复方精油对小鼠B16细胞内黑色素生成影响

为探讨一款复方精油抑制酪氨酸酶活性和黑色素含量的效果,采用气相色谱与质谱联用技术(GC-MS)对一款复方精油进行成分分析;以促黑素细胞激素(α-MSH)诱导黑色素高表达的小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)为模型,利用台盼蓝染色记数细胞、CKK8法测定复方精油对黑色素细胞活力的影响;分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和多巴...     

两个产地的苦水玫瑰精油理化指标和香气成分分析

首次比较分析了甘肃苦水镇、西藏达孜县两个产地的苦水玫瑰精油理化指标和香气成分,结果表明:两种精油均为浅黄色液体,具有浓郁的玫瑰花香,其理化指标符合标准要求.从甘肃苦水玫瑰精油和西藏苦水玫瑰精油中分别鉴定出74种和68种成分.两种苦水玫瑰精油的香气成分在种类和含量上均存在差异,甘肃苦水玫瑰精油特有成分有乙二醇甲醚乙酸酯、...     

三肽D-Trp-Arg-Leu-NH2抑制B16黑色素瘤细胞黑色素合成的机制

为了研究三肽D-Trp-Arg-Leu-NH₂(dWRL)对小鼠B16细胞的酪氨酸酶(TYR)活性、黑色素合成及相关基因和蛋白表达的影响,探讨dWRL抑制黑色素生成的可能机制,我们体外培养小鼠B16细胞,采用MTT法测定细胞增殖情况、L-多巴氧化法测定TYR活性、氢氧化钠裂解法测定细胞黑色素含量、qRT-PCR和Western Blot法分别检测药物作用后B16细胞中小眼畸形相关转录因子(MITF)、TYR的mRNA和蛋白表达水平。结果显示三肽dWRL在试验浓度范围内可明显抑制α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)诱导的B16细胞内TYR活性、黑色素合成量及MITF、TYR基因及蛋白的表达量,且呈浓度依赖性。所以三肽dWRL在体外能抑制B16细胞黑色素的合成,上述变化可能是通过下调MITF和TYR的基因转录和蛋白表达作用来完成。     

玫瑰精油的提取及研究

采用分子蒸馏技术及化学方式研究兰州苦水玫瑰的出油率,避免了溶剂对精油品质的破坏,采用多种分析方法分析出油率及玫瑰精油品质,得到高产率、品质优良而且色泽鲜艳的精油。     

葡萄籽提取物对B16细胞内黑色素合成的抑制作用

为探讨葡萄籽提取物(GSE)对细胞内黑色素合成的抑制作用以及可能的作用机制,为GSE作为美白化妆品的天然添加剂提供实验依据,采用高表达黑色素的小鼠黑素瘤细胞(B16)为细胞模型,观察在细胞培养液中添加不同质量浓度的GSE后,黑色素生成量的变化,黑色素生成的关键酶——酪氨酸酶的表达量及活性的变化以及对B16细胞增殖的影响。结果表明,GSE在质量浓度为100 mg·L-1时,对B16细胞内黑色素合成的抑制率为(50.05±0.21)%,对细胞内酪氨酸酶活性的抑制率为(34.89±0.17)%,细胞内酪氨酸酶表达量受到抑制,且均呈质量浓度依赖性抑制作用;在培养过程中,B16细胞的增殖没有受到影响。说明GSE对B16细胞内黑色素的合成具有显著的抑制作用,其抑制机制可能是GSE抑制了酪氨酸酶蛋白的表达以及降低该酶的活性。GSE是一种高效的黑色素合成抑制剂,可作为美白化妆品的天然添加剂。     

氨氯地平对小鼠黑色素细胞瘤B16细胞自发性肺转移的抑制作用及其机制

目的 研究氨氯地平对小鼠黑色素细胞瘤B16细胞自发性肺转移的抑制作用及其机制.方法 将小鼠黑色素细胞瘤B16细胞接种于C57BL/6J小鼠右腹股沟皮下,2×106个/只,次日将小鼠随机分为阴性对照组(给予生理盐水0.2 ml/只,每天灌胃1次,共21 d)、氨氯地平低、中、高剂量组(分别给予氨氯地平1、3和10 mg/...     

