鹿茸和大豆蛋白酶解物3ku超滤组分的制备及其对小鼠脾细胞增殖影响的研究

以鹿茸水溶性蛋白和大豆分离蛋白为原料,采用模拟胃肠消化和碱性蛋白酶水解,根据游离氨基含量变化优化水解时间,制备鹿茸蛋白和大豆分离蛋白酶解物。通过超滤分离获得各酶解物分子量3ku的组分:鹿茸蛋白模拟胃肠消化物组分(VAWP-SGD)、鹿茸蛋白碱性蛋白酶解物组分(VAWP-APH)、大豆分离蛋白模拟胃肠消化物组分(SPI-SGD)、大豆分离蛋白碱性蛋白酶解物组分(SPI-APH),探究各组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果表明:模拟胃肠消化时间为胃蛋白酶2h+胰酶5h;碱性蛋白酶水解时间4h。在无诱导剂时,VAWP-SGD和SPI-SGD对小鼠脾细胞增殖均有显著促进作用(≥100μg/m L)。VAWP-SGD对Con A诱导的小鼠脾T细胞增殖促进作用最显著,其次是VAWP-APH,SPI-APH无明显作用,SPI-SGD对脾细胞增殖有轻微抑制作用。VAWP-SGD对LPS诱导的小鼠脾B细胞增殖促进作用最强,其次是VAWP-APH,SPI-APH及SPI-SGD。综上,VAWP-SGD对小鼠脾细胞增殖影响最大,对进一步开发鹿茸产品和免疫活性肽具有重要意义。     

辣木籽抗氧化肽的制备及其对氧化损伤红细胞的保护作用

采用酶法制备辣木籽水解物,以抗氧化活性为跟踪指标,通过乙醇分级沉淀和大孔树脂柱层析法定向制备辣木籽抗氧化肽,构建模拟胃、肠道消化模型,评价辣木籽抗氧化肽胃、肠道消化物的氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity,ORAC）,利用超高效液相色谱-四极杆-高分辨飞行时间串联质谱技术解析消化物中多肽组成与结构,建立2,2’-偶氮二异丁脒盐酸盐（2,2’-azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride,AAPH）诱导大鼠红细胞氧化损伤模型,研究经胃、肠道消化后的辣木籽抗氧化肽对氧化损伤红细胞溶血的抑制作用。结果表明：采用20%（体积分数,下同）、40%乙醇分级沉淀辣木籽水解物去除杂质,取60%乙醇分级沉淀组分进行柱层析分离纯化,经水、20%乙醇、40%乙醇洗脱除杂,采用60%乙醇洗脱,定向制备得到富含抗氧化氨基酸、疏水性氨基酸的辣木籽抗氧化肽（蛋白质量分数92.84%,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力、ORAC分别为39.95、1454.57 μmol/g）;辣木籽抗氧化肽经模拟胃、肠道消化后,抗氧化活性增强,释放出更多短肽段,包括11条二肽、5 条三肽;辣木籽抗氧化肽消化物、Gln-Met、Leu-Phe通过清除胞内活性氧,下调丙二醛含量与超氧化物歧化酶活力,拮抗AAPH所致氧化应激,有效抑制氧化损伤红细胞发生溶血。     

血根碱清除自由基及抑制生物大分子氧化的作用

目的：评价血根碱的体外抗氧化活性,为血根碱作为天然抗氧化剂的应用提供理论依据。方法：采用DPPH自由基清除法测定血根碱的体外抗氧化能力;采用Cu2+/H2O2和AAPH体系诱导牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）氧化损伤和羰基化损伤模型,研究血根碱对上述损伤的保护作用;采用TBA法分别测定血根碱对FeSO4诱导的大豆卵磷脂氧化损伤的抑制作用,及AAPH诱导的鲱鱼精DNA氧化损伤的抑制作用。结果：血根碱可有效清除DPPH自由基,且呈浓度依赖性,在100 μmol/L时清除率为85.94%;1～100 μmol/L的血根碱可显著保护Cu2+/H2O2及AAPH体系诱导的BSA损伤;10～100 μmol/L的血根碱可显著保护由Cu2+/H2O2体系诱导的BSA蛋白羰基化,当浓度为0.1～100 μmol/L时可显著保护由AAPH诱导的BSA蛋白羰基化;血根碱浓度在6.25～100 μmol/L范围内均可显著抑制由FeSO4及AAPH诱导的大豆卵磷脂及鲱鱼精DNA的氧化损伤。结论：血根碱可有效清除自由基及保护蛋白氧化损伤和羰基化损伤,亦可显著抑制脂质及DNA氧化损伤。     

