冻藏对原料肉加工前后羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸含量的影响

目的探究冻藏对原料肉加工前后羧甲基赖氨酸(N~ε-carboxymethyl-lysine,CML)和羧乙基赖氨酸(N~ε-carboxyethyllysine,CEL)含量的影响。方法以鸡胸肉为研究对象,使用反复冻融的方式模拟原料肉的冻藏过程,通过TBARs值与脂肪酸含量的变化评价原料肉脂肪氧化程度,同时考察原料肉与烤制后其中CML和CEL的含量。结果反复冻融会造成原料肉的汁液损失,游离氨基酸含量增加。在冻融前期(0～2 cycles)脂肪氧化程度较低, TBARs值为0.25 mg/kg,后期(4～6 cycles)程度加大,TBARs值为0.53 mg/kg。未冻融的新鲜原料肉中的CML及CEL含量均为最低,经1次冻融后CEL含量增加一倍达到(165.01±2.33)(μg/g干基),CML含量增加不显著(P0.05)。热加工后肉饼中CEL含量随原料肉冻融次数逐渐升高,于第6次冻融后达到最高值133.26±7.16(μg/g肉饼),与鲜肉对比含量增加15%,同时CML的含量增加44%。结论冻藏过程中,原料肉的反复冻融会导致脂肪氧化, CML和CEL的累积,同时会影响热加工后肉制品的品质。     

实时直接质谱对辣椒及其制品中辣度的快速评价

辣椒是常见的调味品,对辣椒及其制品的辣度进行快速监控非常必要。该文首先对辣椒素和二氢辣椒素在实时直接质谱(direct analysis in real time mass spectrometry,DART-MS)的裂解机制进行了系统研究,进一步对DART离子源的气体解吸温度、栅网电极电压等试验条件进行了优化。结果表明,辣椒素和二氢辣椒素质量浓度在0. 50～50. 0μg/mL范围内与峰面积呈现良好线性关系。辣椒素和二氢辣椒素的检测限均为0. 1μg/g,定量限均为0. 5μg/g,回收率范围分别为79. 74%～97. 74%,85. 60%～98. 71%,精密度分别为0. 80%～8. 89%,2. 69%～9. 54%。该方法可用于辣椒及其制品中辣度的快速评价。     

利用竹叶抗氧化物和茶多酚制作低羧乙基赖氨酸含量曲奇的研究

羧乙基赖氨酸(CEL)是通过美拉德反应形成的一种晚期糖基化终末产物(AGEs)。本文研究了四种天然来源的食品抗氧化剂:水溶性竹叶抗氧化物(AOB-w)、水溶性茶多酚(TP-w)、油溶性竹叶抗氧化物(AOB-o)和油溶性茶多酚(TP-o)对曲奇中CEL形成的抑制作用,确定了抑制曲奇中CEL的合适抗氧化剂及其添加剂量。空白对照组和试验组曲奇均在205℃、11 min焙烤条件下制得,CEL含量采用UPLC-MS/MS法准确测量。通过DPPH和ABTS抗氧化体系评价、感官评定和曲奇其他品质参数的测定,来评价试验组和空白对照组的差异。研究表明四种抗氧化剂对CEL的形成有显著的抑制作用,当添加剂量为0.01~0.05%(m/m)时,抑制率变化范围为7.29~67.25%;尤其当AOB-o的添加剂量为0.03%(m/m)时,曲奇中CEL的含量达到最低值(3.71±0.01 mg/kg),同时,产品的抗氧化活性得到显著提高,原有的品质属性和感官特性也未受到任何不良影响。     

食品中羧甲基赖氨酸的检测方法

综述了羧甲基赖氨酸(CML)的检测方法,为食品中CML含量检测方法的选择提供依据。     

HPLC-MS/MS快速测定常见食品中羧甲基赖氨酸含量

采用高效液相色谱串联质谱联用技术(HPLC-MS/MS)测定了几种高蛋白食品中羧甲基赖氨酸(CML)的含量,包括:液态牛奶,奶粉,饼干,面包和蛋白类发酵食品——酱油。对样品进行还原、沉淀、水解以及除杂后上样检测,对固相萃取柱及洗脱液进行了优化,采用外标法定量,HPLC-MS/MS的分析时间为25 min。其中酱油和饼干中CML的含量最高达到(385.59±7.73)mg/kg蛋白和(491.75±3.13)mg/kg蛋白,奶粉中CML的含量是最低的(45.66±2.89)mg/kg蛋白。     

