产氨基甲酸乙酯降解酶酵母菌的选育及产酶条件优化

氨基甲酸乙酯(EC)是一种强致癌物,近年来引起了广泛关注,研究通过筛选得到一株能降解氨基甲酸乙酯的酵母菌;通过形态学分析和ITS序列比对确定为Pichia fermentans酵母菌,再改用同一成分的液体培养基进行培养,经过离心和细胞破碎,得到粗酶液,测定酶活,通过对温度、pH、接种量的调节,得到最优产酶条件为pH 7左右,温度28℃,接种量2.5%。对酶学性质进行分析,得到该酶的最适pH为6~7,最适温度为30℃,在此温度下酶活性稳定,Fe~(2+)对此酶激活作用明显。     

可降解氨基甲酸乙酯酵母菌的筛选及降解条件优化

本实验旨在筛选得到一株可以有效降解氨基甲酸乙酯的酵母菌,并根据ITS DNA片段鉴定其种属。采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)法,测定所筛选株菌的发酵产物中氨基甲酸乙酯的含量,确定一株降解能力较强的菌株,根据系统发育树确定酵母种属,并对该菌株的降解条件进行了优化。结果表明,降解能力较强的菌株为G1-3,为鲁考弗梅奇(Metschnikowia reukaufii)酵母,优化降解条件为接种量为3%,38℃,170 r/min,发酵4.5 d,最终氨基甲酸乙酯的降解量在65.57%左右。     

传统发酵酸牛奶中产蛋白酶酵母菌的筛选及产酶条件优化

从新疆哈萨克族传统发酵酸牛奶中分离筛产蛋白酶酵母菌菌株,并确定了各菌株的产酶能力。试验从新疆塔城地区采集酸牛奶样品,以蛋白酶活性作为筛选指标进行初筛、复筛,得到5株高产蛋白酶菌株并对其产酶条件进行优化。经形态观察及26S rDNA序列分析鉴定菌株D1-3为Pichia kudriavzevii,E1-5为Issatchenkia orientalis,S1-7为Kluyveromyces marxianus,W1-10为Candida parapsilosis,S1-16为Saccharomyces cerevisiae。对其产酶条件优化得出:在最佳产酶发酵液条件下,菌株D1-3最佳产酶活力达78 U/m L、S1-7为79 U/m L、S1-16为55 U/mL、E1-5为82 U/mL、W1-10为64 U/mL,其最适产酶温度为28℃,W1-10为37℃;菌株最适产酶初始p H、接种量和时间分别为5.0、3%、48 h。     

变幻青霉氨基甲酸乙酯降解酶产酶条件优化及酶的底物特异性

在单因素优化基础上,运用正交试验设计理论,优化氨基甲酸乙酯降解酶产生菌P.variabile JN-A525的产酶条件。优化发酵培养基配方为:葡萄糖20 g/L,牛肉膏10 g/L,KH2PO45g/L、NaCl 1 g/L、KCl 5 g/L;发酵条件为:初始pH 6.0、培养温度32℃、接种体积分数3%、250 mL摇瓶装量70 mL、摇床转速100 r/min,在此优化条件下酶活比优化前提高了3.47倍。对经超声破碎、(Na)2SO4盐析、Superdex G-75凝胶过滤层析步骤初步纯化的酶之底物特异性的研究表明,在模拟黄酒体系下,该酶对尿素和氨基甲酸乙酯有相对强的降解作用,对一些酯类和氨基酸没有降解作用。     

产褐藻胶裂解酶菌种的筛选、鉴定及发酵条件优化

以褐藻酸钠为唯一碳源,经多次富集和驯化,从养殖场腐烂海带中筛选到一株高产褐藻胶裂解酶的菌株Alg07。依据菌体形态、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析,归属于芽孢杆菌属（Bacillus）,命名为Bacillusweihaiensis Alg07。通过单因素试验和正交试验,确定菌株Alg07的最佳发酵产酶培养基成分：褐藻酸钠9 g/L、蛋白胨1 g/L、酵母粉3 g/L、NaCl 5 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L、KCl 5 g/L、CaCl2 4 g/L;最佳发酵产酶条件为：250 mL三角瓶装液量40 mL、培养温度30 ℃、初始发酵pH 6.5、接种量0.5%、摇床转速180 r/min、培养时间24 h。在优化后的培养条件下,褐藻胶裂解酶活力由35 U/mL提高到563 U/mL。     

