Isolation and characterization of antitumor polysaccharides from the marine mollusk Ruditapes philippinarum

Aqueous purified extract (PE) was isolated from the crude extract (CE) of the marine mollusk, Ruditapes philippinarum. Two water-soluble polysaccharides, PEF1 and PEF2, were purified from PE. The chemical structures were determined using FTIR, GC, HPLC and ¹³C NMR. The results indicated that PEF1 and PEF2 were homoglucan–protein complexes with a protein content of 26.0 and 8.2%, and their average molecular weights were about 2.0 × 10⁶ and 5.0 × 10³, respectively. The glucan moiety of PEF1 was mainly a (1 → 6)-branched (1 → 4)-α-d-glucan, while that of PEF2 contained (1 → 4)-α-d-glucan and (1 → 6)-β-d-glucan. PE fractions contained large quantities of glutamic acid and aspartic acid, but no cysteine. The antitumor activities were tested both in vitro and in vivo. PE showed significantly the highest tumoricidal activity against human hepatoma SMMC-7721 cells, and PEF1 had better cytotoxicity than PEF2. There was no observed cytotoxicity in human hepatocyte HL-7702 cells within the experimental concentration range for all PE fractions. PE showed antitumor activity against solid tumor Sarcoma 180 in a dose-dependent manner. It also demonstrated stimulating effect on murine lymphocyte proliferation induced by concanavalin A. The results demonstrated that the presence of bound protein, compositional glucan and moderate molecular mass would be helpful to the enhancement of antitumor activities. This study suggested that the polysaccharides isolated from the marine mollusk had a potential application as natural antitumor and immunomodulator agents.     

菲律宾蛤仔氨基多糖的分离纯化及化学性质

以湛江地区盛产的菲律宾蛤仔全脏器为原料，经酶解，脱色，离心去蛋白后醇沉、干燥等工序得到氨基多糖粗制品(CRG)，再将所得的CRG经一次纯化(吸附、透析)、二次纯化(CTAB络合)、分级分离(乙醇分级、CTAB分级)等方法进行化学纯化，得到菲律宾蛤仔纯化产物(GAG—2—3—2)。GAG—2—3—2主要有氨基己糖与己糖醛酸组成，两者分子比例接近1：2，硫酸基含量达到13.3％；琼脂糖凝胶电泳显示单一区带，Rf为0．89，介于肝素与硫酸软骨素之间。     

菲律宾蛤仔糖胺聚糖的免疫活性研究

目的:研究菲律宾蛤仔糖胺聚糖CRG对小鼠免疫功能的调节作用.方法:采用正常小鼠与免疫抑制小鼠检测CRG对小鼠非特异免疫、细胞免疫及体液免疫的影响.结果:CRG可显著提高小鼠碳粒廓清指数、小鼠血清溶血素含量及抗全生成细胞数,增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力、脾淋巴细胞增殖作用及迟发型变态反应能力(p<0.05),对免疫抑制小鼠免疫功能有一定恢复作用.结论:菲律宾蛤仔糖胺聚糖CRG可增强正常小鼠的免疫功能.     

菲律宾蛤仔过敏原原肌球蛋白的鉴定与分子克隆

目的了解菲律宾蛤仔中过敏原的情况,对其主要过敏原进行鉴定和分子克隆。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹验证原肌球蛋白,双向电泳对蛋白等电点进一步确定。利用差示扫描量热法对蛋白的热性能测定以及蛋白克隆和测序来分析原肌球蛋白。结果菲律宾蛤仔原肌球蛋白的分子量在37 k Da左右,等电点为5.1,热稳定性较强。原肌球蛋白的基因序列全长为855 bp,编码284个氨基酸,对序列进行同源对比,相似性较高。结论本实验证实了原肌球蛋白为菲律宾蛤仔的过敏原,为认识菲律宾蛤仔过敏原提供基础数据。     

