米曲霉Y6产中性蛋白酶和内切葡聚糖酶的研究

以提高中性蛋白酶和内切葡聚糖酶酶活为目的,优化了米曲霉Y6的制曲工艺。在单因素的试验基础上,采用正交试验优化的米曲霉Y6中性蛋白酶的最佳制曲工艺参数为温度30℃,接种量1.0×107个孢子/g干基,培养时间42h,含水量80%,其酶活达到3637U/g;内切葡聚糖酶的最佳制曲工艺参数为温度为30℃,接种量0.25×107个孢子/g干基,培养时间48h,含水量100%,其酶活达到810U/g。     

重组毕氏酵母产中性纤维素酶条件的优化

通过对6个重组毕氏酵母转化子的产酶试验,筛选出一个优良转化子。在摇瓶条件下对该重组毕氏酵母的发酵过程进行了研究,得到适宜的培养条件为:250 mL三角瓶装液量30 mL,培养基起始pH4.8,此后不加控制,接种量10%,发酵过程中每隔24h补加1%的甲醇对产酶有明显的促进作用,中性纤维素酶活力可达1 144U/mL。研究结果表明:重组毕氏酵母中性纤维素酶的适宜催化条件为:50℃、pH 6.0;Zn2+和Mg2+对该酶有激活作用,Fe2+、Fe3+和Cu2+对该酶有抑制作用。牛仔服水洗试验结果显示:重组毕氏酵母中性纤维素酶可以明显降低靛蓝对牛仔服的反染作用,其工业应用前景良好。     

米曲霉产中性蛋白酶条件的优化

以豆瓣酱中分离的米曲霉M1为出发菌株,研究了该米曲霉产蛋白酶的分布及最佳培养温度、时间、pH值等,优化了米曲霉最佳培养基的组成.结果表明,米曲霉产中性蛋白酶的能力最强.产中性蛋白酶适宜的培养条件为:麸皮∶水=1∶1 (w/w),最佳培养温度为30℃,培养时间为72h.培养基的组成为:酵母粉添加量2.0％,蛋白胨添加量0.2％,硝酸钾添加量0.1％,麦芽糖添加量0.1％,葡萄糖添加量0.1％,硫酸铵添加量2.0％.在此条件下培养,最高酶活达到12113.85U/g干基,比优化前提高22.98％.     

酶解饲料酵母生产酵母浸膏及中性蛋白酶的实验研究

本文叙述了以饲料酵线为起始原料，经中性蛋白酶酶解，离心分离出酵母浸出汗２，再真空浓缩成酵母浸膏的情况。酐母浸膏对饲料酵母收率达到６９．６６％－９２．０６％，产品质量除了氮含量稍低外，基本达到辽宁省颁发的酵母浸膏质量标准。     

产中性蛋白酶菌株发酵条件的研究

本文对一株产中性蛋白酶枯草芽孢杆菌的发酵条件进行了研究,考察不同因素条件下对产酶的影响.结果表明:该菌株发酵产酶的最适条件:碳源为2%玉米粉,氮源为1%牛肉膏,添加0.2%NaH2PO4、发酵初始pH＝6、接种量为6%、250ml三角瓶装液量为50ml.     

产中性蛋白酶种曲培养基的优化及酶学特性研究

以中性蛋白酶活力为检验指标,采用响应面法对米曲霉产中性蛋白酶的种曲培养基进行优化,确定其最佳配方组成为：面粉用量2．24g,花生粕用量8．46g,氯化钙用量0．028g,种曲中性蛋白酶活力高达15559．40U／g。经研究纯化后中性蛋白酶酶学特性,发现中性蛋白酶的最适pH为7．0,在pH5．0-7．0范围内具有良好的稳定性;最适作用温度为50℃,在40-55℃条件下能保持较高的酶活力;试验金属离子对蛋白酶没有显著的激活作用,Ba^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋和Cu^2＋具有显著的抑制作用。     