产果胶酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化

为了得到产果胶酶菌株,采用含有以果胶为唯一碳源的溴酚蓝平板,结合DP/DC值、平板颜色变化和摇瓶发酵后果胶酶活力的测定等方法进行筛选;对筛选到的菌株XHV25进行菌落形态特征、显微形态结构观察和18S r RNA、ITS、26S r RNA基因序列的测定与分析;通过单因素实验优化菌株XHV25产果胶酶的发酵条件。菌株XHV25的果胶酶活力可达到2937.34 U/m L;经鉴定该菌株XHV25为囊酵母(Zygoascus sp.);其最适发酵产酶条件为:培养基初始p H为5.5,摇床转速为160 r/min,接种量为4﹪(v/v),装液量为25 m L/250 m L,发酵温度为31℃,发酵时间为48 h;在此发酵条件下果胶酶活力为4849.90 U/m L,较优化前显著提高了65.11%。     

产果胶酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化

为了得到产果胶酶菌株,采用含有以果胶为唯一碳源的溴酚蓝平板,结合DP/DC值、平板颜色变化和摇瓶发酵后果胶酶活力的测定等方法进行筛选;对筛选到的菌株XHV25进行菌落形态特征、显微形态结构观察和18S r RNA、ITS、26S r RNA基因序列的测定与分析;通过单因素实验优化菌株XHV25产果胶酶的发酵条件。菌株XHV25的果胶酶活力可达到2937.34 U/m L;经鉴定该菌株XHV25为囊酵母(Zygoascus sp.);其最适发酵产酶条件为:培养基初始p H为5.5,摇床转速为160 r/min,接种量为4﹪(v/v),装液量为25 m L/250 m L,发酵温度为31℃,发酵时间为48 h;在此发酵条件下果胶酶活力为4849.90 U/m L,较优化前显著提高了65.11%。      

产脂肪酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化

以橄榄油为唯一碳源,采用油脂同化平板从食堂废弃物中筛选出一株产脂肪酶菌株HFE722。通过测定与分析该菌株16S rRNA基因序列,鉴定该菌株为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。菌株HFE722在初始条件（发酵温度30 ℃,接种量为1%,自然pH,装液量为100 mL/250 mL,摇床转速为200 r/min）下培养36 h,测得发酵液上清液脂肪酶酶活为2.17 U/mL。优化后所得菌株HFE722产酶的最适发酵条件为：发酵温度30 ℃,发酵周期为36 h,接种量为1%（V/V）,初始pH 7.0,装液量为50 mL/250 mL,摇床转速为160 r/min。在最佳发酵条件下,发酵液上清液酶活可达到5.8 U/mL,酶活较优化前提高了167.28%。     

高效降解褐藻胶新菌种的筛选、鉴定及产酶条件优化

以褐藻酸钠为唯一碳源,从腐烂的海带中筛选出1株高效降解褐藻胶的菌株,根据其形态学特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定该菌株属于白蚁菌属(Isoptericola),命名为嗜盐白蚁菌WX(Isoptericolahalotolerans WX)。菌株WX的最佳培养基组成为:褐藻酸钠6 g/L、蛋白胨5 g/L、酵母粉2.5 g/L、NaCl 25 g/L、MgSO4 2 mmol/L、CaCl2 0.5 mmol/L、KH2PO4 1 mmol/L、FeSO4 0.2 mmol/L、MnSO4 0.3 mmol/L;摇瓶最佳培养条件为:250 mL三角瓶装瓶量50 mL,pH 8.0,培养温度25℃,摇床转速180 r/min,培养时间44 h。2 mmol/LMg2+和0.2 mmol/L Fe2+对酶活力有明显的促进作用。在优化后的培养条件下,褐藻胶裂解酶活力达到432 U/mL,较优化前提高了13倍。此外,嗜盐白蚁菌WX同时具有淀粉酶和褐藻胶裂解酶活性,具有广泛的应用前景。     

