PCR 法检测食品中大肠杆菌O157:H7

对大肠杆菌O157:H7 型菌株的各毒力基因及基因组中的特异序列进行了设计和比对,确定292bp 的检测引物。常规定性PCR 和实时定量PCR 证明该引物特异性强。模拟样品的前增菌实验结果表明本方法可以在原样品活菌浓度约2.0CFU/mL 时通过16h 增菌后检测出来,总的检测时间可以控制在24h 内。本实验建立的PCR 方法可用于食品中大肠杆菌O157:H7 的快速测定。     

食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的检测技术研究进展

近年来,因食源性致病菌造成的食品中毒正在不断增加,严重威胁了人类的健康,大肠杆菌（E.coli） O157∶H7由于其低感染剂量和高致病性等特点引起了研究人员和世界卫生组织的高度重视。因此精准快速的检测食品中的E.coli O157∶H7对食品安全问题有着重要的意义,是预防和控制食源性疾病传播的重要技术,为此本文对E.coli O157∶H7的常规检测方法、免疫学法、分子生物学法和其他方法进行论述,介绍了这些方法的优缺点,对各种方法进行了整体比较,以期为有关工作者在选择检测方法或研发新方法提供参考。     

侧流层析技术在大肠杆菌O157:H7检测中的应用

大肠杆菌O157:H7作为一种常见的食源性致病菌,在低感染剂量下即可导致人类患严重疾病。侧流层析技术（LFCA）由于其具有高效分离的特性,能够满足食品中大肠杆菌O157:H7的快速检测需求。然而,目前广泛应用的LFCA方法,信号强度较弱,检测灵敏度较低,难以实现样本中低浓度大肠杆菌O157:H7的检出。因此,本文重点整理了近年来出现的新型侧流层析技术,围绕检测效率、灵敏度进行了系统性归纳,比较各方法的优势与短板,为大肠杆菌O157:H7侧流层析检测技术的发展提供重要结论性指导。     

生物传感器检测食源性大肠杆菌O157:H7研究新进展

近年来, 生物传感器因具有快速、简便、灵敏度高、低成本等优势被广泛应用到临床检测、环境监测等领域。该技术在食品安全领域也逐步得到重视, 尤其在病原微生物的快速检测方面。本文从免疫识别和核酸识别两方面简要介绍生物传感器技术检测食源性大肠杆菌O157:H7研究的最新进展, 对生物传感器技术存在的问题及未来的研究方向进行了总结及展望。     

食品中大肠杆菌O157:H7的几种检测方法的比较

目的评估平板分离培养法、免疫磁珠分离(IMS)法、VIDAS全自动酶标免疫测试系统、BAX全自动病原菌检测系统及环介导等温扩增(LAMP)技术在食品中检验肠出血型大肠埃希菌O157∶H7的特异性、敏感性。方法使用平板分离培养法、免疫磁珠分离法、VIDAS法、BAX法及LAMP法对人工制备的染菌猪肉样本进行检测,并对这几种方法进行比较。结果 BAX法和LAMP法的检出率最高,分别是89.1%和85.9%,免疫磁珠法和VIDAS法检出率次之,分别是75.0%和78.1%,传统分离培养法为43.8%。结论 BAX法和LAMP法具有快速、高效、特异性好、敏感性高的特点,可快速筛选食品中可能存在的肠出血型大肠埃希菌O157∶H7。     

大肠杆菌O157:H7及其在食品中的检测

大肠杆菌O15 7:H7是一种感染剂量小 (10个活菌 ) ,危害性很大的致病菌。近年 ,在世界各地屡次发生大肠杆菌O15 7:H7的感染事件。因此 ,在食品卫生和安全领域 ,对大肠杆菌O15 7:H7致病机理、生物学特性、检测方法、预防和控制已成为研究热点。作者对大肠杆菌O15 7:H7的致病性、生化特性、检测方法及其在食品中出现的情况作了系统的介绍     

双抗夹心ELISA检测食品中大肠杆菌O157:H7方法研究

研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法检测大肠杆菌O157:H7,正交试验分析表明,捕获抗体于37℃包被2h、不封闭、抗原与捕获抗体于37℃结合2h、检测抗体浓度为0.25mg/ml、与抗原于37℃结合1h为最优反应条件。该方法对纯培养菌液检出限为105CFU/ml,具有良好的敏感性及特异性。染菌样品经在EC增菌液中选择性培养后进行双抗夹心ELISA检测,接种量为0.1～1CFU/g(ml)的样品在培养12h后可检出阳性反应,1～10CFU/g(ml)的样品在培养8h后可检出阳性反应。     

