双水相萃取长鱼蛋白酶的工艺研究

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系以分离纯化长鱼蛋白酶。通过研究不同成相盐及其浓度、不同PEG分子量及其浓度和不同p H对双水相萃取长鱼蛋白酶的影响。结果表明,最优化的双水相体系为25%PEG1000、20%(NH4)2SO4和p H7.0,在此条件下长鱼蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为90.5%和4.40。     

双水相萃取分离米曲霉中性蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系萃取分离米曲霉中性蛋白酶。探讨了不同成相盐及其浓度、成相聚合物PEG及其浓度、pH和NaCl浓度对中性蛋白酶萃取的影响。结果表明,适宜的双水相萃取体系为20%PEG1000/25%(NH4)2SO4(m/m)、pH8.0、不添加NaCl,此条件下中性蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为99.88%和2.32。     

生姜蛋白酶的双水相法萃取研究

以生姜为原料,研究双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件。利用单因素试验与正交试验进行优化,得到最佳萃取方案为PEG分子量为4000,PEG浓度为20%,缓冲盐pH为6.5,缓冲盐浓度为10%。此双水相体系的上相酶活回收和纯化倍数都是最高,分别达279.05%和1.86。     

双水相体系萃取分离鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶

采用聚乙二醇(PEG)/磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)双水相萃取技术对鲍鱼内脏中的β-葡萄糖苷酶进行萃取分离。分别考察PEG分子量、PEG、NaH₂PO₄的质量分数、双水相体系的pH、样品加入量及超声波辅助方法对下相总酶活、纯化倍数及萃取率的影响,并通过单因素实验及正交实验进行优化。结果表明:室温下12% PEG4000+15% NaH₂PO₄双水相组成对粗酶液有最佳萃取效果,目标酶富集于下(盐)相,酶活为1.45 U,萃取率为0.991,分配系数为104,纯化倍数为4.4;该体系自然状态下的pH萃取效果最佳,最大处理量为体系总质量的20%,体系所有组分混匀后超声波180 W处理5 min辅助处理,能略微提高萃取效果。     

响应面分析法优化麦麸酯酶双水相萃取的条件

研究采用聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取麦麸酯酶,通过单因素实验考察不同PEG分子量、PEG浓度、无机盐种类、无机盐浓度、pH和离子强度对麦麸酯酶总蛋白分配系数、酶活回收率、纯化倍数的影响,并通过响应面分析法优化了萃取条件。结果表明最佳萃取条件为:PEG1000质量浓度为21%、(NH4)2SO4质量浓度为18%、pH4.4。回归方程预测双水相萃取纯化倍数可达到2.9208,三次验证实验的平均纯化倍数为2.9190,与预测值相对误差为0.06%。     

双水相萃取法分离纯化α-淀粉酶的研究

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双水相体系,对双水相萃取法分离纯化α-淀粉酶进行了研究,探讨了PEG分子量、PEG浓度和(NH4)2SO4浓度对α-淀粉酶的分配系数、酶活回收率和相体积比的影响。实验表明,由PEG40021%～22%(W/W)和(NH4)2SO414%～17%(W/W)所组成的双水相体系,在室温下对α-淀粉酶的酶活回收率可达94.84%,分配系数可达17.10。     

双水相法萃取生姜蛋白酶体系的建立

以生姜为原料,研究了采用双水相萃取技术分离提取生姜中生姜蛋白酶的提取条件,利用单因素试验与正交试验进行优化,优化得到的萃取方案为:PEG分子质量为4 000 u,PEG浓度为30%,选择盐种类为(NH4)2SO4,浓度为10%,体系pH为8.0。此双水相体系的生姜蛋白酶上相酶活力回收和纯化倍数都最高,分别可达393.77%和1.85。     

