国产梅毒ELISA试剂(双抗原夹心)在血液筛查中的初步应用

为探讨ＥＬＩＳＡ在血液中筛查梅毒的可行性 ,我们以ＯｌｙｍｐｕｓＰＫ72 0 0全自动分析仪微量血凝集试验Ｓｅｒｏｄｉａ ＴＰＰＡ作为参考方法 ,选用 2种国产ＥＬＩＳＡ试剂 (双抗原夹心 )在献血者中筛查梅毒特异性抗体 ,以了解其灵敏度和特异性 ,现将结果报告如下。1 标本为 2 0 0 1年 7月至 2 0 0 2年 4月共 15 0 90份无偿献血者标本。2 ＥＬＩＳＡ试剂盒Ａ和Ｂ分别购自国内 2个公司 ,均经中国药品生物制品检定所批批检 ;Ｓｅｒｏｄｉａ ＴＰＰＡ试剂盒购自日本富士株式会社。3 ＥＬＩＳＡ双抗原夹心一步法 ,用ＦＡＭＥ检测 ;ＴＰＰＡ…     

不同酶标试剂盒及不同方法检测甲肝总抗体比较

为提高本所甲肝总抗体酶标试剂盒的灵敏度,将原常规法10μｌ血清加样量增大至20μｌ,ＨＡＶ抗体酶标记物量相应调整作为改良法,并比较两法的灵敏度及符合率。选127份血清用Ａｂｂｏｔｔ第2代试剂盒竞争法,即加40μｌ血清和170μｌ酶结合物,检测其抗ＨＡＶ总抗体,抗ＨＡＶ阳性68份,阴性59份;用我所试剂盒常规法检测55份阳性,72份阴性;用改良法检测66份阳性,61份阴性。两种方法检测结果与Ａｂｂｏｔｔ试剂盒的检测结果比较,改良法和常规法的灵敏度分别为971%和809%,总符合率为977%和897%。改良法比常规法的假阳性率高17%,但假阴性率低132%,改…     

抗-HCV初筛阳性血浆的WB确证检测及核酸检测结果分析

目的探讨丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)初筛阳性血浆的HCV核酸检测(nucleic acid testing,NAT)及蛋白免疫印迹(Western blot,WB)确证结果的相关性。方法使用1种HCV抗体确证试剂及1种核酸检测试剂,分别检测抗-HCV初筛为阳性的人血浆172份。结果 172份样本中,WB确证及NAT检测结果阳性的样本分别为115和124份,两种试剂检测结果共同阳性的样本100份,共同阴性的样本26份,不一致样本46份。WB确证阳性的样本检测条带强度越强,确证检测及核酸检测共同阳性率越高;确证检测条带数越多,确证检测及核酸检测共同阳性率越高。检测结果不一致的样本中,WB阳性、NAT阴性样本15份;WB阴性、NAT阳性样本16份;WB不确定、NAT阴性样本7份;WB不确定、NAT阳性样本8份。结论抗-HCV初筛阳性样本的WB确证与NAT检测结果既相关又存在一定差异,WB结合NAT检测可更大限度地保障输血安全。     

不同月龄婴儿接种腮腺炎疫苗的免疫效果比较

８～１１和１２～１７月龄婴儿分别为４４人（其中８月龄３４人）和５２人,每人皮下注射常州延申生物技术有限公司生产的Ｓ７９株冻干流行性腮腺炎活疫苗０．５ｍｌ。于免前和免后１个月分别采血,双份血清同时用ＨＩ和ＥＬＩＳＡ法检测血清抗体。ＨＩ抗体液度≥１：２为阳性,抗体由阴转阳或滴度≥４倍增长为免疫成功。腮腺炎血凝素购自中国药品生物制品检定所;腮腺炎抗体ＥＬＩＳＡ试剂盒购自美国Ｃｌａｒｋ公司。 ＥＬＩＳＡ结果计算：校正品值＝校正品Ａ值的平均数×校正因子,ＩＳＲ值＝样品Ａ值／校正品值,ＩＳＲ增长率＝（免后样…     