UPLC-MS/MS分析食物煎炸过程中2种晚期糖基化终末产物的研究

建立了一种分析食用油煎炸食物中羧甲基赖氨酸(CML)和羧乙基赖氨酸(CEL)含量的超高效液相色谱-串联质谱法检测方法,并研究了煎炸温度、时间以及不同食用油对CML和CEL含量的影响。样品经硼氢化钠还原4 h后,采用HLB固相萃取小柱进行净化和富集,加标回收率达到86.0%～92.9%。CML和CEL在0.01～1.00μg/mL浓度范围内线性良好,相关系数R~2为0.999 4～0.999 5,检出限均为15.0μg/kg,定量限均为45.0μg/kg。在煎炸温度100～200℃,两者生成量随温度的升高而增加;在煎炸时间10～60 min,两者生成量随煎炸时间的延长呈现先增加后不变的趋势,在40 min时达到最大值;在比较不同食用油煎炸食物中发现,橄榄油煎炸的食物中CML和CEL含量最低。     

原位电离质谱快速筛查猪肉中10 种磺胺

该研究建立原位电离质谱实时快速直接分析猪肉中10 种磺胺的方法,并通过基质效应、检出限和标准曲线线性相关性进行方法学评价。猪肉经粉碎后,乙腈提取并净化,采用原位电离源离子化,三重四极杆质谱直接分析,多反应监测模式检测,外标法定量。结果表明,猪肉经提取后不净化、分散固相萃取净化、固相萃取柱净化后目标化合物离子化效率分别为纯溶剂体系的0.74%、10.97%和15.58%;净化效果为固相萃取柱＞净化包＞不净化基质提取液;3 种净化方法磺胺检出限均可达到10 μg/kg;10 种磺胺在10～100 μg/L 范围内,线性相关系数R2 平均值分别为0.642、0.782 和0.962。该方法具有较好的灵敏度和准确性,可广泛应用于猪肉样品中磺胺类药物的快速筛查和准确检测。     

基于蛋白沉淀法超高效液相色谱-串联质谱法检测面包中两种蛋白结合型晚期糖基化终末产物

目的 建立面包中两种典型晚期糖基化终末产物（AGEs）的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。方法以结合型羧甲基赖氨酸（CML）和羧乙基赖氨酸（CEL）为检测对象,面包样品经还原孵育、蛋白沉淀、加同位素内标、酸水解、氮吹、九氟戊酸水溶液复溶后,多反应监测定性及定量分析。结果 方法的检出限CML为4.5 ng/g,CEL为0.5 ng/g;定量限CML为20 ng/g,CEL为2 ng/g;CML加标回收率为89.62%～95.65%,CEL的加标回收率为86.38%～97.17%;标准曲线线性范围为CML2.5～800 ng/mL和CEL0.25～80 ng/mL,决定系数均大于0.999。结论 该方法准确且灵敏,能够满足面包中AGEs的检测需求。     

食品中羧甲基赖氨酸的形成机理和抑制途径研究进展

本文研究建立一种检测新型瘦肉精多残留胶体金检测卡的方法,能对大量样品进行定量检测。应用胶体金免疫层析技术,采用柠檬酸钠还原法,标记新型瘦肉精多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,新型瘦肉精偶联OVA抗原和羊抗鼠Ig G分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装切割成新型瘦肉精多残留胶体金检测卡。通过灵敏度、假阳性、假阴性试验测试,梯度浓度显色结果表明,该检测卡的灵敏度分别为克伦特罗3 ng/m L、莱克多巴胺5 ng/m L、沙丁胺醇3 ng/m L、西马特罗5 ng/m L、班布特罗5 ng/m L、妥布特罗5 ng/m L、特布他林8 ng/m L、氯丙那林5 ng/m L、马布特罗5 ng/m L、溴布特罗8 ng/m L,检测时间为3 min,检测滴加的最优尿液量为70~90μL,批内和批间重复性为100,假阳性率和假阴性率均为0。联检技术能实现现场快速检测,提高检测速度和准确性、降低检测成本,可作为生产过程监管和大批量样本的筛选。     