玉米多肽对大鼠体外抗氧化作用的研究

用丙二醛(MDA)试剂盒测定MDA的含量,用分光光度法测定大鼠红细胞溶血程度.结果显示:在体外,10.00mg/ml玉米多肽使自由基诱导的大鼠肝线粒体MDA生成抑制率达39.63%,对肝组织匀浆MDA生成抑制率分别为22.83%(正常组),45.59%(Fe2 诱导组)及67.53%(H2O2诱导组).玉米多肽能抑制自由基诱导的大鼠肝线粒体肿胀,使大鼠肝线粒体肿胀度低于对照组,且剂量关系明显,表明其具有保护大鼠肝线粒体氧化损伤的作用.玉米多肽对H2O2诱导的大鼠红细胞氧化溶血有抑制作用,表明其对大鼠红细胞的氧化损伤具有保护作用.     

菊苣酸对蛋白质氧化损伤的作用

目的：评价菊苣酸对自由基诱导蛋白质氧化损伤的影响。方法：采用Cu2＋/H2O2和2,2’-偶氮二（2-甲基丙 基咪）二盐酸盐（2,2’-azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochloride,AAPH）两种不同的自由基诱导体系,分别 诱导牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）、小鼠肝脏蛋白和脑蛋白氧化损伤,研究菊苣酸对蛋白氧化损 伤的影响;通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹法检测蛋白氧化损伤程度。结果：菊苣酸在 100～1 000 μmol/L浓度范围内能够抑制Cu2＋/H2O2诱导的BSA氧化损伤;低浓度菊苣酸对Cu2＋/H2O2诱导的小鼠肝脏 蛋白和脑蛋白氧化损伤具有保护作用,但在高浓度时表现出促氧化作用;在AAPH诱导体系中,菊苣酸对3 种蛋白 模型均具有保护作用,且菊苣酸浓度越高保护效果越好。结论：在Cu2+/H2O2和AAPH两种诱导体系中,菊苣酸对蛋 白质氧化损伤表现出不同的作用效果。     

体外化学模拟体系中洋葱黄酮类化合物抗氧化活性的研究

通过测定洋葱黄酮类化合物对亚油酸过氧化、油脂过氧化和脱氧核糖氧化损伤的抑制作用及H2O2诱导的红细胞氧化溶血实验和大鼠肝匀浆脂质过氧化实验,研究了洋葱黄酮类化合物的抗氧化作用。实验结果表明:洋葱黄酮类化合物对亚油酸过氧化、油脂过氧化及脱氧核糖的氧化损伤均有良好的抑制作用,并能明显抑制H2O2诱导的红细胞氧化溶血反应和肝组织匀浆脂质过氧化反应的发生,即洋葱黄酮类化合物具有很强的体外抗氧化活性,有望作为天然抗氧化剂及功能性食品得到开发应用。     

核桃叶多糖对脂质和DNA氧化损伤的作用研究

采用 Cu2+/H2O2和 2,2′-偶氮二（2-甲基丙基咪）二盐酸盐[2,2′-azobis（2-methylpropionamidine）dihydrochloride,AAPH]两种不同的反应体系,分别诱导SD大鼠肝匀浆和脑匀浆、卵磷脂、亚油酸以及pBR322质粒DNA产生氧化损伤,建立脂质和DNA氧化损伤模型,考察核桃叶多糖对脂质和DNA氧化损伤的作用。通过硫代巴比妥酸法检测脂质过氧化程度;利用琼脂糖凝胶电泳检测pBR322质粒DNA氧化损伤程度。结果表明：核桃叶多糖在一定的浓度范围内对Cu2+/H2O2诱导的脂质和DNA氧化损伤有明显的保护作用;在AAPH诱导体系中,核桃叶多糖能明显抑制脂质和DNA氧化损伤,且呈浓度依赖性。     