ToRCH-IgM ELISA试剂盒的研制和应用

目的 建立快速、敏感、特异性强、重复性好的抗ＴｏＲＣＨ－ＩｇＭ诊断方法。方法 在传统ＥＬＩＳＡ间 接法基础上进行了改良，在试剂盒的研制过程中，使用了自制的吸附剂、加速剂和稳定剂，建立一种抗ＴｏＲＣＨ－ＩｇＭ／ＥＬＩＳＡ快速诊断方法。结果 改良的ＴｏＲＣＨ－ＩｇＭ／ＥＬＩＳＡ诊断试剂具有快速、敏感、特异性强、重复性好等优点。结 论 该试剂可用于ＴｏＲＣＨ－ＩｇＭ的检测。     

人巨细胞病毒pp65 IgG-AI快速诊断试剂的临床应用

目的评价人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)pp65 IgG-亲和力指数(Avidity index,AI)快速诊断试剂的临床应用价值。方法以自制的截短pp65重组蛋白作为诊断试剂,对本室血清库中保存的标本,采用ELISA间接法检测其特异性IgG抗体,分析该试剂的灵敏度、特异性和准确度。检测临床收集的89份患者血清标本(其中5例被明确诊断为HCMV活动性感染)的pp65 IgG抗体,并与意大利DIESSE公司IgG检测试剂盒结果进行比较。同时,对pp65 IgG阳性标本,运用尿素变性ELISA间接法检测其AI值,与意大利DIESSE公司IgM检测试剂盒结果进行比较,评价AI检测在HCMV感染诊断中的价值。结果用pp65快速诊断试剂检测阳性、阴性血清特异性IgG抗体,均与原确认结果相同,灵敏度、准确度和特异性均达100%。两种诊断试剂IgG抗体检测结果,差异无显著意义。pp65诊断试剂对pp65 IgG阳性标本的AI值进行检测,AI<60%标本共41份,阳性率为46.07%,较参比试剂IgM检测阳性率(23.59%)高;5份明确诊断HCMV活动性感染的患者血清标本中,pp65诊断试剂与参比试剂检测IgG抗体,各有4份阳性,一致率为100%,pp65诊断试剂检测AI值为阳性的标本有3份,其中,参比试剂检测IgM为阳性的仅有1份。临床明确诊断为HCMV肺炎的患者血清标本,诊断试剂检测AI值为可疑阳性,但参比试剂检测HCMV IgM抗体为阴性。结论pp65 IgG-AI快速诊断试剂可初步诊断HCMV感染,简单快速,重复性好,具有良好的临床应用前景。     

两种乙型肝炎病毒核酸定量试剂对315例样本检测结果的比较

目的采用国内和国外乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)定量检测试剂盒检测315份血清样本,比较两种试剂检测能力的差异。方法采用Abbott Architect i2000化学发光检测试剂盒检测315份样本的乙型肝炎血清学五项指标后,再用进口(简称"Roche试剂")及国产(简称"国产试剂")乙型肝炎病毒核酸定量试剂盒进行复检,比较两种试剂检测结果的一致性。结果两种试剂定性结果阳性符合率为60.6%(134/221),阴性符合率为100%(94/94),总符合率为72.4%,检测结果差异有统计学意义(P<0.01);无论对HBsAg阳性或阴性样本,Roche试剂的阳性检出率均明显高于国产试剂(P均<0.01),灵敏度为导致二者检测结果产生差异的主要原因;定量结果相关性和一致性分析表明,两种试剂定量检测结果有较好的一致性。结论不同试剂盒检测HBV DNA灵敏度差异较大,本实验国产HBV DNA定量试剂盒灵敏度较低,质量有待提高。     

