富血红素多肽产物制备用酶的比较研究

为筛选适于生产富血红素多肽产物的蛋白酶,比较不同蛋白酶对猪血红蛋白的水解效果。在AS1398 中性蛋白酶、2709 碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的最适水解pH 值及温度下,以L16(45)正交试验研究酶种类、酶质量分数、底物质量分数和水解时间等因素对水解率、水解液中粗多肽含量和血红素含量等指标的影响。结果表明：酶种类和水解时间两因素对水解率指标的影响达到极显著水平(P ＜ 0.01);底物质量分数是影响粗多肽含量指标的最重要因素;酶种类对血红素含量指标的影响则达到显著性水平(P ＜ 0.05)。中性蛋白酶有利于提高水解率,木瓜蛋白酶有利于提高水解物的粗多肽含量,而碱性蛋白酶则有利于提高水解物的血红素含量。     

Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味酶酶解大豆分离蛋白及脱苦工艺优化

以大豆分离蛋白为原料,选用Alcalase 2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味蛋白酶对大豆分离蛋白进行酶法水解及脱苦工艺研究。以水解度和苦味分值为考察值,对酶解工艺进行优化,确定最佳条件。结果表明:Alcalase2.4L碱性内切酶最佳酶解条件为加酶量14 000 U/g、酶解温度60℃、酶解pH8.5、底物质量分数5%,酶解时间2h,最终水解度为45.34%,此时水解液苦味值为4。Flavourzyme风味蛋白酶对水解液进行二次水解的最优酶解条件为加酶量300 U/g、酶解温度55℃、酶解pH 7.0、酶解时间3 h,此条件下大豆分离蛋白水解液苦味值最低为1.2。Alcalase2.4L碱性内切酶和Flavourzyme风味蛋白酶水解大豆分离蛋白使水解度得到较大提高的同时也解决了水解液的苦味问题。     

双酶法制备马鹿茸降血糖肽工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶的抑制效果

为探索制备马鹿茸降血糖肽的最佳工艺条件,以α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,从碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选出两种酶,根据其体外降血糖效果确定酶的作用顺序,再以水解度、α-葡萄糖苷酶抑制率和蛋白质回收率为指标进行单因素试验和正交试验,优化降血糖肽制备工艺条件。结果表明:碱性蛋白酶和风味蛋白酶比中性蛋白酶和胰蛋白酶更适合用于制备马鹿茸降血糖肽。采用碱性蛋白酶-风味蛋白酶顺序对马鹿茸进行水解,所得酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率、蛋白质回收率和水解度较高,分别为21.11%、39.12%、19.88%。通过单因素试验和正交试验确定双酶酶解最佳工艺条件为先用碱性蛋白酶在p H 8.0、60℃、底物质量分数12%、加酶量5 000 U/g条件下酶解3 h,再用风味蛋白酶于p H 6.5、45℃、底物质量分数5%、加酶量6 000 U/g条件下酶解1 h。双酶分步水解终产物的α-葡萄糖苷酶抑制率受质量浓度的影响,当质量浓度为3 mg/m L时,α-葡萄糖苷酶抑制率可达94.09%,IC50值为1.82 mg/m L。碱性蛋白酶-风味蛋白酶双酶分步水解马鹿茸可获得高α-葡萄糖苷酶抑制率的降血糖肽。     

分步酶解制备鲢鱼抗氧化肽的工艺研究

用分步酶解法制备鲢鱼抗氧化肽,首先从碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶中筛选出碱性蛋白酶作为第一步酶解用酶,以水解度作评价指标,并得到酶解工艺条件:底物浓度15%,pH9.0,温度50℃,加酶量为24AU/kg。再从剩下的三种酶中筛选出胰蛋白酶与碱性蛋白酶复配,作为第二步酶解用酶,用响应面法进一步优化酶解工艺,考虑到成本和工艺的要求,最终确定的酶解工艺为:碱性蛋白酶水解时间为59.12min,胰蛋白酶水解时间为82.24min,两种酶的添加比例为1:1.48,即碱性蛋白酶添加量为24AU/kg,胰蛋白酶的添加量为35.5AU/kg。最终得到的鲢鱼抗氧化肽可溶性氮70.84%,多肽69.38%,水分4.21%,灰分25.67%;多肽浓度为2mg/mL时对DPPH自由基清除率为19.33%。     