产α-葡萄糖苷酶抑制剂酵母菌的筛选、发酵条件优化及酶动力学研究

目的：筛选产α-葡萄糖苷酶抑制剂酵母菌,以丰富微生物源α-葡萄糖苷酶抑制剂的来源,开发食用降糖产品。方法：采用4-硝基酚-α-D吡喃葡萄糖苷(p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside,p-NPG)方法从酒糟中筛选产α-葡萄糖苷酶抑制剂能力较强的酵母菌,通过26S rDNA D1/D2区基因序列分析对其进行鉴定,并以α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标,利用单因素试验及正交试验对其进行发酵条件优化。结果：获得1株产α-葡萄糖苷酶抑制剂能力较强的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),编号为sg＿093,该菌株产α-葡萄糖苷酶抑制剂最佳发酵条件为以3 g/100 mL葡萄糖为碳源、1 g/100 mL酵母抽提物为氮源、初始p H值为7.0、接种量1.5%、温度20℃下发酵48 h,所得发酵液的α-葡萄糖苷酶抑制率为66.0%,是优化前的1.5倍,并且是以可逆混合竞争方式抑制α-葡萄糖苷酶。结论：获得1株酿酒酵母,其发酵产物对α-葡萄糖苷酶活性有较好的抑制作用。     

一株产胆固醇氧化酶酵母菌的鉴定及发酵条件优化

从富含胆固醇环境的土壤等中进行采样,经富集培养后,以胆固醇为单一碳源的筛选培养基进行筛选,得到不同形态的5株菌株。挑选产酶量最高的一株进行菌种鉴定,并对其发酵产酶条件进行优化。结果表明,该高产胆固醇氧化酶菌株属于季也蒙毕赤酵母属(P.guilliermondii)。其最适发酵培养基组成为:玉米淀粉0.7%,酵母膏1.5%,胆固醇0.2%,吐温801%;理想的培养条件为:培养基pH7.5,37℃条件下培养,装液量为75mL于250mL三角瓶中。优化发酵条件后产酶量达到3501U/L,比发酵前提高了1.5倍。      

一株产胆固醇氧化酶酵母菌的鉴定及发酵条件优化

从富含胆固醇环境的土壤等中进行采样,经富集培养后,以胆固醇为单一碳源的筛选培养基进行筛选,得到不同形态的5株菌株。挑选产酶量最高的一株进行菌种鉴定,并对其发酵产酶条件进行优化。结果表明,该高产胆固醇氧化酶菌株属于季也蒙毕赤酵母属(P.guilliermondii)。其最适发酵培养基组成为:玉米淀粉0.7%,酵母膏1.5%,胆固醇0.2%,吐温801%;理想的培养条件为:培养基pH7.5,37℃条件下培养,装液量为75mL于250mL三角瓶中。优化发酵条件后产酶量达到3501U/L,比发酵前提高了1.5倍。     

纤维素降解芽孢菌的筛选及产酶条件优化

为筛选高效的纤维素降解芽孢菌,利用刚果红平板染色法初筛,纤维素酶活性（以滤纸酶活表示）为评价指标进行复筛,从腐木中分离筛选出2株高产纤维素酶菌株K1、K2;结合形态学观察、生理生化特征和16S rDNA基因序列同源性分析,分别鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。对培养条件进行单因素优化和正交试验优化,初步确定菌株K1最佳产酶条件为培养时间3 d,培养温度34 ℃、初始pH值7.0、接种量5%、装液量40%,在此优化条件下滤纸酶活为98.4 U/mL,是优化前的2.1倍。菌株K2最佳产酶条件为培养时间2 d,培养温度34 ℃、初始pH值7.0、接种量6%、装液量为30%,在此优化条件下,滤纸酶活为86.7 U/mL,是优化前的1.8倍。     

新疆哈萨克族奶酪产脂肪酶酵母菌的筛选及产酶条件优化

从新疆不同地区采集到的哈萨克族手工奶酪中分离得到100株菌种,通过分离(RB)培养基和罗丹明B培养基筛选出4株产脂肪酶酵母菌,分别为Y-2、Z-5、S-6、N-5。结合菌种生理生化及26SrDNA基因序列分析确定4株菌的系统进化地位,在系统发育上Y-2、Z-5隶属于马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus),S-6和N-5分别隶属于毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)。利用对硝基苯酚法对4株菌种产酶酶活进行测定,发现K.marxianus Z-5产脂肪酶酶活最高,达23.00 U/mL;对K.marxianus Z-5产酶条件进行优化,确定最优发酵条件为:温度30℃、pH 7.5、接种量2.5mL/100mL左右时,其酶学活性最强,为25.99U/mL。     

