海藻糖合酶的分离纯化及部分酶学性质

用硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析、离子交换层析对一株芽孢杆菌SH-110产生的海藻糖合酶粗酶液进行纯化,用PAGE电泳逐步分析纯化的结果,用SDS-PAGE电泳证明该酶的分子量为62.4 kD。酶反应最适pH值为7.0,最适作用温度为35℃,金属离子Zn2+、K+、Na+对酶活性有激活作用,Ba2+、Ca2+、Mn2+对酶活性有抑制作用。酶底物专一性初步分析结果表明,该酶确实是以麦芽糖为专一性底物来转化生成海藻糖的海藻糖合酶的一种新酶。     

聚乙烯醇脱氢酶的分离纯化及其酶学性质

采用(NH4)2SO4分级沉淀及Q-Sepharose HP柱层析两步纯化,首次从可高效降解聚乙烯醇(PVA)的混合菌系发酵产物中分离纯化获得了纯蛋白聚乙烯醇脱氢酶(PVADH),并对其酶学性质进行了研究. 结果表明,PVADH分子量为134.3 kDa,最适作用温度为35℃,最适作用pH值为7.5;PVADH以仲醇为底物时酶活性普遍高于以其他醇类为底物时,PVADH与PVA反应产物中检测到羰基化合物,证实PVADH对PVA有降解作用.     

酸性蛋白酶AP-10分离纯化及其酶学性质

采用活性炭吸附脱色、硫酸铵分级沉淀、脱盐和凝胶层析等技术对酸性蛋白酶AP-10浓缩液进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,分离纯化后得到的酸性蛋白酶AP-10纯组分比酶活为5 800 U·mg^-1,纯化倍数为6倍;最适反应温度为40℃,热稳定范围为30～45℃;最适反应pH值为3.0,pH值稳定范围为3.5～6.5;Mn²⁺对酸性蛋白酶AP-10具有强烈的激活作用,Fe²⁺对酸性蛋白酶AP-10具有强烈的抑制作用。为拓展酸性蛋白酶AP-10的应用及开发高品质产品奠定了基础。     

蚯蚓组织脱氧核糖核酸酶EWD3的生化性质

目的研究赤子爱胜蚓组织中1种脱氧核糖核酸酶(EWD3)的主要生化性质。方法采用Lowry法测定酶的蛋白含量,SDS-PAGE和MALDI-TOF方法测定相对分子质量,毛细管等点聚焦电泳法测定等电点,并测定EWD3酶的酸、碱稳定性、温度稳定性、激动剂和抑制剂对酶活性的影响及酶促反应米氏常数Km值。结果EWD3酶的蛋白含量为2.1 mg/ml,相对分子质量为63 460,等电点为6.20,Km值为1.52 mg/ml,最适pH值为4.4~5.2,不耐高温。Mg2+、Ca2+、Mn2+1、0和20 mmol/LEDTA对EWD3酶活性有抑制作用。这些参数与已发现的各种DNases相比有明显差异。结论蚯蚓组织中已发现的脱氧核糖核酸酶EWD3具有特殊的酶学特征。     

单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ的分离纯化及其酶学性质

目的分离纯化单一组分的单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析其酶学性质。方法单环刺螠体腔液经离心、超滤、离子交换层析、凝胶过滤等方法进行分离纯化,得到单一洗脱峰酶组分,经Native-PAGE、SDS-PAGE和飞行质谱分析,测定其纯度和相对分子质量;并以酪蛋白为底物,Folin-酚试剂法测定酶活力,对其酶学性质进行分析。结果分离纯化的UFE-Ⅱ具有水解纤维蛋白的活性,其水解酪蛋白的比活力达到375.6U/mg,纯化倍数为10.3倍,回收率为14.0%。UFE-Ⅱ为单一组分,纯度达99%以上,相对分子质量为24329。UFE-Ⅱ的最适反应温度约为45℃;最适反应pH值为7.0;Ca2+、Mn2+和Fe2+是该酶的强激活剂;Fe3+、Cu2+和Pb2+对该酶活力具有一定的抑制作用;SBTI和PMSF能完全抑制酶活力,表明该酶为丝氨酸蛋白酶;糜蛋白酶抑制剂可部分抑制酶活力,亮抑酶肽、抑蛋白酶肽、苯甲脒可较弱地抑制酶活力。结论从单环刺螠体内成功分离纯化出纤溶酶UFE-Ⅱ,并分析了其酶学性质,该酶具有进一步开发利用价值。     

