化学和酶促兼用的方法研制5''''-[α-~(32)P]脱氧三磷酸腺苷

本文采用化学和酶促合成兼用的方法,使用无载体~(32)P-正磷酸(或盐)标记5’-[α-~(32)P]脱氧三磷酸腺苷。产物的比活度达到20—160 Ci/m M,实际收率21—40%,放化纯度94—97%,化学合成中生成的~(32)P-脱氧单磷酸腺苷占总放射性量的69—86.7%。反应所需的二种激酶采用高速离心的方法除去抑制酶反应的硫酸铵。本工作还对影响化学合成的因素进行了一些研究。     

5′-脱氧腺苷[α-硫代]-三磷酸盐的~(31)P核磁共振测定

利用~(31)P核磁共振技术,对脱氧腺苷-[α-硫代]三磷酸盐的构型进行了研究。在~(31)P-NMR实验中观察到在δ43.1ppm处,有两个三重峰,根据其化学位移和偶合裂分提供的信息,确证了这化合物是5′-脱氧腺苷-[α-硫代]三磷酸盐。同时~(31)P-NMR图谱表明,此化合物是以单一的SP或RP异构体存在。     

标记核酸和蛋白质的新技术——[~(35)S]-硫代核苷酸

鉴于~(32)P具有较高的起始比度,~(32)P标记的核苷酸在核酸和蛋白质研究中已被广泛应用。但~(32)P的半衰期很短,所以其标记核苷酸的有效使用期很短。而~(35)S的半衰期则要长得多。为此英国NEN公司最近合成了~(35)S标记的核苷酸并应用于核酸和蛋白质的研究中,取得了满意的结果。 [~(35)S]-硫代核苷酸是一类由硫原子取代与磷酸结合的氧原子而成的核苷酸类似物。这一类化合物在生物学研究中具有某些独特的性质。当~(35)S原子结合在γ磷酸位时,该化合物可作为研究激酶、磷酸酶和水解酶反应的有用工具;当~(35)S原子结合在α磷酸位时,则可用作对DNA和RNA聚合酶及其由此得到的聚核苷酸进行研究。     

~(35)S-α-dATP用于膜上DNA与DNA杂交方法的研究

随着分子生物学的发展,用cDNA探针检测核酸特异序列的分子杂交技术的应用日益广泛,~(32)P、~3H及~(125)I的标记化合物被用于标记DNA和分子杂交已有多年。将~(35)S取代与磷酸结合的氧原子而成的~(35)S标记核苷酸类似物是近年开发的新技术。由于~(35)S发射的β射线能量适中(0.167MeV),防护比~(32)P容易,探测比~3H方便,故用作常规放射自显影比~(32)P、~3H都优越;     

酶促磷酸化法合成氚标记核苷三磷酸

以四种溴代核苷一磷酸为原料,经催化氚卤置换反应首先合成了四种氚标记核苷一磷酸:5~3HUMP、5 ~3HCMP、8 ~3HAMP及8 ~3HGMP。再用从啤酒鲜酵母中提取的粗酶,经酶促磷酸化、进一步合成了四种氚标记核苷三磷酸:5 ~3HUTP、5 ~2HCTP、8 ~3HATP及8 ~3HGTP。 选择了较好的酶促磷酸化条件,使之同时适合于四种氚标记核苷三磷酸的合成,产率均大于72％。除此之外,作为副产品还可得到四种氚标记核苷一磷酸和四种氚标记核苷二磷酸。     

高比活度脱氧腺苷5′-[α-~(35)S]硫代三磷酸的研究制备

~(35)S标记的脱氧腺苷硫代三磷酸化合物是开展分子生物学和基因工程研究的必不可少的。重要支撑物之一。 关于高比活dATP_α~(35)及前体~(35)S、dAMP~(35)S的制备流程未见报道,而在示踪量制备流程方面的报道仅限于从堆照KCl靶子物的湿法还原-氧化法得到[~(35)S]——元素硫,再制得~(35)SPCl_3,然后合成dAMP~(35)S及dATP_α~(35)S。在高比活及强辐射场下操作时可发现:①若不加载体的高强度~(35)S处在水相、有机相及有氧的条件下,它的化学态难以控制,总是以~(35)SO_4形式存在,故得不     

