可视化跨越式滚环等温扩增技术检测食品中沙门氏菌

建立一种新型的核酸体外等温扩增方法--可视化跨越式滚环等温扩增技术(SRCA)检测沙门氏菌。根据沙门氏菌stn基因序列设计引物,进行特异性验证。测定该技术的灵敏度以及人工污染鸡肉样品的检出限。通过检测多种实际食品样品,评价SRCA方法的敏感性、特异性和符合率。研究结果表明:所有沙门氏菌呈阳性结果,非沙门氏菌呈阴性结果,说明引物特异性良好。SRCA方法检测沙门氏菌DNA的灵敏度为5.6×10~0fg/μL,检出限为3.8×10~1CFU/mL;PCR方法的灵敏度为5.6×10~2fg/μL,检出限为3.8×10~3CFU/mL。该方法检测30个实际样品的检出率为13.33%,并与GB 4789.4-2016方法进行比较,其敏感性、特异性和符合率分别为100%,96.30%和96.67%。结论:可视化跨越式滚环等温扩增技术具有操作简便,特异性强,灵敏度高,检出限低,检测成本低,对试验设备要求低等优点,适用于基层单位对食品中沙门氏菌的快速检测。     

Taqman MGB PCR定量检测水产品中沙门氏菌的方法建立

建立采用Taqman MGB实时荧光PCR法快速定量检测水产品中沙门氏菌。根据沙门氏菌fimY基因保守序列,设计引物和Taqman MGB探针,建立Taqman MGB实时PCR定量检测体系。采用本方法对24株共14种血清型沙门氏菌和17株与沙门氏菌亲缘关系比较近,以及在样品中能同时存在的常见食源性致病菌菌株进行PCR扩增。结果显示：所有的沙门氏菌菌株结果均为阳性,而非沙门氏菌菌株检测结果均为阴性,反应特异性为100%。本方法的纯菌最低检测低限为13CFU/ml,样品江瑶贝和蚬子肉中添加肠炎沙门氏菌的最低检测低限为130CFU/ml;香螺肉中添加肠炎沙门氏菌的最低检测低限为1300CFU/ml。定量关系式为y=－3.381418lnx+45.115715,R2= 0.964878。整个实验2h即可完成,可应用于水产品中沙门氏菌污染状况调查及快速检测。     

3种沙门氏菌检测方法能力验证

目的比较国标法、VETIK和荧光定量PCR法3种沙门氏菌检测方法的检测效果。方法 10份盲样经GB4789.4-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》、实时荧光定量PCR方法和VIDAS仪器检测,生化部分用VITEK2 compact执行。结果国标法在10个盲样中检出3种血清型沙门氏菌,分别为5号样品检出阿贡纳沙门氏菌、7号样品检出蒙得维的亚沙门氏菌和肯塔基沙门氏菌。VETIK和荧光定量PCR法检出5号和7号呈沙门氏菌阳性,其他为阴性。结论 VIDAS和实时荧光PCR检测方法快速、可靠、灵敏度高,可作为传统检测方法有效补充。     

沙门氏菌快速测试片在食品检测中的初步应用研究

目的应用3M沙门氏菌SALX测试片法检测食品中的沙门氏菌。方法对67批自然样品,以及使用3个沙门氏菌标准菌株进行人工污染的20批样品,同时采用3M沙门氏菌SALX测试片法与国家标准方法GB 4789.4-2010进行检测并比较,评价3M SALX沙门氏菌测试片法检测沙门氏菌的检测性能。结果 3M沙门氏菌SALX测试片法与国标法符合率达95.5%,各有1例假阳性和假阴性。结论 3M沙门氏菌SALX测试片法操作相对简便,稳定性好,与国标法有较高的符合率,作为一种新的沙门氏菌检测方法,仍需进一步积累检测数据。     