鸡血血红蛋白酶法提取血红素工艺优化

为了实现禽血高值转化利用,以鸡血血红蛋白为底物,采用蛋白酶酶解技术提取血红素。比较酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶水解度确定合适的水解蛋白酶;研究并分析底物浓度、酶添加量、酶解时间对血红蛋白水解度、血红素得率、血红素纯度的影响;设计正交试验确定最优血红素提取工艺;采用最优酶解工艺参数酶解,经离心、冷冻干燥得到血红素产品,应用液相色谱-串联质谱（lipid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）鉴定产品中血红素含量。结果表明,采用中性蛋白酶酶解,底物浓度4.0 g/100 mL、酶添加量2.0 g/100 mL、酶解时间4 h时,血红素得率、血红素纯度分别为52.23%、49.26%。血红素产品与血红素标准品保留时间相一致,血红素产品中血红素含量为50.24%。     

鸡肉蛋白钙离子螯合肽酶解工艺的优化研究

本文研究了不同酶解工艺条件对鸡肉蛋白酶解产物钙螯合力的影响。研究了木瓜蛋白酶酶解时间对钙螯合力的影响,结果表明酶解时间在3 h时,酶解产物有最大钙螯合力。对比了木瓜蛋白酶单酶酶解,木瓜蛋白酶、风味蛋白酶双酶同步酶解,及双酶分步酶解三种酶解方式,发现风味蛋白酶的加入有助于提高产物钙螯合力,且分步酶解法的对产物螯合力提升效果优于同步酶解。针对双酶分步酶解法,研究了木瓜蛋白酶酶解时间、风味蛋白酶酶解时间、木瓜蛋白酶添加量、风味蛋白酶添加量四个因素对酶解产物钙螯合力的影响,并以木瓜蛋白酶酶解时间、木瓜蛋白酶添加量、风味蛋白酶添加量为自变量,酶解产物的钙螯合力为响应值,设计了三因素三水平响应面实验,得到最佳酶解工艺条件为:木瓜酶酶解时间定为3.5 h,风味蛋白酶酶解时间为2.84 h,风味蛋白酶添加量为0.18%。在该条件下酶解产物含有较多的酸性氨基酸及碱性氨基酸,有利于螯合反应的发生。     

双酶分步水解制备菜籽蛋白肽

实验选取Alcalase 2.4 L碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶分步水解菜籽蛋白。结果表明双酶分步水解制备菜籽肽的最佳工艺为Alcalase碱性蛋白酶在pH值9.5,温度55℃,底物质量分数3%,酶活性5 500 u/g条件下酶解5.5 h,水解度为21.14%,再用复合风味酶在pH值6,温度50℃,酶活性900 u/g条件下继续酶解3 h。单因素试验和正交实验研究粗肽液用活性炭脱色的优化条件为:在活性炭质量分数1.5%,pH值4.5,温度55℃条件下脱色50 min,脱色率达32.15%,氨基酸损失率为25.15%。     

[鱼回]鱼骨胶原多肽的制备工艺研究

鱼骨中胶原蛋白含量丰富,本研究采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶对鲴鱼骨进行分步酶解制备骨胶原多肽。通过单因素和正交优化实验,确定碱性蛋白酶水解鲴鱼骨胶原蛋白的最佳工艺条件为：料液比（w／v）4：50,酶解温度45％,加酶量4％,pH值8,酶解时间3h,在此条件下,水解度达到39．49％。风味蛋白酶分步酶解的最佳工艺条件为酶解温度50％,加酶量4％,pH值7．5,酶解时间3h,在此条件下,水解度达到47．2％,水解产物的风味在一定程度上也得到了改善。     

双酶复合水解蜂蛹蛋白工艺研究

研究了脱脂蜂蛹蛋白的酶法水解工艺。以水解度和多肽得率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、风味酶中选出中性蛋白酶和碱性蛋白酶进行双酶复合水解。采用单因素与响应面优化设计,得出最佳酶解工艺条件为:复合酶比例1︰1(g/g)、加酶量4.67%、p H 8.27、料液比1︰12(g/m L)、酶解温度48.44℃、酶解时间4 h。此优化试验条件下,蜂蛹蛋白理论水解度46.05%,实际水解度为45.89%。此工艺可推广应用于蜂蛹蛋白多肽产业化生产的备选工艺。     

基于响应面优化杏仁蛋白酶解工艺的研究

以新疆甜杏仁为原料,选用碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步水解杏仁蛋白,采用响应面优化双酶水解杏仁蛋白的工艺条件。结果表明,底物浓度2.5%,杏仁蛋白酶解的最佳工艺条件为:碱性蛋白酶添加量3 500 U,酶解时间3.5h;风味蛋白酶添加量2 000 U,酶解时间3.0 h。在此条件下,杏仁蛋白最大水解度为24.65%。     

