熊猫豆提取物抑制肿瘤活性及诱导结肠癌细胞Caco-2凋亡机制研究

为了探究熊猫豆的抑制肿瘤活性及其诱导Caco-2凋亡的机制,采用80%丙酮浸提法制备熊猫豆粗提物,通过MTT法测定其对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制效果,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、酶联免疫分析等技术与方法检测细胞周期、DNA及凋亡相关蛋白相对表达量的变化。结果发现,与空白对照组相比,0.1~1.0 mg/m L熊猫豆丙酮提取物对Caco-2细胞增殖有明显的抑制作用,且呈现剂量效应关系,IC50为0.72 mg/m L。0.4、0.6、0.8 mg/m L熊猫豆丙酮提取物处理72 h后的Caco-2细胞,可以观察到典型的凋亡细胞的梯状DNA条带,细胞周期G1期延长,Cyt C、caspase-9、caspase-3蛋白的相对表达量均有显著上升。熊猫豆丙酮能够抑制结肠癌细胞Caco-2增殖,这种抑制作用是通过阻滞细胞周期和诱导线粒体通路介导的细胞凋亡实现的。     

鼓槌石斛毛兰素诱导人结肠癌Caco-2细胞凋亡

目的:研究毛兰素对人结肠癌Caco-2细胞增殖的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:采用SRB法检测毛兰素对Caco-2细胞增殖的抑制作用,用Hoechst33342染色法观察细胞的形态学改变,流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达水平。结果:与对照相比,毛兰素能抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖,且抑制率随着药物浓度与时间增加,呈剂量时间效应,48 h半数抑制浓度IC50为0.845μg/m L;毛兰素能诱导Caco-2细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G₂期;Caspase-3活性裂解片段表达增高。结论:毛兰素对肿瘤细胞的增殖具有一定抑制作用且通过线粒体途径诱导Caco-2细胞凋亡。      

草苁蓉提取物抑制肺癌细胞增殖分子机制的研究

草苁蓉提取物可通过促进肿瘤细胞凋亡抑制A549肺癌细胞增殖。继续探讨草苁蓉提取物(BRE)抑制肺癌细胞增殖的分子机制。采用流式细胞术检测A549细胞周期分布和细胞凋亡,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白Bax、Bc1-2、P53和Fas蛋白的表达,ELISA法检测sFAS蛋白的表达。结果表明,BRE改变肺癌细胞周期分布,使多数细胞阻滞于G0/G1期。同时,BRE诱导肺癌细胞凋亡,明显增加Fas表达,增加Bax表达和降低Bc1-2表达,但不改变P53表达以及sFas蛋白水平。提示,BRE抗肺癌细胞增殖作用与其改变细胞周期分布、增高Fas表达和降低Bcl-2/Bax比值而诱导肺癌细胞凋亡相关。     

东海海参性腺丙酮提取物的体外功能活性分析

为研究东海海参性腺丙酮提取物(Am-GE)的功能活性,该文采用MTT法检测了Am-GE对HepG2和Caco-2细胞增殖的影响,分析了Am-GE对HepG2细胞凋亡和周期的影响,利用Gimsa染色法检测了Am-GE对Caco-2细胞成瘤能力的影响,并利用实时荧光定量PCR方法检测Am-GE对小鼠巨噬细胞炎症状因子基因mRNA表达水平的影响。结果显示,Am-GE能显著抑制HepG2和Caco-2细胞的增殖作用,促进HepG2细胞的凋亡和增加G2期细胞比率,减弱Caco-2细胞的成瘤能力;同时Am-GE能显著抑制RAW264. 7细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS基因转录水平的相对表达量。东海海参性腺丙酮提取物具有较好的抗肿瘤和抗炎症作用。     

二氢杨梅素对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用

本研究旨在探讨二氢杨梅素对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用及其机制。采用MTT法检测不同浓度的二氢杨梅素溶液对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用;采用倒置显微镜、Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞术检测不同浓度的二氢杨梅素溶液对骨肉瘤细胞形态、凋亡和周期的影响;并进一步采用Western Blot法分析细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达的影响。研究结果表明二氢杨梅素对骨肉瘤细胞增殖具有显著的抑制作用,细胞形态发生了明显变化,呈显著的剂量依赖型,其半数抑制浓度（IC50）值为24.41±1.25 μM。细胞周期实验结果表明,经二氢杨梅素处理后,G0/G1期细胞数百分比从60.20%下降到21.50%,而G2/M细胞数百分比从11.60%增加到45.30%,细胞周期蛋白Cyclin B1表达下降引起细胞周期阻滞;此外,抗凋亡蛋白Bcl-2表达和促凋亡蛋白Bax表达的比例显著下降,从而诱导细胞发生凋亡。结果表明二氢杨梅素具有显著的抗骨肉瘤增殖活性,可开发一种潜在的治疗骨肉瘤的功能食品或药物。     