磁分离结合qPCR快速检测酱卤肉中的沙门氏菌

验证噬菌体磁分离结合实时荧光定量聚合酶链式反应,快速检测方法对食品中沙门氏菌的检测效果。以一株鼠伤寒沙门氏菌的特异性噬菌体T102为分子识别元件,首先将其与羧基化磁珠偶联,制备获得噬菌体磁性颗粒（Phage T102 Magnetic Beads）复合物,利用噬菌体磁性颗粒复合物从食品中特异性分离富集沙门氏菌,然后利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测富集后的沙门氏菌。该沙门氏菌快检方法检出限为100 CFU/mL（0.1 CFU/PCR）,线性范围为1×102~1×109 CFU/mL,变异系数2.1%,特异性强,检测时间为6 h。实验选取300批食品安全抽检样品与GB 4789.4-2016标准《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》进行比对,均未检出阳性样品,结果一致。该方法可为噬菌体偶联纳米磁珠在食源性致病菌检测领域的应用提供参考依据。     

应用微滴数字PCR技术快速检测食用菌中沙门氏菌

定量风险评估是整个风险评估体系的发展趋势和终极体现形式,而快速、准确、简便的定量技术则是保障整个体系顺利、有效完成的核心支撑。作者根据沙门氏菌inv A毒力基因序列,在前人对引物研究结果基础上,合成特异性引物和探针。以沙门氏菌标准菌株为研究对象,建立沙门氏菌微滴数字PCR的快速定量检测方法,并对其特异性、灵敏度、样品实测等关键指标与传统培养法进行对照验证。结果表明,所建立的微滴数字PCR方法具有较好的特异性,检测灵敏度可达到10~2CFU/m L,样品实测与传统国标法对比,二者符合率100%。所建立的沙门氏菌微滴数字PCR定量检测方法,可以快速、准确、直接地分析沙门氏菌的含量,无需构建质粒和标准曲线,避免了因标准曲线量值偏差而影响样品定值的准确性,所建立的方法为食源性沙门氏菌污染的快速定量检测提供了技术支撑,为微生物风险评估体系的完善奠定了基础。     

跨越式滚环扩增(SRCA)结合金纳米粒子可视化检测食品中的沙门氏菌

沙门氏菌是引起全球人类腹泻病的主要病因,严重危害人畜健康。传统检测方法耗时长,步骤繁琐,因此开展快速简便灵敏的可视化检测方法,具有重要意义。本文设计能与靶序列结合的探针,将其与金纳米粒子(AuNPs)结合。经跨越式滚环等温扩增技术(SRCA)扩增的靶序列,高温变性后成为单链,其与金纳米粒子上的探针结合后,释放出金纳米粒子,在MgSO4的作用下,聚集呈现肉眼可见的蓝色,判定为阳性,阴性为紫色。依此,建立一种简便、快捷、灵敏的可视化检测方法。结果表明:该方法特异性良好,能够区分8株沙门氏菌阳性与8株非沙门氏菌阴性。可视化检测的灵敏度为5.5×100 CFU/mL。将牛奶样品人工污染沙门氏菌,检出限为3.7×100 CFU/mL。在50份实际样品检测中,与GB 4789.4-2016方法进行比较,该方法敏感性为100.00%,特异性为97.87%,符合率达到98.00%。本文建立的SRCA-AuNPs可视化检测方法,具有较高的应用价值,结果肉眼可见,适合于现场可视化检测和基层单位使用。     

预包装柳州螺蛳粉沙门氏菌实时荧光PCR快速检测

目的建立实时荧光PCR法快速检测预包装柳州螺蛳粉中沙门氏菌的分析方法。方法根据沙门氏菌invA基因设计引物和探针,优化反应体系中的探针浓度后对人工添加沙门氏菌和干扰菌模拟受污染的预包装柳州螺蛳粉样品进行检测。结果设计的引物和探针只对阳性菌株有荧光反应,具有良好的特异性,最佳反应探针终浓度为0.2μmol/L,检测灵敏度为100CFU/mL,扩增效率103.92%;对模拟污染的预包装柳州螺蛳粉经过一步增菌18 h后最低能检测出4 CFU/25 g沙门氏菌。结论实时荧光PCR检测灵敏度高、特异性强,可应用于预包装柳州螺蛳粉中沙门氏菌的快速高效检测。     