无花果蛋白酶在双水相体系中分配行为

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的新型、廉价酶纯化方法。为了扩展该方法应用领域,对PEG(polyethylene glycol)/(NH4)2SO4 双水相体系萃取无花果叶中无花果蛋白酶的实验条件进行研究,考察PEG 相对分子质量、成相物质量分数、pH 值、温度对无花果蛋白酶在两相体系中分配系数(K 值)的影响。结果表明：当两相体系中PEG 相对分子质量为1000、PEG 质量分数为20%、(NH4)2SO4 质量分数为19%、pH 值为6、温度室温(25℃)时蛋白酶在两相体系中分配系数最高可达3.6。     

双水相体系萃取超氧化物歧化酶(SOD)的研究

采用PEG/硫酸铵双水相体系对啤酒酵母中SOD进行萃取研究。以酶的纯化倍数和回收率为指标,探讨了无机盐种类、PEG分子量、PEG浓度、硫酸铵浓度以及pH对SOD萃取效果的影响。结果表明:PEG4000浓度为14%,硫酸铵浓度为24%,pH 7.5时,下相中SOD回收率达73.4%,纯化倍数达1.76。回收率较PEG/磷酸钾盐缓冲液体系高了37.97%,纯化倍数较PEG/磷酸钾盐缓冲液体系高了21.38%。     

双水相体系萃取啤酒酵母中乙醇脱氢酶工艺

研究构建聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH_4)_2SO_4]双水相体系对乙醇脱氢酶(ADH)进行提取。探讨了PEG分子量、PEG浓度、(NH_4)_2SO_4浓度、粗酶添加量对ADH纯化倍数的影响。结果表明,在(NH_4)_2SO_4浓度为18%、PEG800浓度为22%、粗酶添加量为5%所组成的双水相体系下,ADH的纯化倍数可达3.815。     

PEG/盐双水相体系萃取小麦酯酶的研究

采用PEG/NaH2PO4双水相体系分离提取小麦中的植物酯酶,对构成双水相体系中的PEG分子量、浓度、pH、无机盐类型及浓度对萃取效果的影响进行了分析.确定了双水相组成体系为:23%PEG1000(质量比)和16%NaH2PO4(质量比),pH=4,在此体系中小麦的植物酯酶主要分布在上相,分配系数K=4.33,纯化倍数达到2.85,回收率95%.     

应用响应面法优化木聚糖酶的双水相萃取条件

采用响应面分析法优化短小芽孢杆菌木聚糖酶在PEG2000/K2HPO4双水相体系中的萃取条件。确定最佳萃取条件为NaCl 6%、PEG 2000 18%、K2HPO4 10%。在最佳萃取条件下得木聚糖酶分配系数为3.38,蛋白分配系数为0.13,纯化倍数为7.93,回收率为84.24%。考察了萃取酶液的部分酶学性质,其最适温度为50℃,最适pH为7.0。     

双水相亲和萃取法从豆壳中分离过氧化物酶

采用双水相金属螯合亲和萃取法从豆壳中分离过氧化物酶,考察了豆壳过氧化物酶在不同类型双水相系统中金属螯合亲和配基聚乙二醇(PEG)-亚氨基二乙酸(IDA)-Cu(Ⅱ)对亲和分配的影响,发现PEG/羟丙基淀粉(PES)系统适合于金属螯合亲和分配豆壳过氧化物酶。进一步考察亲和配基加入量、成相聚合物分子量、系统组成、pH等因素对PEG/PES系统亲和分配的影响,优化分离条件为:PEG20009%,PES20014%,PEG-IDA-Cu(Ⅱ)1%,豆壳过氧化物酶的分配系数达40,纯化因子为2.8,回收率达到93%。     

双水相萃取法提取紫花油豆中凝集素

本文建立了一种从紫花油豆中快速高效分离凝集素的方法,采用PEG-盐双水相体系进行分离,以上相蛋白得率和纯化倍数作为评价指标,分别考察了(NH4)2SO4质量分数、PEG600质量分数和体系p H值三种显著单因素,同时用SDS-PAGE电泳对其进行检测,探究凝集素在PEG600/(NH_4)_2SO_4双水相体系中的分配规律。结果表明:双水相体系分离凝集素的最优条件为(体系共5m L):3m L25%(w/w)的(NH4)2SO4溶液、1m L 90%(w/w)的PEG600溶液、1m L的粗蛋白提取液、调p H值为7.5,此时上相蛋白得率为42.32%,纯化倍数为3.08。     