菊苣酸对活性氧诱导脂质和DNA氧化损伤的影响

目的：探讨菊苣酸对脂质和DNA氧化损伤的影响。方法：通过Cu2+/H2O2和2,2’-偶氮二（2-甲基丙基咪） 二盐酸盐（2,2’-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride,AAPH）分别诱导小鼠肝匀浆和脑匀浆、鲱鱼精DNA和 pBR322质粒DNA,建立脂质和DNA氧化损伤模型,研究菊苣酸对脂质和DNA氧化损伤的影响;通过硫代巴比妥酸 法检测脂质过氧化程度和鲱鱼精DNA氧化损伤程度;采用琼脂糖凝胶电泳检测pBR322质粒DNA氧化损伤程度。结 果：在Cu2+/H2O2诱导体系中,菊苣酸在一定浓度范围内对脂质和DNA具有较强的保护作用,但高浓度菊苣酸对小 鼠肝匀浆和脑匀浆以及鲱鱼精DNA的保护作用减弱,100 μmol/L菊苣酸对pBR322质粒DNA表现出促氧化作用;在 AAPH诱导体系中,菊苣酸在实验浓度范围内能明显抑制脂质和DNA的氧化损伤。结论：菊苣酸对脂质和DNA具有 明显保护作用,但高浓度菊苣酸对羟自由基诱导脂质和DNA氧化损伤具有促进作用。     

亚麻木酚素对AAPH诱导的红细胞和肝组织氧化应激的保护作用

探讨了亚麻木酚素的抗氧化活性及机制,测定了亚麻木酚素对DPPH自由基的清除能力,建立AAPH氧化损伤大鼠红细胞和肝组织模型,研究了亚麻木酚素对氧化损伤红细胞溶血率和血红蛋白氧化率的影响,以及其对红细胞和肝组织氧化损伤模型丙二醛(MDA)和抗氧化酶的影响。结果显示:亚麻木酚素对DPPH自由基具有清除作用;亚麻木酚素对红细胞溶血和血红蛋白氧化的保护作用呈现浓度依赖性,与AAPH作用4 h的模型组相比,50μmol/L和100μmol/L亚麻木酚素的保护作用显著提高;在AAPH诱导的红细胞氧化应激模型中,100μmol/L和150μmol/L亚麻木酚素显著降低了AAPH损伤4 h时MDA含量,并显著提高了GSH-Px的酶活,150μmol/L亚麻木酚素显著增加了AAPH损伤2 h和4 h时的SOD和CAT的酶活;在AAPH诱导的肝组织模型中,150μmol/L亚麻木酚素能有效降低不同AAPH损伤时间(1～4 h)所增加的MDA含量,增加AAPH损伤4 h时降低的SOD和CAT酶活。说明亚麻木酚素具有抗氧化活性,能够抑制脂质过氧化,保护红细胞和肝组织内抗氧化酶系的活性。     

海带岩藻多糖的抗脂质过氧化作用研究

用稀酸浸提和乙醇沉淀的方法提取海带岩藻多糖(Laminaria japonica fucoidan,LJF).采用体外实验研究LJF-2对H2O2诱导红细胞氧化溶血的抑制作用以及对小鼠肝匀浆脂质过氧化的保护作用,以此来评价LJF-2的抗脂质过氧化作用效果;结果表明,LJF-2对H2O2诱导的小鼠红细胞氧化溶血以及小鼠肝匀浆脂质过氧化具有明显的保护作用,且与浓度呈一定的量效关系.当浓度为0.54g/L时,对H2O2诱导红细胞氧化溶血的抑制率为50.32％,对小鼠肝匀浆脂质自发性过氧化的抑制率为28.24％.表明LJF-2具有显著的体外抗氧化活性.     

紫薯花青素体外抗氧化及对H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究紫薯花青素的体外抗氧化作用,建立H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤模型,初步评价紫薯花青素的抗氧化应激作用。方法：紫薯干粉经过提取、纯化制得紫薯花青素干粉,分别测定紫薯花青素的总还原力、对羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2－•）的清除能力以及对大鼠红细胞溶血的保护作用。建立H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤模型,采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测不同质量浓度紫薯花青素对HepG2细胞氧化损伤的保护作用。结果：紫薯花青素的还原力和VC基本相当;紫薯花青素对·OH有很好的清除效果,在实验浓度范围内有明显的剂量-效应关系;随紫薯花青素浓度的升高,对O2－•的清除作用增强,呈现良好的量-效关系,单位浓度的紫薯花青素对O2－•的清除作用比2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（butylated hydroxytoluene,BHT）效果好。不同质量浓度的紫薯花青素均可抑制H2O2诱导的大鼠红细胞溶血,且随着紫薯花青素质量浓度的升高,大鼠红细胞的溶血度降低,呈现良好的量-效关系。H2O2诱导的HepG2细胞氧化损伤模型中,50～1 600 μg/mL的紫薯花青素均能够抑制H2O2引起的HepG2细胞凋亡,当紫薯花青素质量浓度达到800 μg/mL时,HepG2细胞存活率为（88.03±7.48）%。结论：紫薯花青素具有良好的体外抗氧化作用,并对H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤具有明显的保护作用,研究初步揭示了紫薯花青素具有体外抗氧化作用。     

