食源性单核细胞增生李斯特菌快速检测研究进展

食品安全是人类健康非常关注的问题,其中微生物污染是其主要的风险因素之一。单核细胞增生李斯特菌是一种人畜共患病的病原体,感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。该菌广泛存在于自然环境中,低温条件下仍可生长繁殖,是威胁人类健康的主要病原菌之一。传统细菌检测方法耗时长,不能满足现场检测的需求。因此开发快速、准确、高效、可靠的单核细胞增生李斯特菌检测方法是目前研究的热点。基于免疫学、分子生物学、生物传感器和噬菌体等技术的检测方法成为单核细胞增生李斯特菌检测的重要手段。该文综述各类检测技术的研究进展,阐述各个方法在致病菌检测中的原理、特点、应用现状和发展,并讨论各方法的优缺点,以期为单核细胞增生李斯特菌检测新技术的研发提供参考。     

单核细胞增生李斯特氏菌标准物质冻干保存方法

通过研究单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)冷冻干燥保护剂的灭菌方式以及冻干样品的复水方式对样品检测结果的影响,研究设计保护剂种类和含量的正交试验,筛选出最优保护剂灭菌方式和冻干样品复水方式,以及最优的保护剂成分组合。通过研究选择冻干程序和真空压盖,可以保证细菌冻干后保护率在30%以上。此外,针对不同菌体密度的样品储存环境进行考察,通过比较冻干菌粉的保护率发现高密度菌体在-20℃储存30 d稳定。研究制备的活菌在冷链运输(加冰袋)条件下一周内稳定,满足标准物质的发放运输要求,满足实验室质控和方法验证的基本需求。文章所述的单核细胞增生李斯特菌标准物质研究结果将为其他微生物标准物质的冻干保护方法和稳定性研究提供理论指导。     

转基因水稻标准物质的研制

从水分含量、粒度大小、基因纯度等方面研究了候选材料的性质及其对转基因标准物质特性量值的影响.采用重量法进行了转基因水稻种子粉标准物质制备,建立了通过纳米银标记和电感耦合等离子体质谱技术相结合的均匀性检测技术方法.进行了转基因水稻种子粉标准物质的制备和均匀性、稳定性检验,并确定了最小取样量,分析了重量法配制值和荧光定量PCR测定值的一致性.该转基因水稻标准物质可应用于实验室质量控制、水稻转基因成分的定量检测等领域.     

紫杉醇纯度标准物质的研制

研制了紫杉醇纯度标准物质.采用核磁共振法(NMR)对紫杉醇进行定性,利用高效液相色谱法(HPLC)和高效毛细管电泳法(HPCE)进行定值,并进行了均匀性和稳定性考察.该标准物质的最终定值结果为99.6%,扩展不确定度为1.2%.     

鸡肉中非典型沙门氏菌标准物质的研制及其在能力验证中的应用

针对目前沙门氏菌标准物质种类缺乏、研制水平有待提高的问题，选取非典型沙门氏菌NIM JZ048作为目标菌，产气肠杆菌CICC 10293作为干扰菌，研制鸡肉中非典型沙门氏菌标准物质。结果表明，该标准物质的沙门氏菌定量标准值为(1.8±0.4)×10³ CFU/g,菌落总数定量标准值为(5.5±0.9)×10³ CFU/g,定性标准值为沙门氏菌阳性。均匀性和稳定性良好，可以在-20℃下稳定保存6个月。此外，将该标准物质作为考核样品用于21家食品承检机构的沙门氏菌定性检测能力验证，其中15家结果合格，其余6家机构因非典型沙门氏菌漏检，结果不合格。制备的鸡肉中非典型沙门氏菌标准物质可以有效用于食品承检机构的沙门氏菌检测能力评价。     