食品检测能力验证中沙门氏菌的分离鉴定

目的 参加编号为CFAPA-375的食品中沙门氏菌能力验证,提高检验技能,验证实验室沙门氏菌的检测能力。方法 采用国标法对沙门氏菌能力验证样品进行检测,同时采用实时荧光PCR法作为辅助方法。对分离出的可疑菌落,采用全自动微生物鉴定系统和实时荧光PCR法进行全面鉴定。结果 样品N1和N3中检出沙门氏菌,样品N2中未检出沙门氏菌,实时荧光PCR法与国标法检测结果一致。结论 本次实验室的能力验证结果为“满意”,验证了实验室沙门氏菌的检测能力。实时荧光PCR法快速、简便、特异性强,可与国标法配合使用,以确保实验结果的准确快速。     

食品中单增李斯特氏菌检测PCR-免疫胶体金试纸条方法的建立

目的建立食品中单核增生李斯特氏菌快速检测PCR-免疫胶体金试纸条法。方法通过设计特异性引物建立单增李斯特氏菌检测PCR方法并使用免疫胶体金技术建立PCR产物快速检测试纸条;用试验菌株检测PCR-免疫胶体金试纸条方法的检测特异度与敏感度。使用新建方法对市售肉制品和乳制品中单核增生李斯特氏菌进行检测,验证该方法在食品检测中的可行性。结果 PCR-免疫胶体金法具有良好的特异度,敏感度比标准琼脂糖凝胶电泳法高100倍。采集乳品样品131份,阳性样品1份,检出率1.53%;肉制品224份,阳性样品4份,检测率1.79%。结论建立的单增李斯特氏菌检测PCR-免疫胶体金试纸条法特异度好,敏感度高,适用于食品中单增李斯特氏菌的检测。     

环介导等温扩增法快速检测食源性致病菌

目的考察环介导等温扩增技术在食源性致病菌快速检测中的应用效果。方法待检样品按照GB4789系列标准进行前增菌后,提取核酸进行致病菌检测。结果食品中6种常见的致病菌:金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、单增李斯特菌、副溶血弧菌和大肠杆菌O157检测阳性符合率100%,阴性符合率100%,检出限介于3.0×10~3～1.1×10~4 CFU/25 g,前增菌时间最快5h,检测时间为2d。结论环介导等温扩增技术具有检出限低、特异性好、检测速度快等优点,能较好地满足进出口食品中致病菌快速检测的要求。     

3种快速检测柳州螺蛳粉中热损伤沙门氏菌方法的比较分析

目的 比较实时荧光PCR法、全自动免疫分析仪法(vitek immune diagnostic assay system,VIDAS)和环介导等温扩增法(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)检测柳州螺蛳粉中热损伤沙门氏菌.方法 以预包装柳州螺蛳粉为样品,利用3种热损伤沙门...     

食品中沙门氏菌FTA膜结合跨越式滚环等温扩增检测方法的建立

为实现食品中沙门氏菌的简便和快速现场检测,本研究采用FTA膜(Flinders technology associates,FTA)结合跨越式滚环等温扩增(Saltatory rolling circle amplification,SRCA)方法(FTA-SRCA)建立一种新型的沙门氏菌检测方法.利用FTA膜快速提取...     

检测霜霉威的两种方法的比较

目的比较胶体金法与液相色谱-质谱质谱联用法(LC-MS/MS)在霜霉威检测中的应用。证实胶体金试纸检测蔬菜中霜霉威残留的可靠性,并以此为基础建立一个新的检测手段。方法通过胶体金试纸条半定量方法检测的试样,再用液/质谱法联用定量检测试样中的霜霉威。结果胶体金试纸检测为阴性的100个试样,经液/质谱法联用检测结果为未检出,符合率为100%。添加霜霉威的胶体金试纸检测阳性的试样经液/质谱法联用检测,符合率为100%,添加的Cutoff值样品回收率达到93%。结论与液/质联用检测法相比较,胶体金法检测霜霉威具有操作简便、观察直观、快速、省时的特点,特异性强、敏感性较高,从而为检测霜霉威提供了一种快速的检测方法。     

3种致病菌多重real-time PCR检测方法的建立及其在散装即食肉制品中的应用

建立一种同时快速检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的三重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法.以沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌Sa442基因和蜡样芽孢杆菌Cereolysin AB基因为靶基因设计引物和TaqMan探针...     

