优化生活饮用水中微生物检测的处理方法

目的优化生活饮用水微生物检测中总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌滤膜法的稀释及过滤方法,并验证方法可行性。方法待测水样稀释1倍,旋转加入稀释液过滤,再依据国家标准GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》滤膜法的条件,培养、验证;同时按照该方法处理能力验证待测水样,检验并上报结果。结果总大肠菌、耐热大肠菌、大肠埃希氏菌菌落在滤膜上生长均匀,可计数,能力验证结果|Z|均小于2。结论通过能力验证证实本实验稀释方法合理,过滤手段有效,适用于复杂水样总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌的检测。     

ONPG培养基快速测定食品中大肠菌群的研究

目的探讨邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(o-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside,ONPG)培养基在快速测定食品中大肠菌群的应用。方法比较ONPG培养基和月桂基硫酸盐胰蛋白胨(lauryl sulfate tryptose,LST)肉汤测定大肠埃希氏菌不同时段的结果,使用χ~2-test分析;比较ONPG培养基和LST肉汤测定食品中大肠菌群的结果,使用Wilcoxon配对法分析。结果测定大肠埃希氏菌时ONPG培养基18 h结果与LST肉汤48 h结果无显著性差异(P0.05);测定食品中大肠菌群时ONPG培养基18 h结果与LST肉汤48 h结果无显著性差异(P0.05)。结论 ONPG培养基可用于快速测定食品中大肠菌群。     

3种方法检测食品中致泻大肠埃希氏菌检测能力验证结果分析

目的提高食品中致泻大肠埃希氏菌的检测能力,促进实验室检测能力的提高。方法参照GB4789.6-2016《食品微生物学致泻大肠埃希氏菌检验》方法进行检测,采用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统进行生化鉴定、血清学鉴定,对可疑菌落进行普通PCR确证试验。同时使用多重实时荧光PCR法以及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionizationtime-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析鉴定可疑菌落。结果国标法和多重实时荧光PCR法能准确鉴定出目标菌,MALDI-TOF-MS可以检测大肠埃希氏菌,但无法区分致泻大肠埃希氏菌和肠出血性大肠埃希氏菌。结论 3种方法各有优劣,同时使用,综合判断,能确保试验结果准确快速。     

多种不同方法对微生物能力验证样品测试结果的比较及分析

目的在检测实验室能力验证样品时,通过多种方法进行比较,提高检测能力和结果准确性。方法菌落总数依据国标方法,在相同条件下由不同操作人员重复测定共10次,通过测量结果的不确定度的评定确定置信区间。大肠菌群通过3种方法计数,用大肠杆菌/大肠菌群测试片对大肠埃希氏菌进行快速定性判定。金黄色葡萄球菌通过不同培养基、涂布量、接种方法的7种不同组合方法进行检测。结果本次能力验证结果报告菌落总数结果为23000 CFU/mL、大肠菌群结果为10000 CFU/mL、金黄色葡萄球菌结果为12000 CFU/mL、大肠埃希氏菌检出。4项测试结果均为满意。结论通过多种方法同步进行,能有效提高检测能力和结果准确性。     

3种食品致病菌实时荧光核酸恒温扩增试剂盒

目的 以传统国标培养法作为参考比对方法,考察实时荧光核酸恒温扩增(simultaneous amplification and testing, SAT)食品检测试剂盒,在食品中检测致病菌志贺氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7/NM,以及阪崎肠杆菌的一致性。方法 以食品中志贺氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7/NM和阪崎肠杆菌国标培养法为参考方法,以基因测序法作为确认法。,考量SAT食品检测试剂盒方法的灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率、准确度,同时进行2种方法的显著差检验。结果 3种SAT食品检测试剂盒灵敏度均为100%,假阴性为0;特异性志贺氏菌100%,阪崎肠杆菌100%,大肠埃希氏菌O157：H7/NM 98.4%。大肠埃希氏菌O157：H7/NM假阳性率为1.2%。结论 SAT试剂盒检测方法具有高灵敏度、特异性强、准确度高,无一例漏检。     

生活饮用水中微生物学检验能力验证的结果与分析

目的提升检验人员检测生活饮用水中微生物的能力,增强实验室的竞争力。方法依据能力验证参试指导书和国家标准GB/T 5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》的要求,分别对1~#、2~#菌落总数样品,3~#、4~#总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌样品和5#、6#总大肠菌群、大肠埃希菌样品进行检验。结果 6个样品|Z|≤2,均取得满意结果。结论通过参加能力验证,可依据中期报告总结各方法间的优劣,依据Z值结果分析实验过程中存在的问题,也可评价检验员的业务能力水平,因此参加能力验证可有效地提高实验室的检验能力。     