产中性蛋白酶菌株发酵条件的研究

对一株产中性蛋白酶的枯草芽孢杆菌的发酵条件进行了优化，确定其最适培养基配方为豆饼粉3％、玉米粉3％、麸皮2,5％、KH2PO4 0.05％、Na2HPO4 0．4％，最适摇瓶培养条件为种龄8h、接种量2％、装液量50mL／250mL、摇床转速180r／min、32℃培养33h，中性蛋白酶的摇瓶发酵单位最高可达4830U／mL。     

米曲霉固态发酵麻疯树籽饼产中性蛋白酶条件的研究

以实验室筛选出的米曲霉(Aspergillus oryzae)Asp-1为菌种,麻疯树籽饼为发酵主料,采用固态发酵法生产中性蛋白酶.考察了固态发酵培养基液固比、初始pH、接种量等发酵条件,以及麻疯树籽饼中添加麸皮、碳源、氮源对该菌株产酶能力的影响.经单因素和正交实验获得最佳发酵条件为:培养基液固比1:1,初始pH 6,接种量每10 g培养基含有1×108个孢子,培养基中麸皮添加量10%、葡萄糖添加量0.5%、蛋白胨添加量1%.最佳条件下发酵2 d酶活可达3 759.8 U/g.     

细胞融合重组子酵母的研究

摘要：葡萄酒酵母S．C．5与克勒克柠檬形酵母Klo 10作为亲株进行属间融合，交换重组获得重组子46510。生长繁殖快，能在22h内达3亿个／mL以上，很快进入厌氧后发酵，抑制许多需氧茵生长；在25～32℃发酵15d，絮凝快，沉积紧，澄清透明，酒体醇厚圆润，酸甜适口；并可提高酒精度2％；为酿造果酒提供了一个优良菌种。     

外加蛋白酶对酵母抽提物酶解效果的工艺研究

考察了几种外加蛋白酶对啤酒酵母的酶解效果,确定酵母抽提酶和风味蛋白酶作为最优外加蛋白酶,通过优化实验,确定两种酶最适总添加量为0.4%(以酵母干基计),酶配比为3:2(酵母抽提酶:风味蛋白酶),此时啤酒酵母的酶解效果最佳。     

米曲霉蛋白酶动力学特性的研究

研究了在不同底物浓度、温度和pH下米曲霉蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸的动力学特性。在反应时间为10min时,最佳反应温度为50℃,最佳反应pH为9。实验表明米曲霉蛋白酶水解酪蛋白生成酪氨酸的反应符合米氏方程,根据实验数据回归得到温度为40℃时的速度方程为r=0.243CS/0.0282+CS,反应速度与氢离子浓度的关系为r=lgCH++3.14013/0.19759+0.05484(lgCH++3.14013)+(lgCH++3.14013)2。该蛋白酶在50℃下的失活规律符合双指数模型,相对酶活力与时间的关系为a=0.82531e(-0.02169t)+0.17469e(-0.41914t)。在4～50℃的范围内,蛋白酶水解反应的活化能Ea为30.67kJ。还研究了不同化学组分对蛋白酶活力的影响,发现10mmol/L的H3BO3和Mg2+对该蛋白酶有一定的激活作用,而EDTA、SDS、Zn2+、Mn2+和Sn2+对蛋白酶有明显的抑制作用,10mmol/L的H2O2对该蛋白酶的抑制作用不明显。     

外加营养物对酱油种曲孢子数和成曲酶活力的影响

以提高酱油种曲孢子数和成曲酶活力为目标,在麸皮培养基的基础上,对酱油种曲培养基的外加碳源、氮源、无机盐进行优化研究。结果表明：在葡萄糖1.00%、氯化钙0.10%、硫酸锌0.05%、豆粕3.00% 的条件下孢子数可达(15.77 ± 0.49)× 109 个/g 干重,比对照组提高了84.87%。同时对优化种曲和利用该种曲制得的大曲的酶活力进行比较,表明种曲培养基的优劣对酱油发酵有重要影响,其中种曲酶活力提高25.04%,大曲酶活力提高17.40%。     