应用标准物质实现质量保证

标准物质是已确定其中一种或几种特性量值 ,用于校准测量器具 ,评价测量方法或确定材料特性量值的物质 ,是依法管理的计量器具。标准物质是现代化学计量学研究中的一个重要分支 ,也是量值传递与溯源的重要手段。当前 ,化学分析测量工作已成为最广泛、最频繁的测量。据统计 ,在美国一天约进行２ ５亿次的化学测量。因此 ,对于标准物质的研究与应用 ,日益受到世界各国专家、计量机构以及有关国际学术组织的重视。标准物质的研究与应用的国际合作 ,其深远意义在化学计量领域如同１８７５年统一计量单位 ,世界各国签订“米制公约”一样重要。标…     

联苯菊酯纯度标准物质的研制

研制了联苯菊酯纯度标准物质.采用红外光谱、质谱和熔点法对联苯菊酯纯品进行定性鉴定,并利用Dean-Switch切换、气相色谱-质谱联用方法对杂质进行定性分析,确认了8种杂质的结构.优化并建立了高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)、气相色谱-氢火焰离子化检测器(GC-FID)进行主成分定值.利用卡尔费休法、电感耦合等离子体质谱法、灼烧法等方法进行无机杂质的分析.均匀性和稳定性检验结果表明,研制的联苯菊酯纯度标准物质均匀性良好,稳定时间3年,纯度值为99.6%,扩展不确定度为0.2%(k=2).     

单增李斯特菌恒温荧光PCR检测方法的建立及应用

以单增李斯特菌的clf A基因为靶序列,针对该序列保守区,设计引物和探针,建立单增李斯特菌荧光PRA检测方法,研制单增李斯特菌荧光PCR快速检测试剂盒,并对其特异性、灵敏性、稳定性进行分析。结果表明该恒温荧光PCR方法及快速检测试剂盒特异性好、稳定性好、具有较高的灵敏度,最低可检测到0.05 pg/μL,是快速检测食源性增李斯特菌的有效方法,对我国食源性增李斯特菌的检测具有重要应用和推广价值。     

气体标准物质的研制及使用过程中应注意的问题

总结了气体标准物质的研制及使用过程中应注意的问题 ,有利于研制出精确度高的标准物质 ,并在使用过程中进行准确的量值传递。     

海水pH标准物质的研制

提出一种更适合于海水pH测量的海水pH标准物质,对小批量制备该标准物质的制备方法及其定值方法进行探索研究。采用分光光度测定法测定海水pH标准物质的pH值,对该批海水pH标准物质分别抽取一定数量的样品采用F检验法和t检验法进行了均匀性检验和稳定性考核。结果表明,该批以人工海水为介质的海水pH标准物质混合均匀,常温条件下保存六个月是稳定的。     

VOCs吸附管标准物质的研制

用装有吸附剂的吸附管采集空气样品,具有设备简单、采样稳定、重复性好等优点,近年来得到各国环境监测部门的认可和广泛应用.采用多组分挥发性有机物(VOCs)扩散管(渗透管)标准气体和不锈钢吸附管通过多组分动态配气装置和气体定量吸收系统制备标准吸附管,有很好的一致性和线性.通过对制备的标准吸附管1年多的稳定性考察表明,用该方法制备的标准吸附管,在密封条件下,年变化不大于1.5%(RSD),对我国VOCs量值的溯源具有重要意义.     

微米级固体颗粒度标准物质系列的研制

介绍了微米级玻璃微珠颗粒度标准物质系列SB040102～SB040109的研制方法,得到粒度分布范围5～95μm不同量值共8个级别的颗粒度标准物质.通过研究与验证,建立了一套符合NIST要求的、具有量值溯源性的颗粒度标准物质的定值方法;提出了颗粒度标准物质性能评价的参数与方法.数据分析表明,研制的系列粒度标准物质与国际先进的粒度标准物质相比,在球形度、粒度分布的单分散性和正态性3方面均达到了先进水平.该项技术对于纳米级颗粒度标准物质的开发与研制,同样具有借鉴意义.     