槟榔多糖对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

采用CCK-8法测定细胞的存活率、Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率,利用蛋白质免疫印迹检测人结直肠腺癌细胞(Caco-2细胞)中抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax及细胞间紧密连接蛋白的表达情况,研究槟榔多糖对DMNQ诱发Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果表明：槟榔多糖能显著抑制促凋亡蛋白Bax的表达并同时促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制DMNQ引起的细胞凋亡并减轻内质网应激,显著上调Caco-2细胞紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin 1的表达,维持细胞紧密连接的完整性,即槟榔多糖能显著改善DMNQ诱导的Caco-2细胞氧化损伤。     

夏枯草提取物对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察夏枯草提取物对人食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响,探讨夏枯草抗肿瘤作用及机制。方法：不同浓度夏枯草作用于食管癌Eca-109细胞,利用MTr法检测细胞增殖抑制率,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;Annexin—V—FITC／PI法检测细胞凋亡率。结果：中高剂量夏枯草抑制食管癌Eca-109细胞增殖,并呈量效和时效关系;使细胞凋亡率增高,同时Bcl-2蛋白减少,Bax蛋白表达增加。结论：夏枯草提取物可抑制食管癌Eca-109细胞增殖,使Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加,细胞凋亡增加。     

槐花醇提取物促进肝癌大鼠的细胞凋亡

探究槐花醇提取物对肝癌大鼠细胞凋亡的干预效果及作用机制。选取50只SD大鼠,10只为正常组,其余40只建立有肝癌(分为模型组、药物对照组、低、高浓度干预组)。观察各组大鼠细胞周期分布及增殖、凋亡情况,并检测各组大鼠PTEN、p-Akt、m TOR及Bcl-2、PI3K、Akt表达。研究结果显示,高浓度组大鼠癌组织处于G1期细胞比例、凋亡率、PTEN相对表达量分别为54.72%、45.34%、0.73,均高于模型组、药物对照组、低浓度组(p<0.05);增殖率、p-Akt、m TOR、Bcl-2、PI3K、Akt相对表达量分别为13.33%、1.33、1.34、1.31、1.32、1.35,均低于模型组、药物对照组、低浓度组(p<0.05)。在槐花醇提取物的干预下,肝癌大鼠癌组织细胞增殖、凋亡能力及周期分布受到明显调控,PTEN、p-Akt、m TOR及Bcl-2、PI3K、Akt表达受到明显的调控,说明槐花醇提取物能够阻滞肝癌组织细胞周期分布,抑制肝组织细胞增殖,促进肝癌组织细胞凋亡,其能力呈现浓度依赖,为肝癌症状的临床治疗提供一定参考价值。     

金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱导人结肠癌 HT-29 细胞凋亡

目的:研究金钗石斛脂溶性生物碱提取物对人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:MTT法检测金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29细胞存活率的影响,Hoechst33342染色法观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测胞内活性氧水平、线粒体膜电位、细胞周期和细胞凋亡率变化;蛋白免疫印迹检法测蛋白Caspase-3,9和胞内细胞色素C的表达。结果:金钗石斛脂溶性生物碱提取物能降低HT-29结肠癌细胞存活率,呈剂量和时间效应,48 h半数抑制浓度(IC50)为0.72 mg/m L;金钗石斛脂溶性生物碱提取物能诱导HT-29细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G2期;金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱使线粒体膜电位降低,胞内活性氧浓度升高;激活型Caspase-9,3与胞内细胞色素C表达水平增高。结论:金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29结肠癌细胞的生长具有抑制作用并诱导细胞凋亡,其可能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。     