菲律宾蛤仔对扑草净的生物富集与消除规律

采用半静态水质接触染毒法,研究菲律宾蛤仔对养殖海水中扑草净的生物富集和消除规律。生物富集实验结果表明：在水温（20±1） ℃条件下,在扑草净质量浓度分别为1.0、10.0、200.0 μg/L的养殖海水中,菲律宾蛤仔中扑草净残留量随所暴露海水中扑草净质量浓度的升高而逐渐增加,二者之间呈正相关。3 个实验组分别在第24、24、6小时达到最大富集值,最大富集系数分别为40.3、9.54、5.35。随着时间的延长,菲律宾蛤仔的扑草净残留量均表现为先迅速上升,升至最高值后迅速降低,低至一定质量浓度后再次上升至一个高点然后下降,之后维持在某一质量浓度水平呈小幅波动的变化趋势。消除实验结果表明：在消除实验初期,3 个实验组菲律宾蛤仔中扑草净的残留量均迅速下降,24 h时降至原质量浓度的10%左右,此后下降缓慢,1.0、10.0、200.0 μg/L暴露实验组菲律宾蛤仔的扑草净残留量降至10.0 μg/kg以下的时间分别为2、24、768 h,其中1.0 μg/L组在消除实验持续96 h时检测结果低于检出限,其余2 组在为期45 d的消除实验结束时仍可检出扑草净残留量。研究表明,菲律宾蛤仔对扑草净具有快速富集能力,但完全消除需要较长时间。     

Purification,characterization, antibacterial activity and N-terminal sequencing of buffalo-milk lysozyme

Lysozyme from buffalo milk was purified to homogeneity and its N-terminal amino acid sequence, biochemical properties and antibacterial spectrum were determined. The purification procedure, comprising ion-exchange chromatography using CM-cellulose and size-exclusion chromatography using Sephadex G-50, conferred 8622-fold purification and 39.3% recovery of lysozyme. The purified enzyme migrated as a single band on sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and native PAGE. Immunological purity of lysozyme preparation was confirmed by immuno-electrophoresis. Molecular weight of buffalo-milk lysozyme as determined by SDS-PAGE was 16 kDa and its amino acid composition was determined by reverse phase high performance liquid chromatography (HPLC). The sequence of 23 amino acid residues at the N-terminal end showed 56.5% homology with bovine milk lysozyme and 30.4% with equine milk lysozyme. The specific activity of buffalo milk lysozyme was ten-times that of bovine milk lysozyme. Buffalo-milk lysozyme was active over a wide range of pH and its activity was strongly influenced by molarity of the medium. Antibacterial activity of buffalo-milk lysozyme was determined against 11 species of bacteria; out of seven Gram-positive bacteria tested, four were inhibited, while Gram-negative bacteria were resistant.     

杂色蛤中ACE抑制肽的分离鉴定与分子对接研究

目的:建立一种快速、准确筛选杂色蛤酶解物中活性多肽的方法。方法:在ACE抑制活性导向下,以超滤技术与离子交换法对杂色蛤酶解物进行分离,确定ACE抑制活性多肽,通过质谱分析与已有序列比对的方法,确定活性多肽的氨基酸序列;通过计算机模拟将多肽与ACE蛋白对接,筛选活性多肽,并确定其与ACE蛋白的作用位点。结果:共鉴定67个多肽,其中QIIVQDLTKR、LDYRPGDKFKGT、NTQIIVQDLTKR和LLFDRAPVNFGNYR这四个多肽能与ACE稳定结合,ACE的Glu403为一重要的结合位点,且Ala356和Arg522对多肽与ACE的稳定结合也产生了重要影响。结论:基于串联质谱与分子对接技术,建立从混合多肽中快速筛选、鉴定活性多肽的方法,明确活性多肽与ACE可能的结合位点,为后续的深入研究提供了依据和参考。      

菲律宾蛤仔调味软罐头的工艺研究

目的以菲律宾蛤仔为原料,开发制备调味软罐头。方法以风味、质地和色泽感官评分项目为评价指标,通过预实验确定最佳熟制方式和熟制时间,在盐用量、糖用量、味精用量和酱油用量4个单因素实验的基础上采用响应面法优化菲律宾蛤仔软罐头的调味配方。结果在盐用量为2.5%、糖用量为2.7%、味精用量为1.2%和酱油用量为0.3%条件时,其余以五香料液补至100%,感官评分预测值高达8.28,通过实验验证的感官评分结果为8.68,与预测值接近。结论菲律宾蛤仔调味软罐头制备工艺可行,可为后期其他贝类的生产加工研究提供借鉴。     

菲律宾蛤仔净化技术初步研宄

采用紫外线制备无菌海水对菲律宾蛤仔进行净化处理,以细菌总数和大肠菌群为指标,探讨影响菲律宾蛤仔净化效果的几个关键因素.结果表明,在20℃条件下,菲律宾蛤仔净化的最佳工艺条件为:贝水比1:15、海水流量1.5 X10-5m3/s、净化处理时间为16h,细菌总数和大肠菌群指标符合海水贝类卫生标准(GB2744-1996).     

