阿片生物活性肽的基因设计、化学合成及克隆

在阿片类生物活性短肽的结构和生理特点基础之上，通过重复叠加的方法设计了此类生物活性肽基因．借助Primer软件，设计了3条引物；并通过引物延伸和PCR等步骤，实现了基因的人工合成并克隆至表达载体pPIC9K．PCR及酶切鉴定后测序，表明所合成基因已成功克隆。     

一种新型的Tet-off慢病毒调控系统的构建及其调控作用

四环素调控的真核表达系统是真核细胞诱导表达系统的重要组成部分.当前大多数研究者采用双质粒四环素表达调控系统调控外源基因的表达.由于,双质粒四环素表达调控系统的基因表达调控严格依赖于两个单载体同时感染同一个细胞,因而限制其在体内实验中的效率.为解决该问题,研究构建了由慢病毒载体构成的单质粒四环素表达调控系统-pLV300(Tet-off).构建的载体经酶切鉴定及测序均正确.通过荧光观察及RT-PCR实验结果显示,该单质粒四环素调控的慢病毒载体体外可以高效地转移并且维持目的基因的表达,其表达调控效应高、无明显毒副作用,且调控严密.该表达调控系统为慢病毒的临床应用奠定了一定基础.     

牛γ-干扰素基因在大肠杆菌中的克隆

根据牛γ干扰素(bovIFN γ)基因的cDNA序列设计了一对引物。应用一步法逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)技术,从奶牛脾脏淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段,将RT PCR产物克隆到pMD18 T载体中,经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的bovIFN γ基因序列正确。将该基因片段切下并克隆到大肠杆菌表达载体pGEX 4T 1中,将pGEX 4T 1/bovIFN γ转化到大肠杆菌中DH5α中。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆、高效表达与鉴定

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)VR2332株ORF7的全长基因序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR扩增出完整的ORF7基因,并将PCR产物克隆至pMD-18T载体进行测序分析.双酶切测序后重组质粒pMD-18T-N得到目的片段连接至原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-N....     

高分子载体在药物控释体系中的应用

近年来,高分子材料在新药开发领域发挥着日益重要的作用。概述了高分子在药物控释体系中的应用以及高分子载体药物的特点、合成原则、分类等,重点介绍了目前研究比较热门的可生物降解高分子载体、高分子纳米药物载体和高分子基因载体。     

基因测序技术发展及生物医学应用

基因测序技术在分子生物学和基础医学领域应用广泛,已经从第一代发展到第四代:第一代测序技术测序精确,是常用的单基因病诊断技术,但通量较低,成本高;第二代测序技术测序通量提高,在临床上发挥重要作用;第三代测序技术在测序通量、时间和成本方面都有极大改善;第四代测序技术还在实验阶段。本文主要介绍了第一代、第二代和第三代测序技术的优缺点和在生物医学领域的应用,第四代测序技术的研究进展。     

牛γ-干扰素基因在大肠杆菌中的克隆

根据牛γ-干扰素(bouIFN-γ)基因的cDNA序列设计了一对引物。应用一步法逆转录．聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，从奶牛脾脏淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段，将RT—PCR产物克隆到pMD18-T载体中，经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的bovIFN-γ基因序列正确。将该基因片段切下并克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1中，将pGEX-4T-1／bouIFN-γ转化到大肠杆菌中DH5a中。     

人APOBEC3G基因克隆、表达、纯化及多克隆抗体制备

为了获得人APOBEC3G蛋白及其多克隆抗体,从H9细胞中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术获得人APOBEC3G基因.将测序鉴定过的APOBEC3G基因克隆到原核表达载体pET-32a上,以包涵体的形式在E.coli BL21(DE3)中高效表达,由于APOBEC3G蛋白C端融合了6×His标签,有助于对蛋白的纯化及鉴定.应用酶切技术、SDS-PAGE及Western Blot等方法确保基因片段的正确性和蛋白的特异性.纯化后的APOBEC3G蛋白用来免疫日本大耳白兔,用间接ELISA法测定兔多克隆抗体滴度,获得了纯度超过80%的APOBEC3G融合蛋白,抗APOBEC3G多克隆抗体滴度高达1:102 400.     

