北京市顺义区2起产气荚膜梭菌食物中毒病原学分析

目的研究2起食物中毒事件中分离到的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,CP)的病原学特征。方法采集2起食物中毒事件涉及的病例、厨师、烹饪用具和可疑食品等标本或样品,并对其进行常见病毒和细菌的实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)初筛及细菌分离培养。计数标本或样品中CP数量,并对分离到的CP菌株进行毒力基因、脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)和耐药性检测。结果经过real-time PCR和细菌分离培养,在部分病例标本以及食品和涂抹样品中检出CP,其他常见病毒和细菌均为阴性。大部分病例粪便标本的CP计数结果大于1.0×10~6 CFU/g。10株CP分离菌株均携带毒力基因;菌株PFGE分为7个带型,其中第一起事件有3株为同一带型,第二起有2株为同一带型;菌株对亚胺培南、甲硝唑、头孢曲松和青霉素敏感,6株对克林霉素耐药、1株中介,6株对氯霉素中介。结论 PCR可应用于CP毒力基因的快速筛查,PFGE也可辅助判定CP引起的食物中毒事件,同时应加强对CP的日常监测和其耐药性的防范。     

一起疑似产气荚膜梭菌腹泻暴发事件实验室检测分析

目的 分析一起疑似由产气荚膜梭菌导致腹泻暴发事件的实验室检测结果,为产气荚膜梭菌食物中毒实验室检测策略的改进奠定基础。方法 采集暴发事件中4例病例肛拭子样本,应用荧光PCR方法检测肛拭子及其增菌液中cpa基因与cpe基因。对肛拭子样本进行产气荚膜梭菌分离培养,对部分分离单菌落进行产气荚膜梭菌毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型。结果 4例病例样本中均检测到cpa基因和cpe基因。从病例1样本中挑取并鉴定为产气荚膜梭菌的18个单菌落中获得1个cpe+菌落,构成比为5.56%（1/18）;从病例2样本中挑取并鉴定为产气荚膜梭菌的6个单菌落中获得1个cpe+菌落,构成比为16.7%（1/6）;病例3未分离到cpe+菌落,病例4未分离到产气荚膜梭菌。11株产气荚膜梭菌菌株包括A型和C型两种,包含5种PFGE带型,分离自病例1和病例2的cpe+阳性菌株PFGE带型一致。结论 本次暴发事件可能由产气荚膜梭菌导致,综合使用各种实验室检测方法可在产气荚膜梭菌诊断标准滞后的情况下协助暴发事件分析。     

产气荚膜梭菌质控样品的研制

目的 制备产气荚膜梭菌质控菌株质控样品.方法 将产气荚膜梭菌菌悬液于36℃厌氧培养至浓度为107 CFU/mL,以10％(m/m,下同)脱脂奶粉、5％海藻糖、5％蔗糖、1％谷氨酸钠、0.5％抗坏血酸钠为菌体保护剂,使用冷冻干燥法制备冻干菌剂.依据CNAS-CL03-A001:2019《能力验证提供者认可准则在微生物领域...     

辽宁省食品中产气荚膜梭菌的污染状况与基因特征

目的 了解辽宁省食品中产气荚膜梭菌污染状况、血清型及毒素基因携带特征。方法 在辽宁省6个市采集生畜肉和冷冻鱼糜制品样品260份,依据GB 4789.13—2012方法进行产气荚膜梭菌检测,同时采用生化和荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法进行菌种鉴定;提取菌体DNA,采用PCR方法进行毒素基因分型检测;并针对16S rRNA基因序列进行进化树分析。结果 260份不同食品样品中检出15株产气荚膜梭菌,总检出率为5.8%,其中生羊肉检出率最高,为29.0%(9/31)。所有菌株均检出α毒素,其中仅检出α毒素的菌株占66.7%(10/15),为A型产气荚膜梭菌;同时检出α毒素和β毒素菌株占33.3%(5/15),为C型菌株。总计6株菌检出β₂毒素,包括4株A型菌和2株C型菌;肠毒素CPE基因的检出率为6.7%(1/15);16S rRNA进化分析得出携带同一毒素基因的菌株遗传关系较近。结论 辽宁省生畜肉和冷冻鱼糜制品中均检出产气荚膜梭菌,其中生畜肉污染较严重,且主要为A型菌和C型菌,引起食物中毒风险高,对食品安全构成潜在的威胁,应加强监测与防控。     