实时荧光聚合酶链式反应技术与国标方法检测致病菌的应用与研究

目的比较实时荧光聚合酶链式反应技术(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)与国标方法在食品致病菌检测中的异同。方法应用RT-PCR法及国标GB 4789系列对采集的60件畜产品、禽产品、水产品和乳及乳制品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌以及副溶血性弧菌同时进行检测。结果除了金黄色葡萄球菌检测结果均为阴性外,其他3种致病菌2种方法都有检出,但RT-PCR方法的阳性率均高于国标方法。对于沙门氏菌,国标方法阳性率为1.67%,RT-PCR方法阳性率3.33%;单核细胞增生李斯特氏菌国标方法阳性率为7.50%,RT-PCR方法阳性率为15.00%;副溶血性弧菌国标方法阳性率为8.33%,RT-PCR方法阳性率为11.67%。结论在本实验条件下,RT-PCR技术的阳性检测结果多于国标GB4789系列,并且结果可完全覆盖国标GB4789。各企业实验室甚至政府主导的食品风险监测项目可根据产品特点,合理应用RT-PCR技术以减少人员工作量,方便产品放行并提高工作效率。     

应用SE-μPADs法检测库尔勒市动物源食品中沙门菌的效果评价

目的:为了快速检测动物性食品中沙门菌的污染。方法:应用国家标准方法和SE-μPADs快速检测方法,对库尔勒市场及屠宰场中的380份样品进行沙门菌检测的评价。结果:国家标准方法中选择性培养基的初筛率为20.00%(76/380),从初筛菌株中分离鉴定出6株沙门菌;SE-μPADs快速检测方法的初筛率为6.58%(25/380),最终分离鉴定出10株沙门菌。SE-μPADs快速检测方法与国家标准方法阳性符合率为100%。库尔勒市场及屠宰场中共检测出10株沙门菌,总检出率为2.63%,而肉样污染率最高,胴体拭子次之,污染率分别达3.66%、3.31%。结论:SE-μPADs快速检测方法的初步应用效果较好,适合推广应用,且库尔勒市应加强对屠宰场及市场上肉品中沙门菌的污染监测。     

IQ-Check Salmonella II Kit方法对食品中沙门氏菌检测的评价

通过对标准菌株和人工污染沙门氏菌的食品样品进行检测,评价IQ-Check Salmonella Ⅱ试剂盒方法。该研究采用试剂盒方法对50株不同血清型的沙门氏菌和50株非沙门氏菌进行检测,分析该方法的灵敏性和特异性;通过对人工污染沙门氏菌食品样品(包括液体奶、婴幼儿配方乳粉、肉及肉类制品)的检测,评价试剂盒方法与GB 4789.4-2016方法的一致性。实验结果表明:当菌浓度在10³ CFU/mL及以上,试剂盒方法对50株沙门氏菌实现全部检出,其对不同血清型沙门氏菌检出限的平均值为6.98×10² CFU/mL。试剂盒方法对50株非沙门检测结果均为阴性,说明试剂盒特异性较好。试剂盒方法与GB方法对人工污染沙门氏菌的食品样品阳性检出率分别为98.77%(161/163)和96.32%(157/163);相对准确度为:96%、99%、97%,总体准确度为97.33%;相对灵敏度为:96.22%、100%、100%,总体灵敏度为98.73%;相对特异性为:95.74%、98.15%、92.86%,总体特异性为95.80%。参照ISO 16140进行方法一致性分析,结果表明两方法在统计学上无显著性差异。该研究表明该试剂盒方法具有高灵敏性和特异性强的特点,在人工染菌食品样品检测中与GB方法呈高度一致性,值得在食品沙门氏菌快速检测中推广应用。     

胶体金试纸与气相色谱法检测毒死蜱结果相符率比较

目的通过研究胶体金法与气相色谱法在检测毒死蜱中的应用,证实胶体金试纸条在检测蔬菜中毒死蜱残留的可靠性。方法对比胶体金试纸半定量法和气相色谱定量法检测毒死蜱的结果。结果胶体金试纸条检测阴性样品得出的结果与气相色谱的结果符合率为100%,添加的阳性样品符合率也达到100%。添加的界限值样品的回收率达到96%。结论与气相色谱法相比较,胶体金试纸检测毒死蜱操作简便、观察直观、快速、省时,其特异性、敏感性较高,可作为蔬菜采摘前毒死蜱农药残留自我检测的手段。并可以此为基础建立一个不同于以前的毒死蜱监管模式。