金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱导人结肠癌 HT-29 细胞凋亡

目的:研究金钗石斛脂溶性生物碱提取物对人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:MTT法检测金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29细胞存活率的影响,Hoechst33342染色法观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测胞内活性氧水平、线粒体膜电位、细胞周期和细胞凋亡率变化;蛋白免疫印迹检法测蛋白Caspase-3,9和胞内细胞色素C的表达。结果:金钗石斛脂溶性生物碱提取物能降低HT-29结肠癌细胞存活率,呈剂量和时间效应,48 h半数抑制浓度（IC50）为0.72 mg/m L;金钗石斛脂溶性生物碱提取物能诱导HT-29细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G2期;金钗石斛脂溶性生物碱提取物诱使线粒体膜电位降低,胞内活性氧浓度升高;激活型Caspase-9,3与胞内细胞色素C表达水平增高。结论:金钗石斛脂溶性生物碱提取物对HT-29结肠癌细胞的生长具有抑制作用并诱导细胞凋亡,其可能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。      

石参提取物诱导MKN45细胞凋亡的初步研究

通过石参提取物作用于人胃癌MKN-45细胞,检测其对细胞活性的影响并探讨其作用机制。利用MTT法检测石参提取物对细胞活性的影响;采用AO/EB双荧光染色检测石参提取物对细胞形态的影响;使用JC-1荧光探针检测线粒体膜电位变化;利用Western blot检测石参提取物对细胞凋亡内源性通路的信号蛋白表达。结果表明浓度为20、30mg/mL的石参提取物能够抑制MKN-45细胞的活性,使细胞形态发生改变;10、20、30mg/mL的石参提取物可引起细胞线粒体膜电位下降,并引起Bcl-2的表达量下降,Bax、细胞色素c和caspase-3的表达量增加,PARP被剪切。提示石参提取物可通过线粒体途径诱导MKN-45细胞凋亡。      

鲟鱼硫酸软骨素对结直肠癌细胞抑制作用

探究鲟鱼硫酸软骨素对结直肠癌细胞的生长抑制能力,并初步确定影响结直肠癌细胞生长的主要原因。选取3株具有代表性的结直肠癌细胞Caco-2、HCT-116、SW480,采用CCK-8法测定细胞生长曲线、硫酸软骨素对癌细胞增殖的抑制能力;以其中一株结直肠癌细胞HCT-116为模型,用流式细胞仪测定其周期和凋亡情况,用细胞核染色法观察处理前后细胞形态,结合caspase-3凋亡酶活力的测定,考察鲟鱼硫酸软骨素对结直肠癌细胞的促凋亡能力,并初步确定作用途径。研究结果表明,鲟鱼硫酸软骨素对结直肠癌细胞Caco-2、HCT-116、SW480的增殖具有一定抑制作用,最高抑制率分别为70.94%、90.00%和75.00%,明显高于阳性对照处理组;处理后,细胞周期G1/G0期比例升高至88.56%,S期比例降低至4.47%,阻滞细胞G1/G0期;同时,使用鲟鱼硫酸软骨素处理细胞后,细胞形态发生变化,出现细胞核固缩以及细胞破碎等现象,细胞主要的凋亡酶活力显著升高,酶活力可达1 645 IU/μg,使细胞发生凋亡,凋亡率可达63.73%。研究结果证明,鲟鱼硫酸软骨素具有促进结直肠癌细胞凋亡、抑制细胞增殖的能力。     

酒糟粗提物对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用

为了解酒糟粗提物对人体肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡的影响,首先采用液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）分析酒糟粗提物成分,再利用不同浓度的酒糟提取物分别处理HepG2细胞,采用RTCA检测其对HepG2细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测其对HepG2细胞周期的影响,采用实时荧光定量PCR检测其对CyclinA、CDK2、Bax、Bcl-2基因表达的影响,采用Western Blot检测其对9种凋亡相关蛋白表达量的影响。研究发现浓香型白酒酒糟粗提物主要含有43种物质,酒糟粗提物可明显抑制HepG2细胞的增殖且呈浓度依赖;酒糟粗提物可以显著下调S期相关周期蛋白CyclinA及其激酶CDK2的mRNA及蛋白的表达,同时使抗凋亡蛋白Bcl-2的mRNA及蛋白的表达减少,促凋亡蛋白Bax的mRNA及蛋白的表达增加（P<0.05）;CYTC、Cleaved-Caspase-9及Cleaved-Caspase-3表达量逐渐升高（P<0.05）,Caspase-9、Caspase-3表达量逐渐降低（P<0.05）。结果表明酒糟粗提物含多种活性物质,可抑制HepG2细胞的增殖,并通过激活介导凋亡的线粒体通路诱导肝癌HepG2细胞发生凋亡。     