人参皂甙β—糖苷酶的基因结构

为了研究人参皂甙β-糖苷酶的基因结构,根据人参皂甙β-糖苷酶的氨基酸N-末端序列设计了RT-PCR引物,应用氯化铯密度梯度离心法提取了菌体总RNA,以JFA01为模板进行RT-PCR反应得到一条1.0kb的基因,并对该基因进行了克隆测序,该测序结果与已知蛋白的基因无同源性,说明所得到的人参皂甙β-糖苷酶的基因很有可能是新的基因。     

云南不同富营养化程度湖泊中产毒蓝藻藻毒素基因多样性研究

有毒蓝藻水华的形成及蓝藻毒素的产生会严重危害水生态安全,并影响人类生产生活,因而成为备受关注的重大环境问题之一.为探究云南不同富营养化程度湖泊中产毒蓝藻产毒基因的多样性,在2019年至2020年丰水期、平水期和枯水期,采集富营养化的星云湖、贫营养化的抚仙湖水体和沉积物样本,运用常规PCR技术对产毒蓝藻特有的微囊藻毒素合成酶基因mcyA、鱼腥藻毒素合成酶基因anaC和麻痹性贝类毒素合成酶基因sxtA进行扩增测序和系统进化分析.基因检测结果表明,来自两个不同富营养化程度湖泊的水体样品中均发现有mcyA、anaC和sxtA基因,而对于沉积物的检测却仅在来自于富营养化的星云湖样品中发现mcyA基因.通过对目的基因测序并构建系统进化树进行多样性分析发现,两个不同富营养化程度湖泊中的mcyA基因来源较为单一,主要由微囊藻属藻类产生,而sxtA基因来源较广,主要由鱼腥藻属、束丝藻属、长孢藻属产生.另外,anaC基因在抚仙湖中主要由颤藻属产生,而在星云湖中则主要由颤藻属和束丝藻属产生.     

新型基因枪微弹材料可行性初步研究-Ⅱ

基因枪在未来临床基因转导中很有前途,但目前所用微弹材料金、钨都属于重金属,其长期存在于人体的安全性尚无法估计,曾提出用羟基磷灰石(HAP)微粒来代替金或钨微粒。报告了两种HAP微粒的制备以及它们对DNA的负载及其影响因素研究的结果,以期对HAP在基因枪中的应用研究奠定基础。用化学沉淀法和热处理研磨法制备HAP微粒,调节pH负载DNA后,用红外光谱、同步热分析仪、透射电镜等方法表征负载。结果表明,可在一定条件下实现HAP对DNA的高效负载。     

结核分枝杆菌融合抗原Ag85B-ESAT6真核表达载体的构建及鉴定

以结核分枝杆菌H37Rv株的基因组作为模板,将Ag85B和ESAT6编码基因进行PCR扩增,然后采用基因剪接重叠扩增PCR法(gene SOEing)将其通过疏水甘氨酸接头(GGIGIAPG)连接融合,定向克隆至质粒Pvax1中,构建结核分枝杆菌Ag85B-ESAT6融合抗原的真核表达质粒Pvax1/AE.经单双限制性内切酶图谱、PCR产物及DNA测序分析等多种方法鉴定,证实Pvax1/AE真核表达质粒构建成功.为进一步研究其结核核酸疫苗原型的免疫保护效果奠定了基础.     

基于植物p53保守序列构建RNAi的DNA片段方法

构建p53基因RNA干涉DNA片段的目的,是将其应用于植物悬浮培养中的细胞周期调节．依据拟南芥p53基因与其他高等植物具有高度保守区域的特点,合成其两个区域的核苷酸片段（Ⅰ和Ⅱ）及其相应的反向片段（Ⅰ＇和Ⅱ＇）,并在Ⅱ和Ⅱ＇端部分别引入内含子两个端部核苷酸序列．在相互连接后进行PCR选择扩增,其产物再与克隆裁体连接并经过蓝白斑筛选获得重组DNA;在电泳和核苷酸测序鉴定后表明,最终得到了Ⅰ-5＇-内含子-Ⅱ＇-Ⅱ-内含子-3＇-Ⅰ＇序列的重组DNA片段该片段两端含多克隆位点,通过插入植物的表达载体进入细胞基因组,在细胞中其转录产物将形成发夹结构,经胞内酶切后可以形成短的双链RNA片段,将具有干涉p53基因表达的功能     