白藜芦醇和白藜芦醇苷抗氧化作用的研究

采用亚油酸体系、H2O2诱导的红细胞溶血试验研究白藜芦醇、白藜芦醇苷的体外抗氧化作用。研究结果表明:白藜芦醇、白藜芦醇苷能抑制亚油酸的过氧化作用,其抑制率高于VC、BHT、虎杖粗提物。白藜芦醇、白藜芦醇苷均可降低H2O2诱导红细胞氧化性溶血率,其作用效果好于VC、VE和虎杖粗提物,抑制率具有剂量效应。     

杜仲内生球毛壳菌发酵产物抗脂质过氧化和保护红细胞的研究

对所筛选的一株具有较高抗氧化活性的杜仲内生球毛壳菌的发酵液提取物进行体外抗脂质过氧化和抑制小鼠红细胞溶血氧化的研究。结果表明：杜仲内生球毛壳菌的发酵液提取物对小鼠肝、肾、心和脾组织的脂质过氧化的抑制效果随着发酵提取物浓度的增加而不断增强,1mg/ml 发酵提取物对小鼠心和脾两种组织脂质自发过氧化的抑制率分别为71.55% 和71.68%,对H2O2 诱导的肝组织脂质过氧化的抑制率达到92.50%;0.3mg/ml 的发酵提取物对小鼠红细胞自氧化溶血的抑制率为68.48%,对H2O2 诱导的小鼠红细胞氧化溶血的抑制效果则随着浓度的提高而增强,0.75mg/ml 浓度的抑制率达到96.12%。结论：杜仲内生球毛壳菌发酵液提取物在体外有较显著的抗脂质过氧化作用和通过降低氧化溶血而保护红细胞的作用。     

玛咖多糖抗氧化保健作用研究

探讨南美药食两用植物玛咖多糖成分的体外抗氧化保健作用。采用邻苯三酚自氧化法、H2O2诱导红细胞氧化溶血以及CCl4致豚鼠肝脏脂质过氧化的方法,观察体外给予玛咖多糖对这些氧化反应的影响。结果表明,玛咖多糖对邻苯三酚的自氧化有微弱的抑制作用,对H2O2诱导红细胞氧化溶血有显著的抑制作用,最大抑制率达76.9%,显著减少CCl4所致豚鼠肝脏脂质过氧化代谢产物丙二醛的产生。玛咖多糖体外具有一定的抗氧化保健作用。     

苦丁茶多糖抗氧化活性研究

采用清除超氧阴离子自由基、清除羟自由基、清除DPPH自由基、双氧水诱导红细胞氧化溶血、红细胞自氧化溶血实验,对A、K_1、K_3三个苦丁茶多糖组分的抗氧化活性进行了研究,并与Vc进行了比较,结果表明:苦丁茶多糖对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基具有一定的清除作用;对H_2O_2诱导红细胞氧化溶血反应、对红细胞自氧化溶血反应都有显著的抑制作用。     

辣椒碱对生物大分子氧化损伤的保护作用

本文分别采用Cu~(2+)/H_2O_2、AAPH体系诱导BSA氧化和羰基化损伤、Hemin/nitrite/H_2O_2诱导BSA硝基化损伤;Fe~(2+)/Vitc、AMVN诱导亚油酸(LA)过氧化及AAPH诱导鲱鱼精DNA氧化损伤的模型,研究了辣椒碱对生物大分子在羟自由基和烷氧自由基攻击下发生氧化损伤的保护作用。结果表明:50μM~1000μM的辣椒碱能显著抑制自由基诱导的蛋白质氧化损伤;10μM~1000μM的辣椒碱能显著抑制羟自由基诱导的蛋白羰基化、蛋白氧化应激产生的硝基化以及脂质过氧化终产物TBARS的生成,100μM~1000μM的辣椒碱能显著抑制烷氧自由基诱导的蛋白羰基化和DNA的氧化损伤。得出结论:辣椒碱对不同自由基诱导的生物大分子氧化损伤有显著的保护作用,且其保护作用在一定浓度范围内与辣椒碱浓度呈正相关。本研究为辣椒碱在食品抗氧化剂以及功能食品中的开发与应用提供了基础依据。     