糖醋排骨中羧甲基赖氨酸分析方法的建立及其烹饪过程中动态变化

采用高效液相色谱-三重四极杆质谱联用技术建立了一种操作简单、稳定性好的检测中式菜肴糖醋排骨中羧甲基赖氨酸（Nε-(carboxymethyl)lysine,CML）的方法。样品用正己烷去脂肪,硼氢化钠还原,盐酸水解蛋白,Oasis MCX固相萃取小柱净化。以5 mmol/L的乙酸铵溶液和甲醇-水（80∶20,V/V）溶液作为流动相,采用Phenomenex Synergi 4 μ Hydro-RP 80A色谱柱,在正离子模式下采用多重反应监测分析,同位素内标法定量。该方法检出限为1.40 μg/g,加标回收率为90.94%～105.26%,相对标准偏差为5.80%～15.46%。采用该分析方法对中式菜肴糖醋排骨加工过程中CML的含量变化进行分析,结果表明,加工温度和加热时间以及糖和油脂的添加均可以显著影响糖醋排骨中CML的含量。     

山奈、白芷和香叶对猪肉加热过程中晚期糖化终末产物含量的影响

采用超高效液相色谱—串联质谱联用仪结合羧甲基赖氨酸(Nε-carboxymethyllysine,CML)和羧乙基赖氨酸(Nε-carboxyethyllysine,CEL)的同位素内标物作为AGEs的分析方法,研究了山奈、白芷和香叶3种食用香料的添加以及加热(100℃,5～120 min)对猪肉中结合态CML和CEL含量的影响。研究表明:加热对猪肉中AGEs的产生有促进作用,且AGEs的含量随着加热时间的延长而增加,经120min加热后的猪肉中CML和CEL的含量约为生肉的5～8倍,分别达到(35.60±2.20)～(40.68±5.66)mg/kg(CML)和(13.32±1.49)～(16.85±2.44)mg/kg(CEL)。在0～40min的加热时间过程中,加入或未加入香料的猪肉中CML[R~2=0.971～0.996;k=0.355～0.590mg/(kg·min)]和CEL[R~2=0.942～0.997;k=0.150～0.368mg/(kg·min)]的形成均符合零级反应动力学方程。香料的添加对于猪肉在加热过程中AGEs形成的影响因香料的种类、加热时间、肉的批次的不同而不同,总体来说,香料对猪肉加热过程中CML的形成影响较小,但是对CEL的形成有一定的促进作用,尤其是加热5 min处理的肉样,其CEL含量增加13%～61%。     

敞开式离子化质谱在食品安全快速筛查中的应用

敞开式离子化质谱(ambient mass spectrometry,AMS)是一种能在大气压环境中对样品进行解吸并离子化,从而获得样品表面信息的新型质谱技术。由于其具有快速、原位、实时分析等优势,近年来被广泛应用于食品安全快速筛查领域。本文从霉菌毒素类物质的检测,食品中非法添加物的快速筛查,食品本身有毒有害物质的鉴定,食品质量监控,食品组成成分分析和监测食品中的化学反应六个方面,综述了以实时直接分析(direct analysis in real time,DART)离子化技术为主的AMS技术在食品安全分析领域的应用。     