柯里拉京对B16细胞增殖及酪氨酸酶活性的抑制作用

采用体外培养B16细胞,在柯里拉京作用不同时间后,用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测柯里拉京对B16细胞生长的影响;用多巴氧化法检测柯里拉京对B16细胞中酪氨酸酶活性的抑制作用;用形态学和Hoechst33258染色法观察柯里拉京对B16细胞生长形态的影响。结果表明,柯里拉京对B16细胞增殖的抑制作用明显,其作用12,24和48 h的IC_(50)分别是35.63,25.78和20.94 mg/L;对作用于B16细胞中酪氨酸酶12,24和48 h时的IC_(50)分别是16.38,14.00和13.85 mg/L;形态学观察表明,当ρ(柯里拉京)16 mg/L作用24 h时,B16细胞损伤明显;Hoechst33258染色显示,当ρ(柯里拉京)≤16 mg/L作用24 h时,B16细胞呈现凋亡形态。     

圣草酚对角质形成细胞和黑色素瘤细胞共培养体系中黑色素合成的促进作用

为了研究圣草酚对角质形成细胞(HaCaT)与黑色素瘤细胞(B16)共培养体系中细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑色素含量以及酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸相关蛋白1(TRP-1)、酪氨酸相关蛋白2(TRP-2) mRNA表达的影响,建立了HaCaT细胞与B16细胞体外共培养体系模拟“表皮黑色素形成单位”,分别采用MTT法测定细胞增殖率、多巴氧化速率法测定细胞酪氨酸酶激活率、氢氧化钠裂解法测定细胞黑色素合成率、实时荧光定量PCR法测定TYR、TRP-1、TRP-2的基因相对表达量。结果表明,圣草酚在低浓度下对共培养体系中的细胞无毒性作用,而且有明显的促增殖作用;12.5～50μmol·L^-1圣草酚对共培养体系中细胞酪氨酸酶活性有激活作用(P<0.001),并呈剂量依赖性;12.5～50μmol·L^-1圣草酚能显著提高共培养体系中细胞黑色素合成率(P<0.01或P<0.0001);12.5～50μmol·L^-1圣草酚能显著提高共培养体系中TYR的基因相对表达量(P<0.01或P<0.001),25～50μm...     

穿心莲内酯对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中NF-κB信号通路的影响

目的探讨穿心莲内酯(Andrographolide,AP)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)中NF-κB信号通路的影响。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为3组:空白对照组、LPS组和AP+LPS组。AP+LPS组腹腔内注射10 mg/kg的AP,空白对照组腹腔内注射等体积的NS,2次/d,连续3 d,第3天注射后2 h,LPS组和AP+LPS组气管内雾化吸入LPS(1 mg/kg),空白对照组气管内雾化吸入等剂量的NS,12 h后处死小鼠,开胸取肺,10%甲醛溶液固定,随后进行石蜡切片及常规HE染色,光镜下观察各组小鼠肺组织的病理学变化;免疫组化法观察肺组织中血管细胞黏附分子-1(Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)蛋白的表达;Western blot法检测肺组织中磷酸化抑制蛋白IκB(Phospho-inhibitor ofκB,p-IκBα)和p-NF-κB(P65)蛋白的表达。结果 LPS组小鼠肺损伤明显,有明显的炎症反应;AP+LPS组小鼠肺损伤明显减轻,炎症细胞浸润明显减少。与LPS组相比,AP+LPS组小鼠肺组织中VCAM-1蛋白的表达明显抑制;p-IκBα和p-NF-κB(P65)蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论 AP可通过抑制磷酸化的IκBα的降解及P65单体的磷酸化来调节NF-κB通路,从而减轻小鼠肺损伤的炎症变化。     