食品中大肠杆菌O157:H7控制新技术研究进展

论述了杀菌剂清洗技术、高压脉冲电场技术、高密度CO2技术、超高压技术和辐照技术等新技术的原理及其在控制食品中大肠杆菌O157:H7应用方面的研究进展。展望了未来该研究领域的发展趋势。     

原料乳中大肠杆菌O157:H7的快速检测

建立了一种快速检测原料乳中大肠杆菌O157:H7的PCR技术.该方法利用过滤富集菌体后的PCR技术来检测原料乳中大肠杆菌O157:H7,先对人工污染大肠杆菌O157:H7的原料乳进行离心脱脂,然后添加EDTA-2Na获得澄清乳液,最后通过0.45 μm微膜过滤收集菌体,整个过程只需6 h左右即可完成.检测灵敏度高达10-mL-1.这种方法在传统检测方法的基础上做了有效改进,使得原料乳中的大肠杆菌O157:H7的检测能够快速、准确、灵敏的进行.     

大肠杆菌O157:H7的免疫捕获PCR快速检测

研究用特异性的出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体包被处理的PCR管,对样品中的病原菌进行特异性免疫富集,以免疫捕获-PCR(Immunocaptured PCR,IC-PCR)管中捕获到的病原菌作为模板进行PCR扩增。结果显示免疫捕获-PCR对病原菌出血性大肠杆菌O157:H7检测灵敏度达到102CFU/mL,比直接PCR和ELISA提高了103倍;特异性验证实验证实,对其他10株食源性致病菌进行检测均无目标条带。该方法将免疫学和分子生物学检测结合起来,灵敏度高,特异性强,检测周期短,检测迅速,是适合检测一线进行快速检测的新方法。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测及PCR检测

大肠杆菌一些特殊的血清型具有致病性,肠出血性大肠杆菌是大肠杆菌的一个亚型,主要致病菌株为O157:H7,可引起感染性腹泻,因能引起人类的出血性肠炎而得名。本文综述了分子生物学检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的研究进展。分子生物学检测是利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质的分析方法,主要包括酶联免疫吸附法(ELISA)、胶体免疫金层析法以及免疫磁珠分离法(IMS)。PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157:H7,主要包括常规PCR检测、多重PCR检测以及实时荧光定量PCR检测。这两种方法灵敏度高、特异性强、操作简便、结果准确等优点,是检测肠出血性大肠杆菌O157:H7的常用方法。     

大肠杆菌O157:H7快速培养的初步研究

本研究将Oxyrase酶加入到接种了大肠杆菌O157:H7的培养基中以促进这种兼性厌氧微生物的生长。与不加Oxyrase酶的对照组相比,添加了Oxyrase酶的培养基中的大肠杆菌O157:H7的浓度明显提高。实验结果表明,Oxyrase酶在大肠杆菌O157:H7 快速培养中具有潜在的利用价值。     

抗大肠杆菌O157:H7的卵黄特异性IgY的研究

以大肠杆菌O157:H7为抗原免疫产蛋母鸡,从鸡卵黄中提取免疫球蛋白,建立抗大肠杆菌O157:H7的特异性IgY的效价检测方法,并研究母鸡的免疫应答性,以及抗体的提取方法和体外抑菌效果.研究结果表明,初次免疫后第6d,在卵黄中可以检测到抗大肠杆菌O157:H7 IgY,效价为1:7200;经加强免疫后效价迅速上升,至第44d达到最高效价1:230400;免疫后360 d,效价仍维持在1:7200.用水稀释法、硫酸铵分级盐析和Sephadex G-25凝胶过滤以提取IgY,提纯后IgY的效价是之前的4倍.SDS-PAGE鉴定抗体的纯度,电泳图谱中出现抗体的轻链和重链两条带.体外抑菌实验表明,IgY能抑制大肠杆菌O157:H7的生长.     