6-姜烯酚诱导人结肠癌细胞HT29凋亡及与VEGFR2表达变化的关系

本文通过研究不同浓度6-姜烯酚诱导结肠癌细胞HT 29凋亡及与VEGFR2(血管内皮细胞受体2)不同表达之间的关系,以探讨其可能的抑制结直肠肿瘤相关机制。通过应用不同浓度6-姜烯酚(0、10、20和40μM)分别对体外细胞实验培养的HT29细胞株进行诱导处理24 h,相差倒置荧光显微镜观察细胞形态变化,CCK8(Cell Counting Kit-8)法测定药物诱导后细胞抑制率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度药物干预后细胞凋亡率及凋亡周期变化,最后用Western-blot检测分析VEGFR2蛋白不同表达变化。结果显示,与对照组相比,6-姜烯酚可呈浓度依赖性地诱导HT29凋亡,并使细胞周期G0/G1期细胞数由49.48%下降到24.39%和17.18%,而G2/M期细胞数由3.44%增加到34.78%和49.54%,进而将细胞周期阻滞在G2/M期,抑制细胞增殖,而且还不同程度地抑制了VEGFR2表达(p0.05)。结果表明,6-姜烯酚主要是通过诱导HT29凋亡进而起到抑制肿瘤细胞增殖的作用,这可能与不同程度抑制VEGFR2有关。     

银条水苏糖抑制人结肠癌Caco-2细胞增殖的作用及机制

研究中国传统蔬菜银条中所含天然活性成分——银条水苏糖对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制作用及其可能机制。采用无血清培养基培养Caco-2细胞,分析银条水苏糖对Caco-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术考察银条水苏糖对Caco-2细胞凋亡的影响,通过检测LDH释放率分析细胞损伤程度。结果表明:银条水苏糖对Caco-2细胞株具有生长抑制作用,且存在剂量和时间依赖关系,Annexin-V-PI双染的结果提示,Caco-2细胞凋亡率随着银条水苏糖浓度的升高而上升,同时比较各试验组Caco-2细胞LDH释放率,发现银条水苏糖抑制了Caco-2细胞还原丙酮酸为乳酸的能力,限制了Caco-2细胞能量通路,影响了细胞周期,进而导致细胞凋亡,说明抑制细胞能量通路,"饿死细胞"可能是银条水苏糖抗肿瘤作用的机理之一。     

代代花总黄酮对3T3-L1细胞增殖活性的影响

本文研究了代代花总黄酮抑制3T3-L1细胞增殖及诱导其凋亡的作用。不同浓度的代代花总黄酮作用于3T3-L1细胞24 h之后,采用MTT法检测代代花总黄酮对细胞增殖的抑制作用;使用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;Annexin V-EGFP/PI标记检测细胞凋亡率;PI标记法检测了代代花总黄酮对细胞周期的影响;活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平;荧光定量PCR检测了凋亡相关基因的m RNA水平表达。结果表明,高浓度(300μg/m L和400μg/m L)的代代花总黄酮可显著抑制3T3-L1细胞增殖,细胞的抑制率分别为38%和63%,且细胞形态发生了明显变化,并显著升高了细胞内ROS浓度。细胞凋亡实验结果显示,代代花总黄酮可诱导3T3-L1细胞早期凋亡和晚期凋亡,100μg/m L、200μg/m L和300μg/m L代代花总黄酮处理组的细胞早期凋亡率分别为4.6%、15.7%和22.5%;晚期凋亡率分别为14.4%、8.3%和32.2%。而细胞周期实验则表明,处理后3T3-L1细胞G0/G1期细胞数比例从58.9%下降到51.4%,而相应的S期细胞数比例呈小幅度增加,G2/M期细胞数比例变化不明显。凋亡相关基因p21及p53的m RNA表达明显升高及促凋亡基因bax与抗凋亡基因bcl-2比例的升高使3T3-L1进入细胞凋亡程序。     