鲑鱼皮明胶水解物的抗氧化活性及其对细胞氧化损伤的保护作用

采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解鲑鱼皮明胶,得到水解度为4.7％到13.5％的7个明胶水解物,分别评价明胶水解物对自由基的清除能力.明胶水解物(0.5、1、2mg/mL)预先作用BRL大鼠肝细胞2h后,通过H2O2(5mmol/L)诱导氧化损伤,分别测定细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)等细胞内抗氧化产物的含量变化.结果表明,明胶水解物的抗氧化活性随着水解度的增大呈增强趋势.明胶水解物对细胞具有保护作用,可显著提高细胞存活率,降低LDH渗出量和MDA生成量,且存在一定的剂量关系,但细胞中GSH含量变化不显著;7个明胶水解物对H2O2诱导肝细胞损伤保护时,细胞存活率与水解物的体外抗氧化活性大小显著正相关,而LDH渗出量和MDA生成量与水解物的体外抗氧化活性大小负相关.     

米糠肽抗氧化活性的研究

通过测定米糠肽的还原力、抗卵黄脂蛋白的脂质过氧化能力、抗油脂过氧化能力以及H2O2诱导的红细胞氧化溶血试验和大鼠肝匀浆脂质过氧化试验研究了米糠肽的抗氧化作用.结果表明:米糠肽具有较强的还原力,对脂质过氧化和油脂过氧化均具有良好的抑制作用,并能抑制H2O2诱导的红细胞氧化溶血反应和肝组织匀浆脂质过氧化反应的发生,有望作为天然抗氧化剂及功能性食品得到开发应用.     

不同立体构型的虾青素抗脂质过氧化活性研究

目的:制备左旋和和右旋虾青素,明确不同立体构型虾青素抗脂质过氧化能力。方法:从不同原料中分离纯化虾青素,构建亚油酸、肝线粒体和红细胞氧化模型。通过检测不同指标来评价不同立体构型虾青素抗脂质过氧化活性。结果:从雨生红球藻和红法夫酵母中制备的虾青素分别为左旋和右旋。3种立体构型虾青素对亚油酸自动氧化程度和Fe2+诱导MDA生成、AAPH诱导线粒体MDA生成、线粒体肿胀和蛋白质羰基含量、H2O2诱导红细胞溶血率均有明显的抑制作用。左旋和右旋虾青素抗脂质过氧化能力显著高于混合型,高浓度情况下,左旋虾青素在线粒体MDA抑制率和线粒体肿胀抑制率方面显著高于右旋虾青素。3种立体异构体虾青素在氧化条件下的抗氧化酶(SOD和GSH-PX)活力没有显著差异,表明抗氧化酶系统不是造成不同立体构型虾青素抗脂质过氧化能力存在差异的原因。结论:不同立体构型虾青素抗脂质过氧化活性存在差异,为合理开发虾青素功能产品提供了理论依据。     

红毛藻多糖对H2O2诱导的Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究红毛藻多糖（Bangia fusco-purpurea polysaccharide,BFP）对H2O2诱导的人结肠腺癌（Caco-2）细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：构建过氧化氢（H2O2）诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型,通过形态学观察和测定细胞裂解液中的抗氧化物水平及相关酶活力,评价BFP对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果：BFP可明显提高H2O2诱导氧化损伤的Caco-2细胞活力,降低细胞内活性氧生成水平,提高细胞内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力以及还原型谷胱甘肽水平,减少丙二醛生成,并通过抑制Caspase-3和Caspase-9活性来改善氧化应激损伤引起的细胞凋亡。结论：BFP对H2O2诱导氧化应激损伤的Caco-2细胞具有保护作用,可通过增强细胞内源性抗氧化酶活力、提高非酶类抗氧化物水平和抑制细胞凋亡明显缓解H2O2诱导的Caco-2细胞氧化应激损伤。