响应面分析法优化南美白对虾的酶解工艺研究

利用响应面法对南美白对虾的酶解工艺进行优化.以南美白对虾为原料,采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步酶解的方法,以蛋白水解度(DH)为衡量指标.结合单因素分析考察底物浓度、风味蛋白酶的添加量和风味蛋白酶的反应时间三因素三水平的中心组合实验设计,得出一个多元线性回归方程模型.在分析各个因素的显著性和交互作用后,得出南美白对虾酶解工艺的最佳条件:底物浓度15％,风味蛋白酶添加量0.8％,风味蛋白醇酶解时间3.0h,水解度高达47.19％.     

微波辅助分步酶解紫苏饼粕蛋白制备鲜味肽

在微波辅助的条件下,利用碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步对紫苏饼粕蛋白进行水解,应用正交试验确定了最佳的酶解条件。通过Sephadex G-15凝胶层析、反相高效液相色谱(reversed phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)法和电子舌技术对酶解液成分与鲜味的变化进行了表征。结果表明,在微波功率400 W条件下,第1步碱性蛋白酶最佳酶解条件为酶添加量1 600 U/g、p H 10.0、微波温度60℃、微波时间35 min;第2步风味蛋白酶的最佳酶解条件为酶添加量1 600 U/g、p H 6.5、微波温度65℃、微波时间40 min,分步酶解最终水解度为44.86%。最后通过凝胶层析、RP-HPLC与电子舌表征,证明微波辅助分步酶解法快速、高效,且与单独酶解所得产物相比,其产物鲜味改善明显。     

分步酶解小麦面筋蛋白制备低苦味肽粉的研究

目的 研究分步酶解小麦面筋蛋白(wheat gluten, WG)制备低苦味肽粉的工艺。方法 选用中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶水解WG至8%水解度,接着用风味蛋白酶对水解产物进行脱苦处理,对不同酶解产物中苦味肽的特性进行系统研究,探究苦味肽含量、氨基酸组成、分子量分布、表面疏水性等指标变化对WG酶解物苦味值的影响,对比风味蛋白酶对不同单酶酶解物的脱苦效果差异,分析风味蛋白酶对WG酶解物脱苦的内在机理,进而确定制备低苦味小麦蛋白肽粉的最佳酶解工艺。结果 中性蛋白酶的酶解产物经风味蛋白酶作用后,脱苦效果最显著,苦味肽苦味值从4.08降至2.25,酶解产物的苦味值可下降56.42%。木瓜蛋白酶的酶解产物经风味蛋白酶作用4 h后,酶解产物的苦味值最低,制备出苦味值为1.28的WG低苦味肽粉。结论 经分步酶解作用后,酶解产物中苦味肽的含量下降;疏水性氨基酸比例的下降和游离氨基酸含量的升高引起苦味肽苦味阈值的增大,共同导致酶解产物苦味值显著降低,该研究为酶解脱苦技术的快速发展和WG活性肽工业化生产提供新的参考。     

酶法制备花生多肽工艺条件优化的研究

采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解花生粕中的蛋白质,制取抗氧化活性较高的花生多肽,以水解度(DH)和羟自由基清除率(E)为指标,确定了最佳用酶为碱性蛋白酶。考察了底物质量分数、加酶量、时间、温度和pH值5个因素对水解度(DH)和羟自由基清除率(E)的影响,采用单因素试验和响应面分析的方法确定了花生粕酶解制备花生多肽最佳工艺参数,条件为:底物质量分数8%、加酶量8070U/g底物,pH7.7,温度55℃、时间3h,该条件下得到的花生多肽羟自由基清除率为62.15%。     

酶法水解生产大豆多肽研究

本文研究了Alcalase酶对大豆蛋白的有限水解作用 ,分析了酶加量、pH值、温度、底物浓度、反应时间等因素对大豆蛋白酶水解的影响 ,确定了Alcalase蛋白酶水解大豆蛋白的较佳条件范围 ;同时研究了Flavourzyme酶对大豆多肽的水解作用 ,及对大豆多肽风味的影响 ,提出了采用Alcalase酶和Flavourzyme酶双酶法分步酶解工艺来生产低苦味大豆多肽的方法     