双水相萃取法分离低温α- 淀粉酶的研究

对利用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)- 磷酸盐双水相体系从Pseudoalteromonas arctic GS230 发酵液中直接萃取分离低温α- 淀粉酶进行研究。探讨PEG 分子量、相浓度、pH 值对低温α- 淀粉酶在PEG- 磷酸盐双水相中分配系数、纯化系数及回收率的影响,并进行直线放大实验。结果表明：在pH5.0,PEG-1000 15%- 磷酸盐15% 的双水相体系中,低温α- 淀粉酶的纯化系数及回收率分别为4.8 和87%。     

牛乳中乳过氧化物酶的分离纯化

采用强阳离子交换色谱梯度洗脱法,对牛乳中的乳过氧化物酶进行了分离和纯化,利用SDS-PAGE定性检测。结果表明,分离出的乳过氧化物酶显示为单一区带,相对分子质量为76186u。该酶酶活回收率为83.07%,纯化倍数达到44.63倍。     

双水相萃取藻蓝蛋白的研究

双水相萃取是近年来发展起来的蛋白纯化方法。本研究运用双水相技术分离提取钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白,对构成双水相体系中不同分子量PEG和酒石酸钾钠浓度的影响进行了分析。确定了双水相组成体系为16%的PEG 2000（w/w）和25%的酒石酸钾钠（w/w）,pH值为6.0,在此体系中藻蓝蛋白主要分布在上相,最高纯度3.69,分配系数20.7,回收率94.56%。多次双水相萃取有利于藻蓝蛋白纯度提高,3次双水相萃取后,藻蓝蛋白纯度高达4.15。     

双水相体系提取SOD的研究

研究了聚乙二醇(PEG-4000)/磷酸钾双水相体系中,PEG浓度、磷酸钾浓度和pH对双水相萃取法从黄粉虫中提取超氧化物歧化酶(SOD)的影响.采用改良的邻苯三酚自氧化法测定SOD活性,并用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定SOD的分子量.结果表明:双水相体系的质量组成为PEG 12%,磷酸钾24%,pH7.1时,SOD的萃取效果最好,SOD纯化倍数达3.74,活性回收率达71.2%.     

盐析和双水相萃取法纯化细菌木聚糖酶的比较

通过对比硫酸铵盐析和双水相萃取两种木聚糖酶初级纯化方法的纯化效率,确定更加适于Paenibacillus sp.B1709木聚糖酶初级纯化的方法。结果显示,双水相萃取较盐析具有更好的木聚糖酶纯化回收效果,并对其主要实验参数进行优化,得出双水相萃取最佳条件为:聚乙二醇(PEG)4000 Da,浓度22%,最佳成相盐(NH₄)₂SO₄,最适浓度18%,最适pH6.0,NaCl 2%。在此条件下,可实现分配系数9.90,酶活力回收率为90.84%,纯化倍数6.13。实验结果显示双水相萃取相较于盐析在大规模纯化尤其针对复杂纯化目标时具备一定技术的优势。     

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取葡萄糖氧化酶的研究

采用聚乙二醇/硫酸铵[PEG/(NH4)2SO4]双水相体系对葡萄糖氧化酶的萃取进行了研究。以双水相系统的上、下相的酶活、比酶活、相比R、分配系数K和萃取率Y等为参数,探讨了PEG质量分数、不同PEG浓度和不同硫酸铵浓度对葡萄糖氧化酶在PEG/(NH4)2SO4双水相系统中分配行为的影响。实验结果表明:葡萄糖氧化酶在25%的PEG4000和10%硫酸铵的双水相体系中可获得较高的萃取率达81.11%,分配系数为0.134。