基于UPLC-QqQ-MS/MS同步检测热加工食品中典型晚期糖基化终末产物

建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法测定热加工食品中羧甲基赖氨酸（Nε-carboxymethyllysine,CML）和羧乙基赖氨酸（Nε-carboxyethyllysine,CEL）含量的同步检测方法。首先脱脂样品经硼氢化钠还原8 h,沉淀蛋白,酸水解后,经Oasis MCX固相萃取小柱净化和富集,以乙腈和含0.1%甲酸的1 mmol/L乙酸铵溶液为流动相梯度洗脱,采用ACQUITY UPLC HSS T3-C18色谱柱分离,多反应监测模式进行定性定量分析。CML和CEL在0.25～500 ng/mL范围内线性良好,相关系数高于0.999,方法检出限分别为8 ng/g和10 ng/g,定量限分别为36 ng/g和40 ng/g。平均回收率分别为96%～103%和94%～107%,相对标准偏差分别为1.48%～2.43%和1.23%～1.84%。利用该方法检测13 种市售热加工食品发现,婴儿肉松和婴儿饼干中CML和CEL含量显著高于烘焙食品和油炸食品（P＜0.05）。结果表明该方法快速、准确、高效,适用于热加工食品中CML和CEL的同步快速检测。     

食品中羧甲基赖氨酸的危害和检测方法的研究进展

食品中的N~ε-(1-羧甲基)-L-赖氨酸(N~ε-(1-Carboxymethyl)-L-lysine,简称羧甲基赖氨酸或CML)是还原糖的羰基与蛋白质、氨基酸的氨基等通过美拉德反应产生的晚期糖基化终末产物中的一种主要成分。CML具有较高的酸稳定性,可以作为评价食品体系美拉德反应中蛋白质化学修饰、羰基应激和脂质氧化的一个重要指标。CML通过食品介质进入人体后,可积聚于多个不同的组织器官中。达到一定数量后,会直接影响组织器官的功能,导致机体的病理变化。CML与人体许多疾病的发生密切相关,能促进糖尿病、肾病、动脉粥样硬化等疾病的发展和人体器官的快速衰老。CML的定量检测对指导人们减少CML的摄入,进而降低相关疾病的患病风险有重要的意义。本文就CML的危害和检测方法进行综述,以期为寻找具有高灵敏度、高选择性和快速高效的CML含量的检测方法提供依据。     

实时直接分析质谱法快速筛查南美白对虾中磺胺类药物

目的 建立了一种实时直接分析离子源(direct analysis in real time, DART)结合四极杆/静电轨道离子阱高分辨质谱法(Q-Exactive Orbitrap)快速筛查南美白对虾中磺胺类药物的方法。方法 样品经过提取净化后, 在离子化温度450 ℃, 栅极电压350 V, 样品传输速度0.2 mm/s的DART离子源正离子模式条件下进样, Orbitrap高分辨质谱在-全扫描/数据依赖二级扫描模式下进行定性检测。结果 该方法检出限为0.5~ 2.7 μg/kg, 满足筛查要求。结论 该方法分析速度快, 定性准确, 无需色谱分离过程, 环境友好。     

羧甲基赖氨酸在方便面中含量及其对雄性生殖和胚胎发育毒性的研究

采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对市售20个品牌方便面中游离态和结合态羧甲基赖氨酸(CML)含量进行了定量分析,并以体外细胞培养评价了CML的雄性生殖毒性和胚胎发育毒性。市售方便面中,游离态CML质量分数为0.39~0.80 mg/kg,结合态CML质量分数为19.42~34.99 mg/kg。CML作用于睾丸间质细胞R2C细胞24 h,浓度在1 mmol/L以下对细胞存活率没有显著抑制作用,浓度在2 mmol/L以下对孕酮分泌量没有显著的抑制作用;CML作用于胚胎干(ES)细胞D3和成纤维细胞3T3 10 d,浓度在4 mmol/L以下对3T3细胞存活率没有显著影响,浓度在0.5 mmol/L以下对D3细胞存活率没有显著影响。根据市售方便面中的CML浓度评估CML的摄入量,常规食用方便面摄入的CML不会对这几种细胞的存活率和R2C细胞的孕酮分泌量产生显著抑制作用,可认为不会产生雄性生殖和胚胎发育毒性。     