核酸酶P1的纯化和酶学性质研究

桔青霉发酵液通过硫酸铵分级沉淀、凝胶层析和离子交换纤维素层析等生化分离步骤,得到的核酸酶P1比活力为711U/mg,纯化倍数1500。纯化的酶蛋白纯品经SDS 聚丙烯酰胺电泳,呈现一条单带。该酶催化反应的最适pH范围为6～8,最适温度在70℃,在60℃以下时酶活较为稳定.锌离子对此酶有明显的激活作用,而铜离子具有明显的抑制作用。     

灵芝超高压突变株漆酶的纯化和酶学性质

灵芝超高压突变株G1502的发酵液经浓缩、DEAE-纤维素柱层析,纯化出一种漆酶。其最适作用温度为45℃,在不高于45℃的条件下保存5 h,残余酶活在97%以上;最适pH为4.4,在pH=3.8~6.6内保存,残余酶活在80%以上。漆酶催化愈创木酚的υmax和Km分别为2.28μmol.L-1.min-1和1.94×10-4mol.L-1。金属离子K+和Cu2+对酶有激活作用,Fe2+、Co2+、Ca2+、Na+、Ba2+对酶活有很大的抑制作用。     

绳状青霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶学性质研究

从绳状青霉（Penicillium funiculosum）深层发酵液中分离得到一种未知的β-葡萄糖苷酶,并对其酶学性质进行初步分析.粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex A-25离子交换层析、Sephadex G-50凝胶过滤层析等步骤,获得了一种凝胶电泳均一的β-葡萄糖苷酶,经SDS-PAGE测得其分子量为19 kDa,其最适反应温度为60℃、最适反应pH值为4.5.     

Burkholderia cepecia.njut1中的海因酶的纯化及性质

经过硫酸铵分级沉淀、热处理、HiPrep^TM Phenyl FF(high sub)疏水层析、DEAE Fastflow离子交换层析以及Sephadex G-200凝胶过滤,从Burkholderia cepecia．njut1中得到了海因酶,收率8．98％,纯化倍数为69。Burkholderia cepecia njut1海因酶是同源四聚体,亚基分子量52ku,等电点是5．09,具有严格的光学选择性,是D-型海因酶,并具有较广泛的底物适应性,对苄基海因和对羟苯海因有较高的亲和力。Burkholderia cepecia．njut1海因酶的最适催化的pH值为9．0。酶在pH6．5～10．0下稳定。60℃时酶活力较高,但在此温度下酶的热稳定性较差。Burkholderia cepecia．njut1海因酶是金属依赖性酶,金属螯合剂EDTA对海因酶有抑制作用。二价金属离子对酶有较大的影响。     

绿僵菌几丁质酶的分离纯化及性质

从自然罹病死亡的金龟子体内分离到一株金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）,它在几丁质的诱导下能产生较高活性的几丁质酶.发酵液经硫酸铵盐析、DEAE纤维素柱层析、Phenyl Sepharose^TM 6 Fast Flow疏水柱层析等方法,得到电泳纯的几丁质酶.用SDS-PAGE测得该酶相对分子质量为61.5 kD,而经质谱分析为57.14 kD.最适反应温度为55 ℃,最适反应pH值为6.0,酶的等电点pI为4.02,其N末端序列为VIGPAAPL,用硫酸-酚法测得其含糖量为56.2%.水解几丁质的K_m为14.5 μmol•L^-1.该酶在45 ℃,pH值3.0～9.5较为稳定.Zn²⁺、Ca²⁺、Ba²⁺和Mn²⁺离子对几丁质酶活性有明显的促进作用,而Hg²⁺、Co²⁺和Fe²⁺离子完全抑制几丁质酶的活性.此酶还可被EDTA所抑制,表明金属离子为其活性所必需.PMSF试剂对几丁质酶的活力影响比较大,丝氨酸可能是酶活力的必需基团.     

茶树菇多糖提取工艺研究

分别采用热水浸提法、微波辅助法、超声波辅助法、酶法提取茶树菇多糖的提取工艺进行了研究。确定了热水浸提法的最适条件：提取温度90℃,液固比为20：1,提取3次,每次4h,醇析中加入3倍体积的无水乙醇,茶树菇多糖提取率为42.51％;微波、超声波和酶解作用均有利于多糖的提取。     