降解桔霉素酵母菌的筛选及降解条件的优化

目的 从阿瓦提红葡萄果园土壤以及实验室现有酵母菌株中筛选出一株降解桔霉素(citrinin, CIT)的酵母菌, 并对其降解桔霉素的培养条件进行优化。方法 以YES为基本培养基, 将筛选得到的酵母菌与高产CIT红曲菌M7共培养, 挑选对CIT降解率较高的菌株, 采用形态学和分子生物学进一步对菌株进行鉴定, 采用单因素结合正交试验法优化酵母菌降解CIT的培养条件。结果 得到一株降解CIT能力较高的酵母菌株PT, 经鉴定为库德毕赤酵母, 酵母菌PT降解CIT的最优条件为: 葡萄糖添加量为165 g/L, FeSO4添加量为0.50 g/L, pH为3.0, 于28℃培养13 d, 在此培养条件下酵母菌PT对CIT的降解率为76.78%。结论 采用生物法降解CIT是可行的途径。本研究结果可为微生物脱除CIT的方法提供参考, 同时筛选的酵母菌也可应用于其它发酵食品中。     

纤维素降解菌株的筛选及其产酶条件优化

为了寻求快速有效降解沼气发酵有机质中的高分子化合物,本实验从腐殖质土壤中筛选到一株高效降解纤维素菌株,在以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的液体培养基中培养,所产生的纤维素酶对玉米芯和滤纸均表现出较强降解能力。其次做了对菌株培养条件优化的实验,结果表明,菌株的最佳降解纤维素条件为反应温度30℃、发酵液接种量为1%、0.75%羧甲基纤维素钠为碳源、1.5%胰蛋白胨为氮源,优化菌株培养条件后,纤维素酶活力增加了2.8倍。     

高产脂肪酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化

采用罗丹明B平板法和脂肪酶活力测定从张弓老酒大曲中分离筛选出一株高产脂肪酶菌株E-11,经形态学、生理生化试验和16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。通过单因素和响应面试验设计对该菌株的产酶条件进行优化,结果表明,最佳产酶条件为葡萄糖3%、蛋白胨4%、初始pH值为8.0。优化后的脂肪酶活力达15.09 U/mL,是优化前产酶能力的1.2倍。     

酵母菌株产麦角固醇发酵条件优化

采用Plackctt-Burman试验设计法及响应面法分析,对产麦角固醇酵母菌株YF2-8进行了发酵条件优化研究.首先利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响麦角固醇产量的三个主要因素:葡萄糖,蛋白胨、摇床转速.在此基础上用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,再利用Box-Bebnken试验设计及响应面分析法进行回归分析.结果表明,葡萄糖、摇床转速与麦角固醇产量有显著的相关性,并得到优化条件为:葡萄糖8.97%,蛋白胨2.36%、摇床转速为218 r/min,麦角固醇产量为6.56×10-2mg/mL,麦角固醇产量提高了5.98%.     

产漆酶细菌的筛选、鉴定及产酶条件的初步优化

从甘蔗渣滤泥中筛得一株具有漆酶活性的细菌SYBC star X,通过16S r RNA基因序列分析,并结合生理生化实验及形态学观察,鉴定为考克氏菌属(Kocuria);利用液态发酵法研究了碳源、氮源、金属离子对其发酵产漆酶的影响,确定菌株SYBC star X的最优碳源为15 g/Lα-乳糖,最佳氮源为40 g/L大豆蛋白胨,最适铜离子和锰离子的浓度分别为3 mmol/L和0.4 mmol/L。     

产几丁质脱乙酰酶海洋细菌的筛选鉴定及产酶条件优化

从海洋样品中筛选产几丁质脱乙酰酶的细菌,对高产菌株进行鉴定,并利用响应面法优化其发酵条件。结果表明,利用添加硝基乙酰苯胺的平板,根据黄色变色圈从海州湾海域海泥样品中筛选获得一株产几丁质脱乙酰酶的细菌MCDA3-3。通过形态学、生理生化特征以及16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为海洋硝酸盐还原菌（Nitratireductor aquimarinus）。利用单因素和响应面法优化菌株MCDA3-3发酵产酶培养基和培养条件,获得最佳发酵培养基配方为木薯淀粉1.1%,玉米浆1.0%,FeCl3·6H2O 0.045%,陈海水配制,pH 5.7;最佳发酵条件为接种量4%,30 ℃、180 r/min发酵48 h。在此条件下酶活为4.07 U/mL,是优化前的2.3倍。