Taqman探针荧光PCR法检测食品中的大肠埃希氏菌O145

针对大肠埃希氏菌O145的O抗原基因簇的wck D基因的特异性序列设计引物和Taqman探针,建立检测大肠埃希氏菌O145的荧光PCR方法,对其灵敏度、特异性进行验证,并将其用于食品样品的检测。结果表明,本研究中的方法可实现对大肠埃希氏菌O145的特异性扩增,其它27株非O145大肠埃希氏菌和20株非大肠埃希氏菌细菌的菌株均无扩增;检测的灵敏度可达165拷贝/反应;339份食品样品EC肉汤增菌后用本荧光PCR法进行检测,检出大肠埃希氏菌O145阳性31份,阳性率为9.1%。实验结果表明,本研究成功建立了可用于食品中大肠埃希氏菌O145的Taqman探针荧光PCR方法,食品样品采用EC肉汤增菌24 h、热裂解法提取核酸,增菌后检测所需时间由至少3 d~7 d缩短为仅需2 h~3 h,食品检测全过程仅需约28 h,经证实本方法特异性强、操作简便,为食品中大肠埃希氏菌O145提供了一种的快速检测手段。     

3种食品致病菌实时荧光核酸恒温扩增试剂盒方法验证比对研究

目的以传统国标培养法作为参考比对方法,考察实时荧光核酸恒温扩增(simultaneous amplification and testing,SAT)食品检测试剂盒,在食品中检测食源性致病菌如志贺氏菌、大肠埃希氏菌O157∶H7/NM、阪崎肠杆菌的一致性。方法以食品中志贺氏菌、大肠埃希氏菌O157∶H7/NM和阪崎肠杆菌国标培养法为参考方法,以基因测序法作为确认法,考量SAT食品检测试剂盒方法的灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率、准确度,同时进行2种方法的显著差异检验。结果 3种SAT食品检测试剂盒灵敏度均为100%,假阴性为0;特异性:志贺氏菌100%,阪崎肠杆菌100%,大肠埃希氏菌O157∶H7/NM 98.4%。大肠埃希氏菌O157∶H7/NM假阳性率为1.2%。结论 SAT试剂盒检测方法具有灵敏度高、特异性强、准确度高的优点,无一例漏检。     

荧光型重组酶聚合酶扩增技术检测食品中大肠埃希氏菌O157

研究基于荧光型重组酶聚合酶扩增(exo-RPA)技术原理,建立了一种大肠埃希氏菌O157的快速检测方法。应用该方法对多种大肠埃希氏菌O157菌株和非大肠埃希氏菌O157菌株的检测结果表明,该方法的荧光探针和引物具有良好的特异性。对于梯度稀释的插入靶基因序列的质粒pUC57-rfbE和大肠埃希氏菌0157的检测,大肠埃希氏菌O157 exo-RPA检测灵敏度分别可以达到10~2 copies/μL和2.1×10~4 cfu/mL。对食品样品中大肠埃希氏菌0157的检测,exo-RPA方法显示出了良好的稳定性。并且食品样品中目标菌经4 h增菌后,该方法的灵敏性可以满足对食品样品中初始浓度为2.1×10~1 cfu/mL的目标菌的检测。因为大肠埃希氏菌exo-RPA方法配套设备简便、廉价,所以该方法可以在各级检测机构中推广,并适用于食品生产到消费各环节中大肠埃希氏菌0157的即时检测。     

食品中肠道出血性大肠埃希氏菌能力验证样品的鉴定与分析

目的：提高食品安全检测能力,增强实验室竞争力。方法：按照肠道出血性大肠埃希氏菌能力验证作业指导书及《食品安全国家标准 食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验》(GB 4789.6—2016)的要求对编号为L825、H435能力验证考核样品进行肠道出血性大肠埃希氏菌的检测。结果：样品L825检出肠道出血性大肠埃希氏菌,样品H435未检出该菌。结论：2份能力验证样品结果均为满意。     

水质中总硬度的检测方法

目的建立快速检测水质总硬度的检测方法。方法基于工厂实际生产需求,采用快速试纸条方法对工厂内使用的配料用水、清洗用水、源水的总硬度进行检测,并通过方法优劣性分析、适用性验证、准确性验证、精密度验证等维度进行分析总结,同时与国标方法进行结果差异对比。结果通过对4个维度的实验证明,快速试纸条法检测结果与国标方法对比无显著差异。结论本研究中试纸条快速检测方法,可以满足生产过程中配料用水、清洗用水、源水的质量检测。     