海参斑软骨多糖的纯化、结构及性质分析

以海参斑软骨为原料,采用水提醇沉法得到粗多糖,通过Sevag法除去蛋白,采用DEAE-52纤维素和葡聚糖G-75纯化得到组分均一的3种多糖FCPS-1、FCPS-2、FCPS-3。对3种多糖进行了化学成分分析及紫外波长扫描,使用天青A比色法对3种多糖进行了肝素效价测定,利用FTIR和NMR对FCPS-3进行了结构表征,采用GPC测定了FCPS-3的相对分子质量并测定其体外抗氧化活性。结果显示:3种多糖总糖质量分数均超过90%,蛋白质量分数低于3%。紫外波长扫描显示,3种多糖在260nm以及280nm处紫外吸收峰较弱,表明3种多糖中蛋白质及核酸含量较低。天青A显色结果显示,FCPS-3肝素效价最高,达到1.365 kU/g;红外及核磁波谱显示,FCPS-3为酸性多糖,且含有硫酸根,为β型吡喃糖。GPC测定FCPS-3的Mw为175700 Da,Z均相对分子质量为253032Da,Mn为121885Da。当FCPS-3质量浓度为5g/L时,其对DPPH?、ABTS+?以及OH?的清除率分别为78.63%、96.26%、93.15%。     

石榴叶超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

利用有机溶剂分级沉淀法从石榴叶中分离出超氧化歧化酶(SOD),研究了分离纯化的最佳工艺条件,并对其性质进行了探讨。结果表明,当石榴叶(g)与磷酸缓冲液(mL)之比为1∶2,磷酸缓冲液pH值为7.6,提取时间为1.5 h。氯仿-乙醇混合物量为提取液的0.25倍,丙酮量为粗酶液的1倍时,分离效果最佳。温度0~60℃,pH 4~9范围内酶的活性稳定。过氧化氢和乙醇-氯仿试验表明,该酶属Cu.Zn-SOD。研究结果为SOD提供了新的酶源。     

蛋清中核黄素结合蛋白的提纯和鉴定

应用层析方法从蛋清中提纯得到核黄素结合蛋白（RBP）。用紫外分光光度法、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS—PAGE）及荧光分光光度法测定其核黄素结合力为275μg／mg，分子量为3420～3450Da。可用于制备抗—RBP抗体。     

壳聚糖酶的分离提纯及其酶学性质研究

从土壤中筛选获得的高产壳聚糖酶菌株Penicillium sp.ZD-Z1,经发酵、分离提取出两种壳聚糖酶A和酶B,并对它们分别进行酶学性质测试.分别测定酶A和酶B的等电点、相对分子质量、最适反应温度和pH、不同脱乙酰度的壳聚糖对酶活的影响.并考察了两种壳聚糖酶的酶解方式,结果表明,酶A为内切酶,酶B为外切酶.     

赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白的纯化及其活性

目的纯化赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并鉴定其活性。方法将制备的赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白粗提液透析后,经Bio-CAD CM柱层析系统非连续梯度洗脱,收集洗脱峰,对有活性的梯度洗脱峰样品进行单向聚丙烯酰胺凝胶电泳(1D-PAGE)及切胶纯化,将切胶回收纯化的蛋白样品进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE),回收蛋白,进行活性和浓度检测。结果透析后的蛋白粗提液经Bio-CAD CM柱层析分离,得到3个不同洗脱梯度的可降解DNA的活性峰,3个梯度蛋白的PAGE带型基本一致,经PAGE分离获得3个核酸酶样蛋白纯品EWD1、EWD2和EWD3,得率和纯化倍数分别为:27.9%,11.6;16.7%,11.2;16.7%,18.6。结论成功纯化了赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并保持了其良好的生物活性。该纯化方法简单、快速、经济、实用,为该蛋白结构及功能的进一步研究奠定了基础。     

Purification of an Inducible DNase from a Thermophilic Fungus

The ability to induce an extracellular DNase from a novel thermophilic fungus was studied and the DNAse purified using both traditional and innovative purification techniques. The isolate produced sterile hyphae under all attempted growing conditions, with an average diameter of 2 μm and was found to have an optimal temperature of 45 °C and a maximum of 65 °C. Sequencing of the internal transcribed region resulted in a 91% match with Chaetomium sp., suggesting a new species, but further clarification on this point is needed. The optimal temperature for DNase production was found to be 55 °C and was induced by the presence of DNA and/or deoxyribose. Static growth of the organism resulted in significantly higher DNase production than agitated growth. The DNase was purified 145-fold using a novel affinity membrane purification system with 25% of the initial enzyme activity remaining. Electrophoresis of the purified enzyme resulted in a single protein band, indicating DNase homogeneity.     

从甘草中提取甘草酸和黄酮类化合物的研究

用超滤与大孔树脂吸附整合工艺路线提取甘草中有效成分－甘草酸和黄酮类化合物。实验结果表明,该工艺不但使操作过程简化,而且提高了甘草酸的提取率。此外还优化了压力、温度、循环液流量、浓度等操作参数。     

菲的提纯

以氯苯为溶剂,在不同温度下用５０％氢氧化钾溶液,活性白土,９０％的硫酸溶液处理工业菲,经冷却,结晶,获得纯度９８．４％－９９．２％的精菲的提纯收率８３％以上,母液可以循环使用,溶剂可以回收。