江苏产菲律宾蛤仔提取物的抗疲劳作用

研究了江苏产菲律宾蛤仔提取物(RE)对运动小鼠抗疲劳能力的影响。将小鼠随机分为6组,正常组、模型组、阳性组以及低、中、高3个剂量组。小鼠灌胃15 d后,采用小鼠游泳疲劳模型,观察各组小鼠负重游泳时间、不负重游泳后血清乳酸(LA)、尿素氮(BUN)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)指标的差异。结果:高、中剂量组小鼠负重游泳时间明显长于模型组和低剂量组;与模型组相比,3个剂量组小鼠血清乳酸(p0.01)含量显著降低,且呈剂量依赖性;肌酸激酶(p0.01)、乳酸脱氢酶(p0.01)活力均下降,超氧化物歧化酶(p0.05)活力升高,尿素氮含量仅高剂量有显著性差异。结论:菲律宾蛤仔提取物能提高小鼠运动耐力,加速疲劳的消除。     

花蛤酶解液的美拉德反应及抗氧化活性研究

以花蛤蛋白酶解液为原料制备具有抗氧化活性的美拉德反应产物(MRPs).结果表明,将花蛤蛋白制成10％的匀浆,加入1％ Alcalase蛋白酶进行酶解,调节pH8.0,在65℃下水解3h,水解度为17.8％.酶解液通过与6％葡萄糖,在pH8.0,温度120℃下,反应1h,褐变程度最大.美拉德反应产物通过分离得到4个组分,实验证明,4个组分都具有抗氧化活性,其中组分Ma的抗氧化活性最强,对DPPH·和O2-·的清除率分别为76.8％和68.6％.     

花蛤酶解液的美拉德反应及抗氧化活性研究

以花蛤蛋白酶解液为原料制备具有抗氧化活性的美拉德反应产物（MRPs）。结果表明,将花蛤蛋白制成10%的匀浆,加入1%Alcalase蛋白酶进行酶解,调节pH8.0,在65℃下水解3h,水解度为17.8%。酶解液通过与6%葡萄糖,在pH8.0,温度120℃下,反应1h,褐变程度最大。美拉德反应产物通过分离得到4个组分,实验证明,4个组分都具有抗氧化活性,其中组分Ma的抗氧化活性最强,对DPPH·和O2-·的清除率分别为76.8%和68.6%。      

菲律宾蛤仔蒸煮液多糖回收工艺及微胶囊化

目的 回收菲律宾蛤仔蒸煮液中的多糖并采用微胶囊包埋技术对多糖进行脱腥和保护。方法 采用超滤醇沉工艺回收菲律宾蛤仔蒸煮液多糖, 以该多糖为芯材, 大豆蛋白和麦芽糊精为壁材, 采用喷雾干燥法制备微胶囊, 通过单因素和正交试验优化制备工艺。结果 菲律宾蛤仔蒸煮液多糖回收工艺为: 蒸煮液固形物含量调整为10%, 3万分子量超滤膜除杂, 透过液加入3倍体积乙醇, 室温醇沉24 h, 沉淀冻干得菲律宾蛤仔蒸煮液多糖粗品, 总糖含量大于80%, 回收率高于70%; 喷雾干燥法制备菲律宾蛤仔蒸煮液多糖微胶囊工艺参数为: 乳化剂用量0.1%、多糖浓度10 mg/mL、壁材比例3:1、均质时间3 min, 得到的微胶囊的包埋率达到68.63%。结论 超滤醇沉工艺适用于菲律宾蛤仔蒸煮液中多糖的回收, 该多糖采用喷雾干燥法微胶囊化包埋处理, 能够很好地掩盖其腥味, 并起到保护作用。该研究为菲律宾蛤仔蒸煮液的综合开发利用提供思路。     