外送餐引起产气荚膜梭菌食物中毒流行病学调查分析

目的查明发生在某工厂的食源性疾病暴发的可疑食品、致病因子及危险因素等,并对事件调查过程中暴露出的问题进行探讨,为今后类似事件的防控和调查提供参考依据。方法病例定义为于2019年3月3日～3月4日期间在M工厂加班职工中发生腹痛、腹泻(≥3次/24 h)或呕吐症状之一者,运用描述性和分析性流行病学方法开展病例访谈和回顾性研究。收集病例的粪便标本、剩余食品和相关环境样品进行病原分离和采用聚合酶链式反应(PCR)检测阳性菌株的毒素基因。结果检索到病例106名,罹患率为73.6%(106/144),临床症状以腹泻(78.3%,83/106)、腹痛(78.3%,83/106)为主,部分半腹部胀气、胀痛(9.4%,10/106),无发热;流行曲线为点源暴露模式,潜伏期为2～22 h,可疑餐次为2019年3月3日的午餐;单因素分析和Logistic回归分析结果显示,发病与红烧鱼块[相对危险度(RR)=1.55, 95%置信区间(95%CI):1.29～1.85]、蒜苗肉丝(RR=1.26, 95%CI:1.01～1.57)和雪菜烧鸭血(RR=1.47, 95%CI:1.16～1.87)有关;在3份肛拭子、3份环境样品中检出产气荚膜梭菌,菌株和2份剩余食品均检测出α毒素和产气荚膜梭菌肠毒素(CPE)基因。送餐的D企业在加工经营中存在着被细菌污染并繁殖的条件。结论本次事件是因食用某供餐企业提供的配送餐引起的产气荚膜梭菌食物中毒,外送餐做好后应迅速冷却、低温储存,不能立即进食的,在食前要充分加热。     

聚赖氨酸对产气荚膜梭菌的抑菌研究

产气荚膜梭菌（Clostridiumperfringens）是真空包装熟肉制品中最常见的一种厌氧污染菌。研究表明,ε-聚赖氨酸对其具有很强的抑制作用,在最适抑菌pH下（pH6.5）,ε-聚赖氨酸对产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度（MIC）为0.025%;高价金属阳离子对ε-聚赖氨酸的抑菌活性有明显的抑制作用,而EDTA则可以络合高价金属离子,增强其抑菌作用。将0.01%的EDTA和0.01%的ε-聚赖氨酸复合使用时可完全抑制产气荚膜梭菌的生长繁殖。      

聚赖氨酸对产气荚膜梭菌的抑菌研究

产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)是真空包装熟肉制品中最常见的一种厌氧污染菌。研究表明,ε-聚赖氨酸对其具有很强的抑制作用,在最适抑菌pH下(pH6.5),ε-聚赖氨酸对产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.025%;高价金属阳离子对ε-聚赖氨酸的抑菌活性有明显的抑制作用,而EDTA则可以络合高价金属离子,增强其抑菌作用。将0.01%的EDTA和0.01%的ε-聚赖氨酸复合使用时可完全抑制产气荚膜梭菌的生长繁殖。     

北京市朝阳区食物中毒相关金黄色葡萄球菌病原学分析

目的 了解2017年北京市朝阳区11株食物中毒相关金黄色葡萄球耐药性、耐药基因、毒力基因及分子分型。方法 依据GB4789.10-2016对甲、乙饭店留样食品、餐具及厨师手涂抹样品进行金黄色葡萄球菌分离鉴定;荧光定量PCR法检测耐药基因mecA、vanA与毒力基因sea、seb、sec、sed、see;纸片法与微量肉汤稀释法进行药物敏感性试验;脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行溯源分析。结果 甲、乙饭店留样食品、餐具涂抹及厨师手涂抹样品共检出11株金黄色葡萄球菌;耐药基因mecA、vanA与毒力基因sea、seb、sec、sed、see均未检出;青霉素100%耐药,四环素、氯霉素耐药率分别为27.3%、9.09%,未发现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株;PFGE分型显示：甲饭店餐具涂抹菌株、手涂抹菌株、乙饭店所有菌株为3种带型。 结论 甲乙饭店分别为两起由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件,皆为携带菌株的厨师污染餐具及食品引起,菌株具有较高耐药性。     

产气荚膜梭菌肠毒素基因地高辛探针制备与检测方法建立的初步研究

产气荚膜梭菌（ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ,ＣＰ）是人类和家畜重要的厌氧性病原菌,产生肠毒素的ＣＰ是人类食物中毒病原菌。本研究用地高辛标记肠毒素基因制备探针,并建立了原位杂交检测方法,直接检测肠毒素基因（ｃｐｅ）。这是继ＰＣＲ检测方法后又一项特异性基因诊断技术。由于利用了光学显微镜观察结果,形态学上比较直观,增加了实验的准确性。与ＰＣＲ、乳胶凝集相比,原位杂交检测方法具有较高的敏     