熊果酸对血管内皮细胞增殖的影响及其机制

目的研究熊果酸(Ursolic acid,UA)对人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白表达的影响,探讨熊果酸抑制血管生长的机制。方法体外培养HU-VECs,用不同浓度熊果酸(31.5、62.5、125、250、500μg/ml)处理不同时间(12、24、48 h),MTT法检测细胞增殖抑制率。用125μg/ml熊果酸和100μmol/L PD98059(ERK抑制剂)处理HUVECs 48 h;不同浓度熊果酸处理24 h;125μg/ml熊果酸处理不同时间,RT-PCR和Western blot分别检测HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果不同浓度的熊果酸对HUVECs的增殖均有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;经熊果酸和PD98059处理的HUVECs中ERK1、c-Jun、c-Myc、Cyclin D1基因mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,且呈剂量和时间依赖性。结论熊果酸可通过抑制ERK信号转导通路而抑制血管内皮细胞增殖。     

循环应用低剂量环磷酰胺对黑色素瘤荷瘤小鼠调节性T细胞的影响及抗瘤作用

目的观察循环应用低剂量环磷酰胺(CTX)对黑色素瘤荷瘤小鼠调节性T细胞(Treg)的影响及抗瘤作用。方法通过皮下接种黑色素瘤细胞B16制备黑色素瘤荷瘤小鼠模型;对荷瘤小鼠分别经腹腔单次或循环注射CTX,每隔7d给药1次,共3次,应用流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg的含量;培养小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),将DC与脾T淋巴细胞混合培养,应用ELISA法检测脾T淋巴细胞干扰素γ(IFNγ)的分泌量;同时测量肿瘤的大小,绘制肿瘤生长曲线,并观察各组荷瘤小鼠自身免疫病的发生情况。结果CTX的最佳应用剂量为100mg/kg。随着荷瘤时间的延长,荷瘤小鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+/CD4+的比值呈逐渐升高趋势。单次应用CTX抑制Treg的时间较短,而循环应用CTX能够延长对Treg的抑制,使其维持在相对较低的水平;循环应用CTX显著提高了荷瘤小鼠脾T淋巴细胞IFNγ的分泌水平。单次和循环应用CTX均未能延缓肿瘤的生长,两组小鼠均未见免疫性白斑及明显的化疗毒副反应。结论循环应用CTX能更加有效地调控Treg,从而促进DC对T淋巴细胞的抗原特异性激活,这将会提高DC疫苗的抗瘤效果。     

Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及机制

目的探讨Axin2基因对肝癌细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关分子表达的调控及其机制。方法通过TOPflash试验检测Axin2基因对Wnt/β-catenin信号通路的影响;荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)法检测Axin2基因在正常肝细胞LO2及3种肝癌细胞HepG2、HHCC、HB611中的表达水平;对肝癌细胞HepG2中Axin2的表达进行干扰,并检测Wnt/β-catenin信号通路相关基因(β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3、EGFR、APC)mRNA转录水平及相关蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、APC)的表达量。结果 Axin2对Wnt/β-catenin信号通路有显著抑制作用,且呈剂量依赖性(P 0. 05);3种肝癌细胞Axin2的表达水平显著低于正常肝细胞LO2(P 0. 05);干扰HepG2细胞中Axin2基因表达后,Axin2基因m RNA转录及蛋白表达水平降低,Wnt信号通路下游基因β-catenin、Cyclin A、CDK2、Wnt5a、STAT3和EGFR基因mRNA转录水平及β-catenin、Cyclin A、CDK2蛋白表达量均上升,而APC基因mRNA转录水平及蛋白表达量降低。结论 Axin2基因通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达抑制肝癌细胞的生成,本研究为寻找新的肝癌治疗靶点及防治药物提供了实验依据。     

