壳聚糖—戊二醛固定化木聚糖酶的技术研究

采用壳聚糖微球一戊二醛交联的方法固定木聚糖酶,探讨壳聚糖浓度、戊二醛体积分数和交联时间对固定化酶相对酶活力的影响.以正交试验确定木聚糖酶的最佳固定化条件,比较固定化酶与其游离酶的最适反应pH值、pH值稳定性、最适反应温度及热稳定性.结果表明,在壳聚糖质量浓度0.1g/mL、戊二醛添加量3％、给酶量2000U/g载体、交联时间2.5h时,固定化酶的回收率较高,可达到65.38％,同时固定化和游离酶的最适温度分别为60℃、55℃,最适pH值分别为4.5、5.0,热稳定性有不同程度的提高,pH稳定性两者变化不大.木聚糖酶的固定化能有效地提高其作用性能,从而为木聚糖酶的工业化应用提供了一定的理论依据.     

壳聚糖膜固定化β-D-半乳糖苷酶的研究

以壳聚糖膜为栽体，戊二醛为变联荆制备固定化乳糖酶，筛选酶固定化的最优条件。结果显示：戊二醛浓度为2.5％，pH值为6，5，乳糖酶浓度为0.4mg/mL，变联时间12h，固定化12h时，获得了最佳的固定化效果。     

壳聚糖小球共价固定化α-淀粉酶的研究

以壳聚糖小球为载体,采用戊二醛交联共价固定α-淀粉酶。试验结果表明,以1 g壳聚糖小球为载体,经5m L 2%戊二醛处理后,加入24 mgα-淀粉酶,30℃,在p H 6的磷酸缓冲液中固定化2 h,制备的固定化α-淀粉酶活力达1 407.6 U/g。固定化酶最适p H向酸性方向偏移,最适反应温度不变,固定化α-淀粉酶的酸碱稳定性和热稳定性均优于游离酶。     

多酚氧化酶的固定化及其酶学性质研究

游离多酚氧化酶在使用过程中容易流失,无法重复利用。文章主要研究了低成本、高效率的两种固定化方法:海藻酸钠包埋法和戊二醛交联法,确定了其最优固定化条件,分别为海藻酸钠包埋法:2.5%CaCl₂,2.5%海藻酸钠,固定化时间2h;戊二醛交联法:1.25%戊二醛,振荡固定pH 4.5,酶与载体质量比75(mg/g),固定化反应时间6.5h。同时对游离多酚氧化酶及固定化多酚氧化酶的酶学性质进行了研究。结果表明:游离酶、海藻酸钠包埋法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by sodium alginate,A-PPO)和戊二醛交联法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by glutaraldehyde crosslinking,C-PPO)的比活力分别为864,490,371U/mg,A-PPO和C-PPO的酶活回收率分别为18.6%和24.0%。同时,固定化酶在pH稳定性、热稳定性上优于游离酶,戊二醛交联法固定酶的效果优于海藻酸钠包埋法。     

交联壳聚糖固定化β-葡萄糖苷酶的稳定性研究

以戊二醛交联壳聚糖微球为载体通过共价连接反应固定化β-葡萄糖苷酶,研究固定化β-葡萄苷酶的稳定性。结果表明:固定化和游离β-葡萄糖苷酶的最适温度分别为706、5℃,最适pH分别为4.0、4.5。固定化β-葡萄苷酶贮存11周以后仍保持75.0%以上的相对活力,连续使用6批次后其相对活力仍保持在65.0%以上。固定化β-葡萄糖苷酶的高温、pH、贮存、操作稳定性明显高于游离酶。     

复合载体固定化酵母生物合成胞二磷酸胆碱

研究了复合载体固定酵母的条件 ,通过正交实验确定了K 卡拉胶 ,魔芋多糖和去离子水用量 .用扫描电子显微镜观察了固定化酵母冷冻前后的形态变化 ,固定化酵母多次使用后 ,其生物合成胞二磷酸胆碱 (CDPC)的活性仍较高     

磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶及其酶学性质的研究

本文利用化学共沉淀法制备Fe_3O_4磁性颗粒,并以此为磁核通过乳化交联法制备磁性壳聚糖微球,以环氧氯丙烷对微球表面进行活化,用于黄嘌呤氧化酶的固定化研究。以微球表面的环氧基密度为活化指标,确定了活化过程的最适工艺条件:环氧氯丙烷体积分数为40%,Na BH4浓度为0.60 g/L,NaOH浓度为1.20 mol/L。对微球进行结构表征,结果表明:壳聚糖成功包裹了Fe_3O_4磁性粒子,且已活化微球的表面具有环氧基活性基团;Fe_3O_4磁性粒子、未活化和已活化磁性壳聚糖微球的中径分别为2.16、20.30和24.69μm。活化结束后,将黄嘌呤氧化酶固定在磁性微球上。以酶活为指标,确定最适固定化工艺为:时间1 h,温度30℃,pH8.0。对固定化黄嘌呤氧化酶的酶学性质研究,结果表明:酶的最适作用温度为48℃,最适作用pH为8.5,酶具有良好的热稳定性、pH稳定性及操作稳定性。     

桑叶多酚氧化酶的固定化及酶学性质研究

研究了桑叶多酚氧化酶(PPO)的动力学特性,结果表明,其最适温度为40℃,最适pH为7.0,酶动力学参数Km=0.093mol/L。用浓度质量分数为4%海藻酸钠、体积分数为0.2%戊二醛、0.2mol/L的CaCl2固定多酚氧化酶,固定时间2h,交联时间4h,能使固定化多酚氧化酶的活力达到最大。固定化酶的最适pH为6.0,固定化酶的最佳反应温度为50℃,固定化酶对温度的敏感度降低,温度变化对固定化酶酶活力的影响不大。      

