 检出斯坦利沙门氏菌,样品2 检出肯塔基沙门氏菌, 样品3 未检出沙门氏菌, 3 个样品能力验证结果均与组织方一致。结论 通过此次能力验证, 本测试中心的微生物检验能力和沙门氏菌检测技术水平均得到了有效验证和提高, 提升了本实验室的检测能力和可信度。     

2004—2012年北京出入境口岸食品及饲料中沙门菌血清分型研究

目的 掌握2004—2012年北京出入境口岸食品和饲料中沙门菌的血清型分布。方法 对65株分离自2004—2012年北京出入境口岸食品及饲料中的沙门菌以及13株中国医学细菌菌种保藏管理中心(CMCC)的参比菌株,共78株沙门菌进行血清分型鉴定。结果 65株沙门菌分离株中有4株沙门菌未能鉴定血清群,其他61株沙门菌分属于9个群,38个血清型,其中B群和C1群较多,分别占29.2%(19/65)和26.2%(17/65)。分离出7株阿贡纳沙门菌,占分离株的10.8%(7/65);2株肠炎沙门菌,占分离株的3.1%(2/65)。本实验室首次分离出1株斯特拉福德沙门菌。结论 北京出入境口岸食品及饲料中的沙门菌血清群及血清型众多且分布广泛,开展沙门菌血清型监测,为预防北京市食源性疾病提供科学依据。     

腹泻患儿粪便中沙门菌的血清型、药敏分析及脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的 研究2019年北京市朝阳区0-10岁腹泻患儿粪便中分离出的沙门菌的血清型、PFGE分子分型研究及耐药特点。方法 对分离自腹泻患儿病例的47株沙门菌进行血清分型,采用微量肉汤稀释法进行27种抗生素的药敏实验;采用PFGE脉冲场凝胶电泳进行指纹图谱分型研究。结果 47株沙门分为9种血清型,优势血清型两种,分别为肠炎沙门菌23株占48.94%,鼠伤寒沙门菌14株占29.79%。47株沙门菌对磺胺异恶唑耐药率(57.45%)最高,其次为氨苄西林(48.94%)和链霉素(48.94%)。23株肠炎沙门菌可分成8个PFGE指纹图谱,15株鼠伤寒沙门菌可分成14个PFGE指纹图谱。结论 北京市朝阳区0-10岁儿童食源性沙门菌血清主要为肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌,各血清型的耐药性有所不同,PFGE指纹图谱呈多样性。