白藜芦醇基于PI3K/Akt通路对人结肠癌细胞HCT-116凋亡的影响

目的：探究白藜芦醇基于PI3K/Akt通路对人结肠癌细胞HCT-116凋亡的影响及其相关分子机制。方法：通过MTT实验检测白藜芦醇对HCT-116细胞的增殖抑制效应;流式细胞仪检测白藜芦醇对HCT-116的促凋亡效应;蛋白免疫印迹实验检测HCT-116细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax、PI3K、Akt表达情况的影响。结果：白藜芦醇对HCT-116有明显的抑制增殖作用,并有效促进了其凋亡,且引起Caspase-3与Bax表达上调,Bcl-2表达下调并抑制了PI3K和Akt的磷酸化。结论：白藜芦醇可诱导HCT-116细胞发生凋亡,且与抑制PI3K/Akt信号通路的激活相关。     

3种茶提取物对MCF-7细胞增殖、凋亡的影响及其与蛋白激酶B的相关性

目的 探讨红茶、绿茶及普洱茶提取物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响及其与蛋白激酶B(Protein ki-nase B,PKB)的相关性。方法用不同浓度的3种茶提取物处理MCF-7细胞不同时间,MTT法检测其对MCF-7细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响;实时定量PCR检测细胞PKB基因mRNA的转录水平。结果 3种茶提取物对MCF-7细胞的增殖均具有明显的抑制作用,且呈时间、剂量依赖性;3种茶提取物处理的细胞早期凋亡率均高于未处理细胞,PKB基因mRNA的表达量明显降低。结论 3种茶提取物均含有可以抑制PKB转录活性的天然成分,并可诱导MCF-7细胞凋亡;其中绿茶诱导MCF-7细胞凋亡效果最明显。     

1,25-二羟维生素D3对川崎病患儿T细胞Wnt信号通路的影响

目的 研究1,25-二羟维生素D3[1,25 (OH)2D3]对T细胞的增殖作用及其对Wnt信号通路的影响.方法 分离川崎病患儿外周血T细胞,用不同浓度(0、10-1、10-2、10-3、104和10-5 μmol/L)1,25(OH)2D3作用于T细胞,MTT法检测细胞增殖情况,确定对T细胞生长抑制的最佳浓度.用10...     

秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对伯基特淋巴瘤Raji细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

目的观察秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β对伯基特淋巴瘤细胞株Raji增殖及凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法体外培养Raji细胞,分别加入浓度为0.9、1.5、2.1、2.7 mg/mL的FA-2-b-β,对照组加入等量培养基。培养24、48、72 h后收集各组细胞,采用CCK-8法检测FA-2-b-β对Raji细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞β-catenin、c-myc、cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 FA-2-b-β能抑制Raji细胞增殖,且呈浓度-时间依赖性(P <0.01);给药48 h后,各浓度FA-2-b-β组细胞凋亡率较对照组均显著上升,且呈剂量依赖性(P <0.05);各浓度FA-2-b-β组细胞β-catenin、c-myc、cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著低于对照组,且呈剂量依赖性(P <0.05),Bax蛋白表达水平显著高于对照组,同样呈剂量依赖性(P <0.05),Bax/Bcl-2比值增加。结论 FA-2-b-β呈时间-剂量依...     

肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型VP1蛋白在人支气管上皮细胞中对天然免疫相关信号分子的表达及T细胞免疫反应的影响

目的探讨肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(coxsakievirus A 16,CA16)VP1蛋白在人支气管上皮细胞中对天然免疫相关信号分子的表达及T细胞免疫反应的影响。方法经RT-PCR法扩增EV71和CA16的VP1序列,插入至载体pcDNA3. 1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1。分别转染人支气管上皮细胞16HBE,于转染后24、48和72 h收集样本,进行细胞内天然免疫相关信号分子表达的检测和刺激T细胞增殖的检测。结果经双酶切及测序鉴定,重组真核表达质粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1构建正确。与阴性对照组比较,EV71-VP1组IFNγ、OX40L、RANKL、TNF-α和IL-2的水平上调,而CA16-VP1组的上调幅度较小。EV71-VP1及CA16-VP1组16HBE细胞的胞内外提取物均可明显刺激分泌IFNγ的T细胞增殖(P 0. 05)。结论 EV71和CA16 VP1蛋白在人上皮细胞16HBE中表达后,可差异性诱导细胞中天然免疫信号分子表达及相似的非特异性刺激T细胞增殖能力。