应用干制培养基检测食品中金黄色葡萄球菌

目的建立金黄色葡萄球菌X干制培养基(Staphylococcus aureus X medium, XSA)检测食品中金黄色葡萄球菌的分析方法。方法依据GB 4789.10—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》中前处理的方法制备样品,将样品添加到7.5%NaCl肉汤增菌后接种至干制培养基XSA上进行培养,通过鉴定实验进行定性检测和菌落平板计数进行定量检测,并用国标法同时进行定性及定量检测。结果在定性检测方面,该方法和国标方法假阴性率和假阳性率均为0%,但是检测时间由92 h缩短为48 h,在定量检测方面,该方法与国标法的对数偏差值的绝对值为0.3979<0.45,并且在6次检测同一个样品时的结果相对标准偏差较小,从而说明该方法和国标法的准确度相当,检测时长由78h缩短至24h,大大提高了检验效率。结论该方法操作简便快捷,结果稳定,适用于食品中金黄色葡萄球菌的检测。     

大肠菌群测量审核结果与分析

目的通过测量审核提升食品中大肠菌群检测能力和实验室质量管理水平。方法以测量审核作业指导书、GB 4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》第二法平板计数法为依据,采用平板计数法、PetrifilmTM大肠菌群测试片法同时检测样品。运用配对t检验法评价2种不同方法对乳粉中大肠菌群计数结果一致性的影响。结果平板计数法与PetrifilmTM大肠菌群测试片法检测结果无明显差异,样品|Z|2,结果满意。结论可根据实际情况来选择相应方法检测食品中大肠菌群以提高检测效率和质量。     

食品中大肠菌群计数实验室内部比对研究

目的监控实验室检测质量和校准结果,对发现的问题及时采取措施,以保证实验室的良好检测水平。方法通过采用GB 4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》、SN/T 4547-2017《商品化试剂盒检测方法大肠菌群和大肠杆菌方法一》2种检测方法,对同一质控样品进行检测,对2名实验人员的实验结果进行分析和能力评定。结果 2名检验人员检验结果具有再现性, 2种方法的结果也具有一致性。结论组织比对活动,不断对实验中出现的问题进行改进和总结,积累经验,可以稳固和进一步提升个人与实验室的能力。2种检测方法均可对于检测大肠菌群的检测,在实验中体现了大肠菌群测试片法在操作上和时间上有较大优势。     

饮用天然矿泉水中产气荚膜梭菌检测方法的改良

将饮用天然矿泉水中产气荚膜梭菌检测国标方法GB 8538-2016《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》作一些改良,以使检测结果更加准确可靠。用产气荚膜梭菌CICC22949人工污染的水样通过孔径为0.22μm的无菌滤膜过滤,分别将胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂(tryptose-sulfite-cycloserine agar,TSC)培养基和亚硫酸盐-多黏菌素-磺胺嘧啶琼脂(sulfite-polymyxin-sulphadiazxine agarr,SPS)培养基采用双层培养基覆盖法进行试验。改良后的方法在滤膜上有黑色可疑菌落,而国标方法滤膜上的菌落无黑色。TSC培养基上目标菌计数值显著高于SPS培养基计数值(P<0.05)。用新鲜配制的TSC培养基经双层培养基覆盖改良后的方法检测产气荚膜梭菌,现象更明显,结果更可靠,更适合饮用天然矿泉水中产气荚膜梭菌的检验。     

A rapid routine test for coliform contamination in food

A method has been developed for the detection of coliform organisms in foodstuffs which is an alternative to the standard MacConkey test. A relationship has been established between the number of organisms originally present and the time required for their detection. The new method makes use of radioactive tracers and requires less time to confirm the presence of coliform contamination.     

国标法和纸片法对食品中大肠菌群检测比较

介绍了用国标发酵法(下简称国标法)和快速检测纸片法(下简称纸片法)对进出口食品中大肠菌群的检测结果采集进出口冷冻饮品、果汁、淀粉、奶粉、乳清粉等各类食品268份,用国标法与纸片法进行了对比检测试验两种方法对大肠菌群检测结果相符的260份,符合率97.1％;两种方法对268份样品检验的合格率相同,合格符合率100％纸片法简便、快速,能代替国标法准确测定各类食品中的大肠菌群