桑叶多酚氧化酶的固定化及酶学性质研究

研究了桑叶多酚氧化酶(PPO)的动力学特性,结果表明,其最适温度为40℃,最适pH为7.0,酶动力学参数Km=0.093mol/L。用浓度质量分数为4%海藻酸钠、体积分数为0.2%戊二醛、0.2mol/L的CaCl2固定多酚氧化酶,固定时间2h,交联时间4h,能使固定化多酚氧化酶的活力达到最大。固定化酶的最适pH为6.0,固定化酶的最佳反应温度为50℃,固定化酶对温度的敏感度降低,温度变化对固定化酶酶活力的影响不大。     

固定化环糊精葡萄糖基转移酶的催化转苷

本文以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂共价交联固定环糊精葡萄糖基转移酶。戊二醛的双功能团醛基能够分别与壳聚糖分子中的氨基和酶分子中的氨基发生亲和加成,使得共价交联法固定的环糊精葡萄糖基转移酶不易于脱落。单因素实验结果表明:25℃、0.02g/mL的壳聚糖乙酸溶液,4%(体积分数)的戊二醛,50μL环糊精葡萄糖基转移酶,交联1h,吸附15h,固定化酶的环化酶活回收率最高能达到94.5%,比活最高为39.7U/g。以玉米淀粉水解液为糖基供体,固定化环糊精葡萄糖转移酶催化甜菊糖的转葡萄糖基反应中,固定化酶的最适催化温度提高5℃,最适催化pH不变,在非最适pH时甜菊糖的转化率提高5%8%,5h时热稳定性增强10%。     

二氧化钛修饰葡萄糖氧化酶电极的初步研究

应用TiO2修饰铂电极,制备葡萄糖氧化酶电极,初步探讨其电化学响应特性和实用性。实验表明,该电极具有良好的重现性和选择性。     

壳聚糖凝胶固定葡萄糖氧化酶制备酶电极的工艺

以壳聚糖作为固定GOD载体 ,研究了壳聚糖溶液的粘度 ,交联剂戊二醛的浓度、用量以及铂丝在酶膜母液中浸涂时间等对葡萄糖传感性能的影响。在优化固定化条件的基础上 ,建立了通过调整固定化条件来适应载体溶液粘度变化的工艺 ,制备出性能基本一致的酶电极     

Sulfite determination using sulfite oxidase biosensor based glassy carbon electrode coated with thin mercury film

The preparation of sulfite biosensor by immobilization of sulfite oxidase on a glassy carbon electrode coated with mercury thin film is described. Dissolved oxygen can be readily reduced at the glassy carbon electrode coated with mercury thin film. The working principle of the biosensor was based on monitoring decrease in the peak current due to the depletion in dissolved oxygen concentration according to the reaction of sulfite oxidase.     

交联壳聚糖载体固定化柚苷酶工艺

以戊二醛为交联剂,壳聚糖为载体,采用交联-吸附偶联法固定柚苷酶,通过单因素和正交试验优化确定最佳固定化工艺。结果表明,柚苷酶的最佳固定化条件为：以质量浓度为3.5g/100mL的壳聚糖制备的凝胶微球为载体,凝结剂NaOH质量浓度1.0g/100mL、戊二醛体积分数7.0%、交联时间2.0h、pH 4.0、酶液质量浓度2.0mg/mL、25℃时吸附交联3.0h,得到固定化酶最高酶比活力为7.37U/g;与游离酶相比而言,固定化酶最适pH值与最适反应温度均无明显变化;固定化酶在不同温度(40、50、60℃)条件下重复使用7次,相对酶活力仍能保持在70%、60%和50%以上。     

壳聚糖微球固定化胰蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体,将胰蛋白酶固定化,通过优化其制备条件提高活力回收。首先利用反相悬浮交联法制得壳聚糖微球并用于胰蛋白酶的固定,后采用中心复合设计及响应面分析法优化固定化条件,结果表明,戊二醛体积分数为16.2%,分散时间为98 min,给酶量1 mg/g载体时,固定化胰蛋白酶的活力和活力回收率可达到42.02 u/g和73.32%。     

磁性壳聚糖固定化转谷氨酰胺酶的研究

本文研究了磁性壳聚糖固定化转谷氨酰胺酶的最佳条件及固定化酶的酶学性质.以Fe3O4为磁性内核,液体石蜡为分散介质,Span-80为乳化剂,采用反相悬浮包埋法制备了磁性壳聚糖微球,并对其形貌的进行观察,结果显示该载体呈规则的球状、表面平滑,平均粒径为5μm,利于磁性微球在反应体系中的分离和酶的固定.以此磁性壳聚糖微球为载...     

壳聚糖微球固定碱性蛋白酶的研究

利用乳化交联法制得壳聚糖微球并用于碱性蛋白酶的固定,借助正交试验设计优化酶固定化条件,结果表明：常温条件下,戊二醛浓度为1％,以给酶量240U／g载体加酶,在pH10缓冲液中,交联20h时,固定化碱性蛋白酶的活力和活力回收率可达到119U／g和49．6％;固定化碱性蛋白酶耐热性较游离碱性蛋白酶较强,4℃的半衰期可达14d。