双酶水解鸡骨泥的工艺优化

对鸡骨泥进行酶水解,经筛选确定中性蛋白酶和Flavourzyme复合风味酶的组合能有效酶解鸡骨泥。经正交试验分析,确定酶解的最佳工艺为:酶解温度50℃、pH值8.5、中性蛋白酶和Flavourzyme复合风味酶的添加量分别为0.75%和1.50%、底物浓度5%、水解时间2.5h。在该条件下酶解效率最高,水解度和氮收率分别为37.11%和92.50%,酶解产物澄清无苦味及腥味,且游离氨基酸含量显著增加。     

液压压榨澳洲坚果粕酶解制备多肽工艺优化

以液压压榨澳洲坚果粕为原料,分析了其常规营养成分含量与氨基酸组成。采用碱性蛋白酶与中性蛋白酶催化酶解澳洲坚果粕蛋白制备多肽。以水解度为指标,利用单因素试验与正交试验考察了各因素对澳洲坚果粕蛋白水解度的影响。结果表明：液压压榨澳洲坚果粕中含有32.25%的蛋白质,17 种氨基酸,含量为25.05%。碱性蛋白酶各因素对澳洲坚果粕蛋白水解度影响的主次顺序为：酶解时间＞酶解温度＞加酶量＞酶解pH值＞底物质量浓度,最佳工艺条件为：酶解温度60 ℃、酶解时间3.5 h、底物质量浓度110 g/L、酶解pH 8.0、加酶量2 400 U/g,在此条件下水解度达到了22.83%。中性蛋白酶各因素影响水解度的主次顺序为：加酶量＞酶解时间＞底物质量浓度＞酶解温度＞酶解pH值,最佳工艺条件为酶解温度55 ℃、酶解时间3.5 h、底物质量浓度100 g/L、酶解pH 7.0、加酶量3 200 U/g,水解度达到了22.78%。碱性蛋白酶与中性蛋白酶各因素对澳洲坚果粕蛋白水解度的影响均达到了极显著水平（P＜0.01）。在最佳工艺条件下,碱性蛋白酶酶解液压压榨澳洲坚果粕制备多肽的效果优于中性蛋白酶。     

2种蛋白酶水解牦牛血液蛋白工艺优化

目的 以牦牛血为原料，在碱性蛋白酶水解基础上，加入风味蛋白酶建立复酶分步水解牦牛血液蛋白工艺。方法 以蛋白水解率为指标，运用单因素与正交试验获得碱性蛋白酶水解工艺，在此基础上采用四因素三水平正交试验优化复酶水解pH、水解温度、酶浓度、水解时间，获得碱性蛋白酶与风味蛋白酶分步水解工艺。结果 复酶工艺为在底物浓度1:6 g/mL、最适pH9、最适温度55 ℃、1.00 %的碱性蛋白酶水解1 h后，调节pH到7，添加0.75 %的风味蛋白酶继续水解5 h，可获得最高蛋白水解率为30.77±0.18 %。结论 对研究酶水解牦牛血制备高附加值产品具有重要参考作用。     

酶解法制备鹿茸多肽的研究

研究酶解法制备鹿茸多肽的条件,采用双酶水解的方法制备鹿茸多肽。在相同的条件下,用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶水解鹿茸蛋白。以水解度和多肽得率为指标,确定了胰蛋白酶和复合蛋白酶为最佳酶系组合。通过单因素实验和正交实验得出最佳的酶解工艺条件:温度48℃、pH7.2、底物浓度7.5%、酶与底物浓度比6000U/g,两种酶比例为1:1,水解时间4h。在此条件下用胰蛋白酶和复合蛋白酶对鹿茸蛋白水解,水解度为32.5%,多肽得率为72.8%。     

二次旋转组合法优化酶解胡麻籽粕蛋白工艺研究

以胡麻籽粕蛋白粉为原料分别采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶和中性蛋白酶对胡麻籽粕蛋白进行酶解以水解度和可溶性氮含量为指标对酶制剂进行筛选。通过单因素及二次旋转组合设计试验以水解度为指标,获取最佳酶解工艺。结果表明,碱性蛋白酶与风味蛋白酶对胡麻籽粕蛋白的酶解效果较好,胡麻籽粕蛋白的最佳酶解工艺为:碱性蛋白酶作用底物浓度30%,碱性蛋白酶作用时间4.5 h,碱性蛋白酶添加量35 000 U,风味蛋白酶添加量3 000 U,风味蛋白酶作用时间3.5 h。