仙人掌多糖对卵巢癌大鼠癌组织细胞凋亡的干预作用

为探讨仙人掌多糖对卵巢癌大鼠癌组织细胞凋亡的干预作用,选取了50只SD健康雌性大鼠,其中10只作为正常组,其余40只建立卵巢癌模型并分为模型组和低、中、高浓度仙人掌组,对各组大鼠分别进行干预,观察各组大鼠癌组织细胞凋亡以及细胞周期分布情况,并对Bcl-2、PI3K、Akt、PTEN、p-Akt、mTOR蛋白表达进行检测。研究结果表明,高浓度仙人掌组肿瘤体积、重量分别为(179.63±51.82)V/mm~3、(0.30±0.05)W/g,低于其他各组;高浓度仙人掌组细胞凋亡率及G1期细胞比例分别为19.22%、62.33%,高于其他各组;高浓度仙人掌组大鼠Bcl-2、PI3K、Akt、p-Akt、mTOR相对表达量分别为1.37、1.45、1.40、1.35、1.39,均低于模型组及低、中浓度仙人掌组;PTEN相对表达量为0.76±0.05,显著高于模型组及低、中浓度仙人掌组(p0.05)。在仙人掌多糖的干预下,卵巢癌大鼠癌组织细胞凋亡率上升,细胞周期受到阻滞,凋亡相关蛋白Bcl-2、PI3K、Akt及周期蛋白PTEN、p-Akt、mTOR表达受到调控,其能力呈现浓度依赖,为卵巢癌的临床治疗提供一定的理论帮助。     

西兰花芽提取物体外抗肿瘤活性及作用机制研究

西兰花芽是多种生物活性成分的良好来源,营养价值极高,近年来被广泛研究。该文对西兰花芽提取物的抗肿瘤活性及其潜在机制进行探讨。通过观察细胞形态学变化,发现西兰花芽提取物可使结肠癌Caco-2细胞和肝癌HepG2细胞密度下降,且细胞出现凋亡状态。细胞增殖抑制率结果表明西兰花芽提取物能够抑制两种肿瘤细胞增殖,且呈剂量依赖性,CaCl2组对 Caco-2和 HepG2细胞半数抑制浓度分别为（0.030±0.002）、（0.043±0.004）mg/mL。通过流式细胞术检测凋亡率,发现西兰花芽提取物可使细胞凋亡比例达到82.95%。活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平和线粒体膜电位检测结果表明,西兰花芽提取物可能通过诱导细胞产生ROS,降低线粒体膜电势,促进细胞凋亡,从而抑制Caco-2细胞增殖。     

芹菜素对人脑胶质瘤细胞凋亡作用的研究

本文主要研究芹菜素对人脑胶质瘤细胞U87凋亡的影响及机制。方法:应用CCK8法检测细胞增殖抑制率。流式细胞术检测细胞周期。Western-blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果:(1)芹菜素能抑制胶质瘤细胞U87的增殖。(2)不同浓度的芹菜素作用24h,G2期细胞所占比例呈下降趋势。(3)芹菜素处理组的细胞,Bcl-2蛋白的表达量随着芹菜素浓度的增加而降低,Bax蛋白的表达量则随芹菜素浓度的增加而升高。     

金莲花总黄酮诱导人HT-29结肠癌细胞凋亡机制的研究

本文研究了金莲花总黄酮乙醇提取物(TFETC)诱导人HT-29结肠癌细胞凋亡的作用机制。MTT法测定TFETC对HT-29细胞增殖的影响,200μg/mL浓度TFETC对癌细胞的抑制率达到81%。通过4,6-diamidino-2-phenylindole(DAPI)法和流式细胞术检测到金莲花总黄酮乙醇提取物可以诱导癌细胞凋亡,200μg/mL浓度TFETC处理的癌细胞通过显微镜观察出现凋亡,亚G1期DNA含量达到28.9%。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定TFETC对HT-29细胞内Bcl-2,Bcl-xL,Bax,caspase-9,caspase-3和COX-2等基因表达的影响。TFETC在mRNA水准上下调抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xL,上调促凋亡基因Bax,caspase-9和caspase-3的表达。此外,TFETC还可抑制HT-29细胞内COX-2基因的表达,并呈剂量效应关系。本研究结果显示金莲花总黄酮乙醇提取物可以通过内源性线粒体途径诱导人HT-29结肠癌细胞的凋亡,同时金莲花总黄酮乙醇提取物还可通过下调COX-2基因的表达抑制HT-29细胞的增殖。