挥发性有机物气体标准物质的研制

讨论了挥发性有机物(VOCs)的分析方法和分析手段,并介绍了研制的VOCs注射重量法气体配气装置.针对目前社会上急需的氮中苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、对二甲苯、间二甲苯、苯乙烯、正己烷、乙酸丁酯、十一烷等氮中十个组分钢瓶气体标准物质进行了研制,对提高室内外空气质量检测水平起到积极作用.     

转基因水稻基体标准物质候选物真实性的鉴定技术研究

PCR技术及琼脂糖凝胶电泳技术为基础,对转基因水稻克螟稻2号和阴性受体秀水11进行真实性 鉴定。利用典型性检测、指纹图谱技术对候选物的转基因事件的真实性、转入事件正确性(是否为特异性目标外源 基因）、品系遗传背景进行鉴定,结果表明,克螟稻2号只含特异性序列CrylAb,秀水11不含所选的外源基因,它们具有相同的遗传背景。随机各抽取克螟稻2号和秀水11水稻100株,通过特异性PCR、免疫印迹实验来检测原材 料的纯度,结果表明,克螟稻2号为100%的转基因水稻,秀水11为100%的阴性受体水稻。     

大黄蒽醌类标准物质的制备与鉴定

论述了大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄素和大黄酸5种大黄蒽醌(AQs)标准物质的研究工作,详细介绍了标准物质的制备过程、鉴定方法、均匀性检验、稳定性考察以及定值测量方法.制备采用pH梯度萃取法、硅胶柱色谱法和重结晶法,鉴定采用现代波谱分析和高效薄层色谱法.定值采用高效液相色谱法,5种蒽醌的纯度均大于99.0%.采用LC-UV法对4种标准物质的均匀性和稳定性进行了考察,结果表明分装样品间无显著性差异,并且在考察的12个月内稳定.     

石油化工气体标准物质的研制

采用称量法制备了石油化工气体标准物质,分别用F检验和回归曲线法对研制的标准物质进行了均匀性和稳定性检验。结果表明,研制的石油化工气体标准物质具有良好的均匀性和稳定性,标准物质定值结果(摩尔分数)分别为甲烷1×10-2,乙烷、丙烷、正丁烷、异丁烷0.2×10-2,正戊烷、异戊烷0.1×10-2,定值结果的相对扩展不确定度为3%(k=2),该标准物质可用于石油化工产品中气体的分析及测试。     

粮食中营养成分标准物质制备技术

介绍粮食中营养成分基体标准物质的制备方法和流程,包括总的原则、成分设计、基体选择、物料采集、物料处理、成分初测、粉碎、筛分烘干过程、均匀性初检、分装、辐照灭菌、真空包装及储存。重点讨论和分析制备过程中应注意的细节以及为了保证均匀性和稳定性所采取的措施。     

氮气中一氧化氮气体标准物质的研制

叙述了氮气中一氧化氮气体标准物质的制备,以及用化学发光法对其均匀性和稳定性进行考察,确保数据准确可靠。     

腹泻性贝类毒素基体标准物质的研制

为了保证小鼠生物法、荧光衍生法、质谱法等对腹泻性贝类毒素检测结果的准确、可靠和可比,以紫贻贝为基体,采用添加法研制了一种含腹泻性贝类毒素软海绵酸(OA)的冻干粉形式的贝类毒素基体标准物质.采用LC-MS/MS法,以多家定值的方式对标准物质中的OA进行定值.均匀性检验结果表明该样品均匀,短期稳定性和6个月的稳定性考察表明样品稳定性良好.经过对影响定值结果的称样量、定容、校准物、校准曲线等因素的考察,进行不确定度评定,标准物质中OA的含量及不确定度为2.96土0.50μgOA/g(k=2).该标准物质可以用于腹泻性贝类毒素检测过程的方法验证与质量控制等.     

低浓度羰基硫气体标准物质的制备

叙述了低浓度羰基硫气体标准物质的制备方法,以火焰光度检测器气相色谱法对其稳定性、均匀性进行考察,并与同行的气体标准物质进行了比对分析,证明制备的标准气体数值准确可靠。