PCR-免疫胶体金试纸条方法检测食品中 肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的建立PCR-免疫胶体金试纸条法快速检测食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7的分析方法。方法通过设计特异性引物建立肠出血性大肠杆菌O157:H7 PCR检测方法并使用免疫胶体金技术以及双抗体夹心法建立PCR产物快速检测试纸条并设计核酸检测展开液;将1株大肠杆菌O157:H7标准菌株和7株其他常见食源性致病菌作为试验菌株,用试验菌株检测PCR-免疫胶体金试纸条方法的检测特异度,并比较PCR-免疫胶体金试纸条法和PCR-琼脂糖凝胶电泳法的检测敏感度。结果 PCR-免疫胶体金法具有良好的特异度,灵敏度比标准琼脂糖凝胶电泳法高100倍。结论本文建立的肠出血性大肠杆菌O157:H7检测PCR-免疫胶体金试纸条法特异度好,灵敏度高,价格低廉,适用于食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7的检测。     

利用光纤倏逝波生物传感器检测食品中 大肠杆菌O157:H7

目的 建立一种应用光纤倏逝波生物传感器快速检测食品中大肠杆菌O157:H7的方法。方法 对光纤用大肠杆菌O157:H7抗体包被制备检测探针,用纳米量子点对抗体进行偶联制备检测抗体,并确定其检测的灵敏度和特异性,同时通过对人工污染样品的检测确认该方法检测实际样本的可行性。结果 建立的光纤倏逝波生物传感器检测大肠杆菌O157:H7的灵敏度达到50 CFU/mL,并具有较强的特异性。结论 利用光纤倏逝波生物传感器检测食品中污染的大肠杆菌O157:H7方法快速、准确,具有较强应用价值。     

应用DPO-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

利用双启动寡核苷酸引物（dual-priming oligonucleotide,DPO）聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7。根据DPO引物设计原则,以肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE 基因为靶基因设计一对DPO引物,经过反应体系的优化,建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7 DPO-PCR检测方法, 其检测灵敏度约为94 CFU/mL。与常规PCR方法相比,所建立的DPO-PCR方法对退火温度不敏感,在引物设计和实 验过程中不需要对引物及其退火温度反复优化,同时基于DPO引物的特殊结构又增强了其特异性。DPO-PCR方法 设计简易、特异性强,为致病性微生物的快速准确检测提供了新途径。     

Survival of Escherichia coli O157:H7 in meat product brines containing antimicrobials

Brine solution injection of beef contaminated with Escherichia coli O157:H7 on its surface may lead to internalization of pathogen cells and/or cross-contamination of the brine, which when recirculated, may serve as a source of new product contamination. This study evaluated survival of E. coli O157:H7 in brines formulated without or with antimicrobials. The brines were formulated in sterile distilled water (simulating the composition of freshly prepared brines) or in a nonsterile 3% meat homogenate (simulating the composition of recirculating brines) at concentrations used to moisture-enhance meat to 110% of initial weight, as follows: sodium chloride (NaCl, 5.5%) + sodium tripolyphosphate (STP, 2.75%), NaCl + sodium pyrophosphate (2.75%), or NaCl + STP combined with potassium lactate (PL, 22%), sodium diacetate (SD, 1.65%), PL + SD, lactic acid (3.3%), acetic acid (3.3%), citric acid (3.3%), nisin (0.0165%) + ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA, 200 mM), pediocin (11000 AU/mL) + EDTA, sodium metasilicate (2.2%), cetylpyridinium chloride (CPC, 5.5%), or hops beta acids (0.0055%). The brines were inoculated (3 to 4 log CFU/mL) with rifampicin-resistant E. coli O157:H7 (8-strain composite) and stored at 4 or 15 °C (24 to 48 h). Immediate (0 h) pathogen reductions (P < 0.05) of 1.8 to ≥ 2.4 log CFU/mL were observed in brines containing CPC or sodium metasilicate. Furthermore, brines formulated with lactic acid, acetic acid, citric acid, nisin + EDTA, pediocin + EDTA, CPC, sodium metasilicate, or hops beta acids had reductions (P < 0.05) in pathogen levels during storage; however, the extent of pathogen reduction (0.4 to > 2.4 log CFU/mL) depended on the antimicrobial, brine type, and storage temperature and time. These data should be useful in development or improvement of brine formulations for control of E. coli O157:H7 in moisture-enhanced meat products. PRACTICAL APPLICATION: Results of this study should be useful to the meat industry for developing or modifying brine formulations to reduce the risk of E. coli O157:H7 in moisture-enhanced meat products.