菲律宾蛤仔氨基多糖的分离提取及其抗肿瘤活性的初步研究

以湛江地区盛产的菲律宾蛤仔全脏器为原料,经酶解、脱色、离心去蛋白后醇沉、干燥等工序得到氨基多糖粗制品(CRG),再将所得的CRG经一次纯化(吸附、透析)、二次纯化(CTAB络合)、醇沉等方法进行纯化,得到菲律宾蛤仔纯化产物(PRG)。PRG含有氨基已糖、乙糖醛酸、硫酸基和少量的岩藻糖(Fuc)、半乳糖(Gal),琼脂糖凝胶电 泳可分为F—1、F—2两个级分。红外光谱与CS—6相似。体外抗肿瘤实验表明,1.0mg/mL菲律宾蛤仔CRG具有显著的抗肿瘤活性,24h内对HL—60细胞的抑制率达59.8％。     

菲律宾蛤仔中铅、镉、汞、无机砷的含量分析及食用安全性评价

采用原子吸收光谱法和原子荧光光谱法分别对舟山本岛范围内农贸菜场和超市的菲律宾蛤仔中铅、镉、总汞、无机砷含量进行测定,并对其污染状况和食用安全性进行评价。结果显示：菲律宾蛤仔可食部分中铅、镉和总汞均符合GB 2762-2012《食品中污染物限量》要求,部分样品中无机砷含量超标,超标率在6%～10%之间,无机砷污染指数为0.71;菲律宾蛤仔中铅、镉、汞、无机砷含量小于世界卫生组织/联合国粮农组织制定的每周可耐受摄入量比例的10%。故舟山农贸菜场和超市中菲律宾蛤仔相对安全。     

菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）软体部位含氮物的组成及其分布

从食品原料学角度出发,为系统阐述菲律宾蛤仔的工艺学特性,以含氮物质为出发点,蛋白质为重点,对其各个软体解剖部位的质量组成、一般化学组成、含氮物分布及蛋白质组分等进行了分析讨论。结果表明：菲律宾蛤仔可食部分占原料20%左右,各个软体组织（足、闭壳肌、外套膜、水管、鳃、内脏团）含有水分74.01%～80.07%,其他化学组成为干基,粗蛋白29.19%～43.46%、总糖12.46%～30.75%、粗脂肪1.61%～6.84%和灰分6.69%～11.10%;各组织部位的含氮组分分布比例依次为：非蛋白氮14.7%～26.42%、水溶性蛋白12.55%～19.17%、盐溶性蛋白34.83%～50.4%、碱溶性蛋白17.49%～25.06%及基质蛋白2.19%～10.23%;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示：菲律宾蛤仔软体部位不同组织、不同组分的蛋白图谱有所差异。水溶性蛋白分子质量较小,在100 kD以下;盐溶性蛋白种类丰富,在200、100、45、35、20 kD附近有明显条带;碱溶性蛋白仅在200、100、45 kD附近有4 条明显条带;基质蛋白分子质量分布范围较宽,主要集中在200 kD以上和45 kD区域。     

双壳贝类养殖水体中Hg、Pb、Cd安全限量的研究

双壳贝类富集重金属会给消费者食用安全造成危害。本文以菲律宾蛤仔(Ruditapesphilippinarum)为研究对象,采用生物富集双箱动力学模型测定双壳贝类对3种重金属Hg、Pb、Cd的生物富集动力学参数。结果表明:贝类对重金属的生物富集和排出都较缓慢,经过30d生物富集未达到稳态平衡,Hg、Pb、Cd的生物富集系数BCF分别为1030、935和378,生物半衰期处在18～33d范围内。参考欧盟和我国菲律宾蛤仔标准中关于Hg、Pb、Cd的安全限量,通过BCF计算得到菲律宾蛤仔养殖水体中Hg、Pb、Cd的安全限量分别为0.0005、0.01和0.026mg/L。     

杂色蛤真空低温油炸工艺优化及品质评价

为优化真空低温油炸杂色蛤的工艺,以含油量、脆度、感官评分为考察指标,采用变异系数权重法确定3个指标的权重,并计算3个指标的综合评分,采用响应面试验对油炸温度、油炸时间、脱油频率进行工艺优化,并通过测定色泽、失重率、收缩率、含油量、含水量和感官评分指标对比传统油炸和真空低温油炸杂色蛤品质。结果表明:油炸时间13min、油炸温度90℃、脱油频率75Hz为较佳参数,此条件下杂色蛤的综合评分为90.92,与模型预测值拟合度较好。与传统油炸杂色蛤相比,真空低温油炸杂色蛤收缩率、含油量和含水量较低,外观饱满,色泽均匀,呈现亮金黄色,感官评分较高。