国际水会议(IWC)论文摘要

全有机化学处理 ,特别是高磷酸盐和高钙容忍度处理方案的开发———ＳＥＲＧＩＯＣＡＳＴＲＯ ,ＩＮＳＴＲＯ ,ＩＮＳＴＩＴＵＴＯＭＥＸＩ ＣＡＮＯＤＥＬＰＥＴＲＯＬＥＯ(ＩＷＰ) ,ＭＥＸＩＣＯ ,Ｄ .Ｆ .,ＭＥＸＩＣＯ .ＩＷＣ— 1999— 49　　作者评述了一种高磷酸盐含量的“全有机”配方的开发。该配方可在比较温和的 ｐＨ下运行 ,运行安全可靠 ,腐蚀率在 0 .0 2 5ｍｍ/ａ以下 ,配方组成是环境友好的。Ｃｏｎｅｍａｕｇｈ电厂凝结水精处理器的升级———ＧＥＲＡＬＤＧＡＬＬ ,ＧＰＵ/ＧＥＮＣＯ ,ＮＥＷＦＬＯＲＥＮＣＥ ,ＰＡ .ＩＷ…     

从精浆前列腺特异抗原的分离纯化及鉴定

用ＰＥＧ－ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０两步法，从精浆中分离纯化前列腺特异抗原（ＰＳＡ）。精浆标本先经ＰＥＧ粗提，约去除８０％的杂蛋白，再经柱层析，进一步提纯，提纯产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及ＥＬＩＳＡ法证实为免疫纯。     

磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒螺旋体

目的应用磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒特异性抗体和反应素。方法应用磁凝集法梅毒检测试剂(Tre-ponema pallidum magnetic particle agglutination,TPMPA)检测梅毒阳性血清,分析梅毒阳性血清符合率、梅毒血清抗体滴度、假阳性检出率及交叉反应。结果用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测26份梅毒阳性血清样品,结果均为阳性,与省血液中心和省疾控中心的检测结果的符合率为100%;应用TPMPA-B试剂检测梅毒抗体滴度结果均较用梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂(TRUST)检测结果高2个滴度;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测正常血清,结果均为阴性,与省血液中心检测结果相符;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测5份风湿病患者血清和13份慢性肝病患者血清,均未出现交叉反应。结论磁凝集法梅毒检测试剂具有良好的特异性和敏感性,操作简便、省时,可初步用于检测梅毒特异性抗体和反应素。     

快速细胞培养法在呼吸道合胞病毒感染早期诊断中的应用

目的建立检测呼吸道合胞病毒(RSV)的快速细胞培养法,并应用于呼吸道合胞病毒感染的早期诊断。方法采用自制的抗RSV的单克隆抗体,经快速细胞培养法和直接涂片法检测165份急性下呼吸道感染的婴幼儿鼻咽分泌物及咽拭子中RSV,并与病毒分离培养比较,再将自制试剂盒与进口呼吸道病毒荧光检测试剂盒检测结果进行比较,探讨其临床实用性。结果57份咽拭标本中,1份快速细胞培养法及直接涂片法检测均为阳性,阳性率1.8%,未分离到病毒。108份鼻咽分泌物中,快速细胞培养法检出21份阳性,阳性率19.4%。直接涂片法检测出14份阳性,阳性率13%,病毒分离培养法检出阳性12份,阳性率11%。快速细胞培养法与其他两种方法相比,阳性检出率差异有显著意义。自制试剂盒与进口试剂盒检出40份鼻咽分泌物标本,阳性率均为35%。结论将直接涂片法与快速细胞培养法同时应用于RSV感染的早期诊断,既能及时提供检测结果,又能提高诊断的敏感性,是对RSV感染进行早期诊断的实用方法。     

尿液中红细胞、白细胞仪器检测与人工镜检结果的比较

目的探讨采用仪器检测尿液中红细胞、白细胞和人工镜检的结果有何差异性。方法回顾性分析我院近年来检测的尿液标本结果。结果1200份尿液标本,通过仪器检测,红细胞的阳性为631份,阴性569份;通过人工镜检,红细胞的阳性为567份,阴性633份;红细胞阳性检测结果的符合率为89.9%;1200份尿液标本,通过仪器检测,白细胞的阳性为473份,阴性727份;通过人工镜检,白细胞的阳性为494份,阴性706份;白细胞阳性检测结果的符合率为95.7%;由此可见,尿液中红细胞、白细胞通过仪器检测和人工镜检,其结果并不能完全一致。结论对于尿液中红细胞、白细胞检测,适当情况下应根据患者的病因和症状,采用多种方法有机结合进行诊断,以提高检测的准确率,降低假阴性结果的发生几率,为临床提供可靠的检测结果。     

梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品的研制

目的建立梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品。方法通过对84份血浆的复核、确证,组建梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品,并将3份效价检测用参考品溯源至国际标准品,经5家实验室的协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果梅毒非特异性抗体检测试剂国家参考品由25份阴性及25份阳性样品组成,3份效价检测用参考品的效价定值分别为12、10和5 IU/mL。协助标定确证25份阴性参考品均为阴性,25份阳性参考品均为阳性,效价参考品的效价检测值均≤0. 625 IU/mL。参考品的均匀性及稳定性均符合要求。结论研制的参考品可作为梅毒非特异性抗体检测试剂的质量控制和评价使用。     

人类免疫缺陷病毒抗体ELISA S/CO比值、核酸定量检测结果与确证检测阳性结果的相关性分析

目的探讨人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)抗体ELISA检测S/CO比值、核酸定量检测结果与确证检测阳性结果的相关性。方法应用2种国产[北京万泰生物药业股份有限公司(以下简称万泰)和上海科华生物工程股份有限公司(以下简称科华)]抗-HIV诊断试剂(ELISA法)、1种进口(美国Bio-Rad公司,以下简称Bio-Rad)HIV抗原抗体诊断试剂(ELISA法)、1种核酸检测试剂(RT-PCR-荧光探针法)及WB确证试剂(Western blot法)对86份抗-HIV初筛阳性血浆样本进行检测,并进行相关性分析。结果 86份样本中,3种ELISA试剂检出的53份共同阳性样本WB确证结果均为阳性;25份共同阴性样本WB确证结果 20份为阴性,5份为不确定;检测结果不一致的8份样本WB确证结果 3份为不确定,5份为阴性。万泰和科华试剂检测样本S/CO比值≥10时,96.30%和100%的样本为WB确证阳性,1≤S/CO比值<10时,均有20%的样本为WB确证阳性;Bio-Rad试剂检测样本S/CO比值≥5时,100%的样本为WB确证阳性。核酸检测病毒载量≥103IU/ml时,97.87%的样本为WB确证阳性;0 IU/ml<病毒载量<103IU/ml时,53.85%的样本为WB确证阳性。86份样本中有15份ELISA检测、核酸检测及确证检测结果不完全一致,其中4份样本为核酸检测阳性,确证试剂检测结果为不确定,疑似HIV-1感染者样本。结论抗-HIV ELISA S/CO比值及核酸定量检测结果与确证检测阳性结果有一定相关性,S/CO比值及病毒载量对确证检测阳性结果的判定具有一定参考价值。     

乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白基因在昆虫细胞中的表达及…

从乙肝阳性人血清中克隆ＨＢＶ含前ｓ区表面抗原基因，将基插入到杆状病毒转移质粒ＰＶＬ１３９３中，并与昆虫病毒ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染Ｓｆ９昆虫细胞，筛选出重组病毒。用乙肝放免（ＲＩＡ）试剂盒及ＥＩＡＰｒｅＳ２－Ａｇ检测试剂盒检测重组病毒感染的Ｓｒ９细胞，表明细胞中有ＨＢｓＡｇ及ＰｒｅＳ２－Ａｇ存在。将重组病毒感染的细胞免疫小鼠，在小鼠血清中能检测到ａｎｔｉ－ＨＢｓＡｇｅ及ａｎｔｉ－ＰｒｅＳ２抗体。     

水性聚氨酯脲-丙烯酸酯膜的表面性能

用预聚物分散－原位聚合法合成了聚氨酯脲－丙烯酸酯（ＰＵＡ）水分散液。用ＡＴＲ－ＦＴＩＲ和ＥＳＣＡ技术表征了ＰＵＡ水分散液在玻璃基材上成膜后的表面结构和组成,测定了不同液体在ＰＵＡ膜表面上的接触角及ＰＵＡ膜的耐磨性。结果表明,ＰＵＡ成膜时与空气接触面和与玻璃接触面的表面组成和耐磨性接近于聚氨酯脲（ＰＵＵ）的表面特性。此外,在ＰＵＡ膜中ＰＵＵ和聚丙烯酸酯的组成呈“双向梯度”分布,即在沿膜的２个表面方向     