一种米曲霉耐盐蛋白酶的纯化及酶学性质分析

采用硫酸铵沉淀、Q-HP阴离子交换柱和Superdux 75凝胶柱等技术,从酱油大曲中纯化得到一种耐盐蛋白酶,经飞行时间质谱鉴定为钙蛋白酶RIM13,属于一种半胱氨酸蛋白酶。该蛋白酶的最适温度为50?℃;最适pH值为6.5;稳定温度为40?℃;稳定pH值为7.0;Mn2＋促进蛋白酶活力,Fe3＋、Fe2＋、Cu2＋、Ca2＋、K＋、Na＋抑制蛋白酶活力,以上金属离子对蛋白酶二级结构也产生不同程度的影响;米氏常数Km为2.43?g/L,最大反应速率Vm为103.09?mg/（L·min）。在5、10?g/100?mL和15?g/100?mL的NaCl质量浓度条件下,蛋白酶保留的酶活力分别为77.22%、54.39%以及41.15%。该蛋白酶在高盐度环境下保持较高的酶活力,因此具有潜在的工业应用价值。     

Xi-3米曲霉菌株的保藏与复壮

介绍了Xi-3米曲霉菌株的保藏与复壮的具体做法。采用麸皮保藏法可以使Xi-3米曲霉保藏18年之久且菌种优良性状不变；行之有效的复壮措施，提高了保藏菌株的优良性状和生产性能，为种质资源的可持续发展作出了贡献。     

米曲霉种内原生质体融合选育优良菌株

米曲霉HL和L5是来自酱油酿造企业的生产菌株。HL的生长速度快,而L5的中性蛋白酶活力高。以HL和L5为亲本,进行原生质体融合,筛选得到一株融合株R6。融合株比亲本株生长速度更快,孢子成熟时间快3h,中性蛋白酶活力分别比2株亲本菌株提高25.6%和19.9%,酱醅氨基氮值也比亲本菌株提高8%和5.6%。     

基于基因组改组的米曲霉沪酿3.042多亲株PEG介导融合育种

利用经过分生孢子的原生质体紫外线-氯化锂、NTG复合诱变得到的米曲霉沪酿3.042的8株突变株作为候选株文库,采用基因组改组(genome shuffling),利用原生质体,进行多亲株双灭活PEG介导融合,优化融合条件。以酪蛋白平板初筛,以及固体发酵测定中性蛋白酶酶活复筛,通过2轮融合操作,筛选出6株高产中性蛋白酶的融合株。其中融合菌株FII-41酶活达到7412U/g(干基),比原始出发菌株4212U/g(干基)提高1.76倍,且遗传稳定。     

应用基因组改组技术选育米曲霉酸性蛋白酶高产菌株

以产酸性蛋白酶较高的菌株Y-9及F-5为出发菌株,对它们进行基因组改组,进行原生质体双灭活,以PEG作为融合剂,并对融合条件进行优化。试验表明:融合最佳条件为PEG 50%、pH 6.0、融合处理15min,此时融合率达到12%。通过第一及第二轮的基因组改组,最终得到产酸性蛋白酶较出发菌株Y-9高出了253.37%,较F-5高出了276.25%的米曲霉菌株G11。     

米曲霉Y29制曲条件研究

优化了米曲霉Y29种曲培养基的组成及种曲的培养条件。研究发现米曲霉Y29的种曲培养基组成为m(麸皮)∶m(豆粕)=9∶1,种曲培养基的水分含量为50%,种曲培养基中的营养素确定为草木灰,添加量为0.3%;种曲的培养条件为:培养温度为30℃,培养时间为66h,接种量为1.0×107cfu/g。在此条件下培养,米曲霉Y29产中性蛋白酶活力最高可达到(12545.9±82.3)U/g,孢子数可达到(11.7±0.44)×109cfu/g。