从一起疑似产气荚膜梭菌食源性疾病暴发调查反思实验室依赖的病因筛查思路

目的调查一起急性胃肠炎暴发的原因,并对当前基层疾病预防控制机构在食源性疾病暴发流行病学调查中有关样品和标本采集后,致病因子的筛查思路进行了分析探讨。方法制定病例定义,开展病例搜索和个案调查,采用描述性流行病学方法分析事件特征;开展病例对照研究探讨危险因素和现场卫生学调查追溯原因。采集病例标本和环境样品进行致病菌分离。结果共搜索病例43例,临床表现主要以腹泻(100.0%,43/43)、腹痛(93.0%,40/43)、恶心(32.6%,14/43)等为主。流行曲线符合点源暴发模式,可疑餐次为2013年9月12日午餐,病例对照研究结果提示烧鸭为可疑食物(OR=4.0,95%CI为1.04~15.23)。共采集各类样品和标本36份,在13份病例肛拭子中分离培养出产气荚膜梭菌5份,阳性率为38.5%。结论该事件为一起疑似产气荚膜梭菌食源性疾病暴发,可能危险因素为烧鸭烤熟后在室温下长时间(约5~6 h)缓慢冷却后受污染,且未经重新加热直接进食所致。建议加强对餐饮机构厨师的监督管理,防止类似事件再次发生。基层流行病学调查人员应摒弃"实验室依赖"的惯性思维,加强对各种致病因子"症状流行病学"知识的归纳总结,以降低在各种食源性疾病暴发中,因不熟悉疾病临床特征而导致的误判和漏检。     

苏州市一起疑似类志贺邻单胞菌引起的食物中毒调查与分析

目的分析2019年6月苏州市某幼儿园食物中毒的原因,了解病原菌的基因分型和耐药谱情况。方法通过问卷调查、电话访谈,查阅医院就诊记录、餐厅订餐记录等主动搜索病例,开展病例个案调查和现场卫生学调查,采集相关样品进行实验室检测。以分离培养,质谱快速鉴定,VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪生化鉴定进行鉴定分析,脉冲场电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)进行基因分型,药敏试验采用微量肉汤稀释法。结果共搜索到17位病例(包括确诊病例4人),临床表现为腹痛、腹泻等胃肠道不适症状,均无头痛、发热等其他不适症状。6月20日中餐为可疑餐次,此外无其他共同饮食史。现场共采集47份样本(包括菜品、环境样本和肛拭子),其中4份学生肛拭子检出类志贺邻单胞菌。PFGE分型结果显示其中3株菌100%同源,属于同一型别,另一株菌与其差异较大,属于不同型别。对14种抗生素的药敏分析显示,3株菌(同一型别)除对氨苄西林耐药外还对甲氧苄胺嘧啶/磺胺甲噁唑耐药,对其它抗生素均敏感。另1株菌对氨苄西林耐药,对其它抗生素均敏感。结论此次事件很可能是一起由类志贺邻单胞菌引起的食物中毒,并且可能来源于不同的传染源。     

Novel insights into the epidemiology of Clostridium perfringens type A food poisoning

Clostridium perfringens food poisoning ranks among the most common gastrointestinal diseases in developed countries. The disease is caused by C. perfringens enterotoxin (CPE) encoded by cpe and produced by less than 5% of C. perfringens type A strains. Molecular epidemiological research in the past 15 years has focused on the reservoirs and routes of cpe-positive C. perfringens aiming to clarify the role and epidemiology of chromosomal and plasmid-borne cpe-carrying strains. This literature review highlights novel aspects in the epidemiology of CPE-mediated diseases. We suggest that (1) chromosomal and plasmid-borne cpe-carrying C. perfringens strains are genetically and epidemiologically distinct and have adapted to different environments; (2) not only chromosomal but also plasmid-borne cpe-carrying C. perfringens strains cause food poisonings; (3) other CPE-mediated diseases, such as antibiotic-associated and sporadic diarrhea, associated with plasmid-borne cpe-positive strains, may be food-related; (4) the role of animals as the main reservoir of cpe-positive C. perfringens needs to be reconsidered; (5) humans serve as an important reservoir of cpe-positive C. perfringens, introducing a contamination risk into foods through handling; and (6) the current standard procedures to diagnose C. perfringens food poisoning fail to detect and isolate many C. perfringens strains, distorting the epidemiological understanding of C. perfringens food poisoning.     

4起副溶血性弧菌食源性疾病暴发事件分离株病原学特征和溯源分析

目的 分析2019年淄博市4起副溶血性弧菌食源性疾病暴发事件分离株的病原学特征.方法 采用血清学分型、毒力基因检测(tlh、tdh、trh)、微量肉汤稀释法药敏试验和脉冲场凝胶电泳(PFGE)对11株分离株进行分析.结果 9株患者分离株血清型鉴定为03:K6型,毒力基因均为tlh+tdh+trh-;2株环境分离株血清型...     