HCV C区基因片段的克隆、表达及纯化

目的研究 ＨＣＶ Ｃ区片段在大肠杆菌中的表达及纯化工艺。方法采用 ＲＴ－ＰＣＲ技术,从ＨＣＶ感 染者血清中克隆Ｃ区基因片段,插入ｐＥＴ２８ａ（＋）质粒中,并在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中表达。采用亲和层析或 Ｓａｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ－２００柱层析纯化抗原。结果两种纯化工艺的收率分别为５８ｍｇ／Ｌ和９５ｍｇ／Ｌ发酵液。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯 度分别为９８％和９０％。ＥＬＩＳＡ检测纯化抗原具有较好的抗原性和特异性。结论两种纯化工艺简便,重组蛋白纯 度高,可用于ＥＬＩＳＡ试验。     

抗支原体共同抗原单抗的筛选及应用

利用猪鼻 (mhy)、肺炎 (mp)支原体作为免疫原 ,采用杂交瘤技术建立 7株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。所分泌的抗体用ELISA法检测与Mo、Ma、Mhy、Al及Mp 5种支原体的反应性 ,其中甲H5和丁D3细胞所分泌的抗体与 5种支原体均发生反应。表明这两种抗体是针对 5种支原体共同抗原的 ;以丁D3抗体作为一抗 ,采用间接荧光法分别检测 5种支原体感染的Vero细胞均为强阳性 ,其敏感性高于培养法 ,与DNA染色法相当 (2 0 0个 /ml) ;以甲H5抗体为包被抗体 ,丁D3抗体为酶标抗体 ,采用双抗体夹心法检测培养上清中支原体敏感性为 12 5ng/ml。用两种方法检测 2 0份支原体阳性细胞株 ,10份阴性细胞株标本 ,结果间接荧光法显示 2 0份阳性标本全部为阳性 ,10份阴性标本 1份为阳性 ;双抗体夹心法 2 0份阳性标本中 10份为阳性 ,10份阴性标本全部为阴性     

抗环瓜氨酸肽抗体定量检测ELISA试剂盒的制备及其诊断类风湿性关节炎的意义

目的制备抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体定量检测ELISA试剂盒,并探讨其诊断类风湿性关节炎(RA)的意义。方法应用作者合成的CCP制备抗CCP抗体定量检测试剂盒,并进行鉴定。应用该试剂盒检测178份RA患者和712份非RA患者及健康人血清,评价其在RA诊断中的价值。结果所制备的定量检测试剂盒cutoff值为25RU/ml;线性良好,R2值大于0.99;试验内变异系数为5.15%~8.25%,试验间变异系数为6.82%~11.23%;平均回收率为99.7%。该试剂盒在4℃保存6个月,稳定性良好。与国外同类试剂盒同时测定80份样本,阳性符合率为95.7%,阴性符合率为97.1%,总体符合率为96.3%。该试剂盒对RA诊断的敏感性为73.0%,特异性为98.2%。结论所制备的试剂盒各项指标均达到相关要求,能够满足临床检测的需要。     

第一批重组人红细胞生成素国家标准品的研制

目的　建立符合国家标准品要求，用于重组人红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）质量控制的ｒＨｕＥＰＯ国家标 准品。方法 用英国 ＮＩＢＳＣ提供的 ＷＨＯ ｒＨｕＥＰＯ（８７／６８４），采用经典的多血症小鼠－”Ｆｅ体内生物学活性测定法， 对我国第一批重组人红细胞生成素国家标准品（９８０５２８）进行了标定。用阿根廷ＩＮＳＴＴＴＵＴＯ　ＳＩＤＵＳ　Ｓ．Ａ．进行了复 核标定。结果 该批国家标准品效价为８２ＩＵ／瓶，生物学活性稳定。结论９８０５２８批ｒＨｕＥＰＯ可作为国家标准品， 用于重组红细胞生成素制品体内生物学活性测定。