基于高光谱图像技术的油炸薯片中羧甲基赖氨酸含量检测

为探究羧甲基赖氨酸[N^ε-(1-carboxymethyl)-L-lysine,CML]含量的快速无损检测方法,该文采用高光谱图像技术对8种自制油炸薯片进行检测研究,提取每个高光谱图像的平均光谱值作为特征参量,同时结合液相色谱-质谱法测定CML含量,探寻预测其含量最适宜的光谱预处理和建模方法。首先将高光谱图像进行黑白校正,再选用标准正态变量变换光谱预处理方法,以消除固体颗粒、散射以及光程变化对光谱的影响。然后筛选出第200个到1 000个波段图像的平均光谱反射值,建立主成分回归、偏最小二乘回归和BP神经网络3种预测模型。对比结果表明：BP神经网络可以预测油炸薯片中CML含量,预测正确率为99.67%,决定系数为0.99,均方根误差为0.22。同时,为验证模型的稳健性,随机选取5组训练集和预测集代入相同参数的模型进行预测。结果显示：预测正确率平均值为96.23%,决定系数平均值为0.99,均方根误差平均值为0.22。这说明高光谱图像技术结合BP神经网络快速预测油炸薯片中CML含量具有可行性。     

实时直接分析质谱法对碧螺春红茶香气物质的快速鉴别

采用实时直接分析质谱法(direct analysis in real time combined with mass spectrometry,DART-MS)快速检测不同产区和不同级别碧螺春红茶的香气物质,结果表明碧螺春红茶的主要特征香气成分主要有酯类、酮类、醛类、酚类等,所体现的花香、果香是碧螺春红茶的香气特征。其中茉莉内酯、百里香酚、柠檬烯、橙花醛、紫罗兰酮等是特征香气成分。东山和西山产区以茉莉内酯、橙花醛、4-乙基愈创木酚、百里香酚、柠檬烯、茶螺烷等为主要的特性香气成分,而无锡和旺山离子种类较少,且离子相对丰度较低;级别较高的碧螺春红茶,离子种类较丰富,离子相对丰度较高,其中烃类物质和酚类物质种类较多,证明级别越高的碧螺春红茶,香气越浓郁。本研究使用一种快速、便捷且不需要样品前处理的方法 DART-MS初步对不同产区和不同级别进行了快速鉴别,为碧螺春红茶品质的提升和指导实际生产提供了参考依据。     

实时直接分析-高分辨质谱法快速筛查凉茶中非法添加的21种解热镇痛类药物

目的 建立一种实时直接分析离子源（direct analysis in real time, DART）结合四极杆/静电轨道离子阱高分辨质谱法（Q-Exactive Orbitrap）快速筛查凉茶中非法添加的21种解热镇痛类化学药物。方法 样品经50%甲醇水超声提取,过0.22μm微孔滤膜后,用DART-MS/MS测定。DART离子源的样品传输速度为0.2 mm/s,离子化温度为400 ℃,栅极电压为300 V,扫描模式为正模式。结果 在全扫描模式下测定目标化合物的一级精密质量数,与理论精密质量数相比,相对质量偏差小于1.65 ppm,可实现精准定性;同时建立了21种解热镇痛类药物的二级质谱信息库,进一步提高定性准确性。该方法筛查限范围为1.00~200 μg/kg,满足筛查要求。结论 该方法具有分析速度快,精准定性,无需冗长色谱分离过程,环境友好等优势,可作为凉茶中21种解热镇痛类非法添加化学药物的高通量筛查和精准定性检测方法。     

恒温实时荧光法快速检测婴幼儿辅助食品中胡萝卜成分的研究

为建立婴幼儿辅助食品中胡萝卜成分的恒温实时荧光快速检测方法,根据胡萝卜ITS1-5.8SRNA-ITS2基因序列设计合成恒温实时荧光法（LAMP）的特异性引物,以常见农产品及不同胡萝卜质量分数的白萝卜DNA分别验证方法的特异性和灵敏度,选取不同品系胡萝卜种子验证方法的适用范围,并通过预包装食品检测其实用性。结果表明：所建方法与其他物种无交叉反应,特异性强,能在1 h内检测低至质量分数为0.01%的胡萝卜成分,灵敏度高,适用于不同品系胡萝卜的检测。适用范围广,通过实际样本的检测验证,结果快速、准确。该方法操作简单、成本较低、数据智能判读实时同步、结果准确快速,可用于婴幼儿辅助食品中胡萝卜成分的快速检测,为婴幼儿食品标签管理及食品安全监管提供技术依据。