Inhibitory effects of nisin against Clostridium perfringens food poisoning and nonfood-borne isolates

The enterotoxigenic Clostridium perfringens type A is the causative agent of C. perfringens type A food poisoning (FP) and nonfood-borne (NFB) human gastrointestinal diseases. Due to its ability to form highly resistant endospores, it has become a great concern to the meat industry to produce meat free of C. perfringens. In this study, we evaluated the antimicrobial effect of nisin against C. perfringens FP and NFB isolates. No inhibitory effect of nisin was observed against germination of spores of both FP and NFB isolates in laboratory medium. However, nisin effectively arrested outgrowth of germinated spores of C. perfringens in rich medium. Interestingly, germinated spores of NFB isolates possessed higher resistance to nisin than that of FP isolates. Furthermore, nisin exhibited inhibitory effect against vegetative growth of both FP and NFB isolates in laboratory medium, with vegetative cells of NFB isolates showing higher resistance than that of FP isolates. However, the antimicrobial activity of nisin against C. perfringens was significantly decreased in a meat model system. In conclusion, although nisin showed inhibitory effect against spore outgrowth and vegetative cells of C. perfringens FP and NFB isolates in laboratory conditions, no such effect was observed against C. perfringens spores inoculated into a meat model system.     

昆明市首起由疑似肉毒梭菌引起食物中毒的实验室快速检测

目的快速查明昆明市一起疑似由肉毒梭菌引起食物中毒事件的病原菌的具体类别。方法根据GB4789.12-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验》,样品在庖肉培养基中35℃厌氧增菌5 d后镜检,用2个不同生产厂家的肉毒梭菌实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测试剂进行检测并进行肉毒毒素分型。结果镜检符合典型的肉毒梭菌的特征,2个不同生产厂家的肉毒梭菌Real-time PCR检测结果均为阳性,且均检测出E型肉毒毒素。Real-time PCR检测只需在增菌后4～6 h的检测时间,即可得到结果,且无需进行菌体的纯化培养,鉴定时间节约至少96 h。结论此次事件为食用被E型肉毒梭菌及其毒素污染食品而引起的细菌性食物中毒事件,用Real-time PCR检测方法可对肉毒梭菌食物中毒事件作出快速判定。     

一起多型别副溶血性弧菌引起农村喜宴食物中毒的溯源分析

目的通过对腹泻患者肛拭子标本和外环境样品的病原菌检测,利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型技术对一起多型别副溶血性弧菌引起农村喜宴食物中毒原因开展溯源分析。方法对采集的共20份肛拭子标本和外环境样品进行病原学检测,并对检出的副溶血性弧菌进行血清分型、PFGE分型及tdh、trh、tlh、toxR基因检测。结果 20份样品/标本中15份检出副溶血性弧菌,11株为tdh+trh-tlh+toxR+基因型,4株为tdh-trh-tlh+toxR+基因型。其中12份患者肛拭子标本中有9份检出副溶血性弧菌,7份为O3∶K6血清型,2份为O2群;3份墩板涂抹样品中有2份检出O3∶K6血清型,1份为O1群;3份剩余食物样品中有2份检出副溶血性弧菌,分别为O1群和O10群;厨师肛拭子标本检出O11群副溶血性弧菌;PFGE聚类分析显示7份患者肛拭子标本和2份墩板涂抹样品中的O3∶K6型副溶血性弧菌带型高度同源,剩余食物来源的副溶血性弧菌核酸降解未能显示PFGE条带。结论本次事件是可疑食物交叉污染切菜墩板引起的以O3∶K6血清型为主的多种血清型别副溶血性弧菌的食物中毒。     

苏州某市一起肠炎沙门氏菌食物中毒事件调查分析

目的用现场流行病学方法,分析本次食物中毒事件的原因和可疑危险因素,指导临床救治并提出预防措施。方法通过查阅医院就诊记录和医务室门诊记录、考勤记录、员工订餐记录等主动搜索病例,开展病例个案调查和现场卫生学调查,采集相关样品进行实验室检测等,判断引起本次食物中毒事件的可疑餐次和食物。结果通过访谈、个案调查、实验室检查等共搜索到可能病例67人(包括确诊病例27人),临床特征主要为腹泻(83.58%,56/67)、发热(79.10%,53/67)、腹痛(76.12%,51/67)等。可疑食品是3月3日晚餐的回锅肉,59份肛拭子分离到25份肠炎沙门氏菌,其中一株分离自厨师。经脉冲场电泳(pulsed-fieldgel electrophoresis, PFGE)分型, 25株肠炎沙门氏菌同源性为100%。经药敏分析显示, 25株肠炎沙门氏菌对头孢噻肟、头孢他啶具有较好的药物敏感性;对氨苄西林、氯霉素耐药性强。结论食用被肠炎沙门氏菌污染的回锅肉是导致本次事件的主要原因,建议监管部门加强对集体配餐单位的监督管理,提高从业人员食品安全意识,防范类似事件的发生。