碳酸钙微球合成、修饰及作为基因载体的研究

采用聚苯乙烯磺酸钠（PSS）作为调控剂,将其加入到氯化钙和碳酸钠溶液反应体系中成功制备出表面粗糙的碳酸钙微球（粒径平均约为510nm）,采用场发射扫描电镜（FE-SEM）、红外光谱（FTIR）、X-射线衍射（XRD）和动态光散射（DLS）等对碳酸钙微球颗粒进行表征。MTT实验显示碳酸钙微球毒性具有浓度依赖性,在终浓度〈1mg/mL时,细胞存活率都可达60%以上,显示出很低的细胞毒性,具有良好的生物相容性。不同pH值条件下碳酸钙微球的降解实验结果显示碳酸钙微球在酸性pH下能够更快速地降解,说明碳酸钙微球能够响应酸性pH值,具有pH依赖性。将碳酸钙微球经PEI表面修饰后用于负载质粒DNA,通过琼脂糖凝胶电泳及体外转染实验结果证实碳酸钙微球能够有效负载质粒DNA,并可在癌细胞内成功表达发出绿色荧光。这些研究结果显示将碳酸钙微球作为一种安全的非病毒基因载体用于基因治疗领域具有潜在的应用价值。     

新型基因枪微弹材料可行性初步研究-Ⅰ

基因枪在未来临床基因转导中很有前途,但目前所用微弹材料金、钨都属于重金属,其长期存在于人体的安全性尚无法估计。提出用羟基磷灰石(HAP)微粒来代替金或钨微粒,从理论上推导了这种取代的可行性,并报告了一种HAP微粒的制备及其负载DNA的研究结果。理论推导完全按照物理学方法进行。实验部分的方法:将稳定剂H以一定速度和比例滴入一定浓度的Ca(H2PO4)2溶液中,再按照一定的速度和比例滴入Ca(OH)2饱和溶液,期间或完成后超声处理一定时间,将所得HAP微粒溶液与亚精胺和DNA以一定比例和浓度在一定pH条件下混合。结论:所得HAP粒径值符合要求,并且能够高效负载DNA。     

机械产品基因研究综述

通过对产品基因文献的综合分析，对产品基因理论研究和应用研究进行了分析总结，将产品基因的应用领域进一步细分为概念设计、结构设计、制造系统、变型设计和进化设计。最后展望了产品基因研究的方向．     

杂交型DNA电化学生物传感器研究进展

杂交型DNA电化学生物传感器是一类利用核酸互补配对杂交原理检测和分析特定DNA序列的电化学生物传感器。由于其具有快速简便、选择性好、灵敏度高等优点,在临床医学、遗传工程、环境检测、食品安全监测和生物科学等领域有着重要的应用价值。简述了杂交型DNA电化学生物传感器的一般原理,对共价键结合法、自组装法、生物素-亲和索法、电聚合法以及吸附法等单链DNA的固定方法和DNA杂交信号的直接和间接电化学转换机制的近期研究进展进行了深入探讨,并对其在医疗检测和转基因植物检测等基因检测方面的最新应用和发展趋势进行了论述。     

HPV16 L1基因的PCR扩增、纯化和酶切鉴定

用重组DNA技术获取人乳头瘤病毒(HPV)16型晚期基因L1.以提取的宫颈癌细胞株Caski细胞总DNA为模板,设计一对L1基因特异引物,用PCR方法扩增HPV16 L1重组基因,用柱层析技术纯化和酶切初步鉴定HPV16 L1重组基因.该方法不仅可以扩增出HPV16 L1重组基因,用层析技术纯化HPV16 L1重组基因,还能通过酶切鉴定PCR产物HPV16 L1全长基因,为HPV感染的检测诊断和宫颈癌疫苗的制备奠定基础.     

Isolation and characterization of acidophilic bacterium from Dongxiangshan Mine in Xinjiang Province, China

One bioleaching bacterium, named as strain DXS, was isolated from acid mine drainages (AMDs) of Dongxiangshan Mine of Hami, Xinjiang Province, China. The strain DXS is gram-negative and rod-shaped with a size of (0.40±0.05) μm×(1.3±0.5) μm. The optimal temperature and pH for growth are 30 ℃ and pH 2.0, respectively. It can grow autotrophically by using ferrous iron, elemental sulfur and NaS2O3 as sole energy sources. In the phylogenetic tree, strain DXS has similarity with Acidithiobacillus ferrooxidans typ...