酶法合成高比度[γ-~(32)P]ATP

本文介绍了用酶促合成制备高比度[γ-~(32)P]ATP的方法及其应用鉴定结果。该法原理是以1-α-甘油磷酸为底物,在其酶促转化为3-磷酸甘油酸过程中,ADP进行底物水平的磷酸化与外源的~(32)P合成[γ-~(32)P]ATP。反应中与酵解速率相适应的NAD~+的再生是由乳酸脱氢酶催化的反应来完成的。酶促合成转化率(相对投料的~(32)P强度)可达90％以上。经高压液相色谱分析,[γ-~(32)P]ATP的放化纯可达95％左右。与英国Amersham产品(>5000Ci/mM)在相同条件下进行比较,结果相同。本方法具有简便、高效,放射性操作少的特点。     

酶促交换法制备[γ-~(32)P]ATP

利用3-磷酸甘油酸激酶及甘油醛-3-磷酸脱氢酶催化,使~(32)中和ATP末端磷酸基进行交换制备[γ-~(32)P]ATP,产品经DEAE-SephadexA-25阴离子交换柱分离纯化。[γ-~(32)P]ATP比度>30 Ci/mM。放化纯度95%,酶促转化率50—60%。柱层析回收率～90%,放化收率>50%。     

国产与进口α-~(32)p-dATP用于HBV DNA探针的对比研究

随着基因工程及分子生物学的快速进展,对检测基因所必需的探针及其应用研究已提到日程上来。为此制备国产的长臂生物质及光敏生物素已作为国家重大课题进行研究。鉴于同位素探针的高度敏感性及特异性,其在国内、外的有关工作中至今仍占有相当的比重。我们在制备~(32)P HBV DNA探针诊断药盒的过程中,对国产的和英国的α-~(32)P-dATP进行对比试验,为     

~(14)C-氯化苦的制备

氯化苦用作粮食的熏蒸杀虫剂,学名:三氯硝基甲烷。~(14)C-氯化苦用于杀虫药剂在粮食中残留毒性的示踪研究。该标记化合物是由~(14)C-碘甲烷与亚硝酸银作用生成~(14)C-硝基甲烷,再进一步与次氯酸钠水溶液在常温下反应而得到的。     

国产与进口α-~(32)p-dATP用于HBV DNA探针的对比研究

随着基因工程及分子生物学的快速进展,对检测基因所必需的探针及其应用研究已提到日程上来。为此制备国产的长臂生物质及光敏生物素已作为国家重大课题进行研究。鉴于同位素探针的高度敏感性及特异性,其在国内、外的有关工作中至今仍占有相当的比重。我们在制备~(32)P HBV DNA探针诊断药盒的过程中,对国产的和英国的α-~(32)P-dATP进行对比试验,为     

双标记样品液体闪烁测量法及使用电子计算机进行数据处理

本文报导了~3H和~(32)P、~3H和~(14)C双标记样品液体闪烁测量法,使用仪器为Beckman LS8100和NE8312液体闪烁谱仪。由双标记样品在仪器不同计数道中计数效率与H-数或外道比值R的关系,推导出计算双标记样品dpm的公式,所得数据用Wang 600型台式电子计算机处理,结果证明:这种测量和计算方法适用于双标记样品,并能得到满意的结果。     

~3H-甲基-胸腺嘧啶核苷-5′-三磷酸的酶促合成

在生命科学的一些基础研究方面,如DNA的复制机制,mRNA的反向转录和遗传工程等,~3H-甲基-胸腺嘧啶核苷三磷酸(~3H-TPP)是一种不可少的标记化合物。~3H-TTP的酶促合成方法是以~3H-TdR作为底物,在ATP和Mg~( )存在的条件下,先后通过TdR激酶、TMP和TDP的激酶作用、酶促磷酸化来合成~3H-TTP。上述各种激酶,可以从不同的来源得到,如Smellie等人是从艾氏腹水细胞中提取;Baugnet-Mahieu等     

麦饭石对溶液中碘、钙、dCTP的吸附行为的研究

一、前言随着分子生物学的发展,核酸、蛋白质等生物大分子的研究工作十分活跃。放射性同位素标记。示踪是分子生物学研究中不可缺少的方法。如用[α-~(32)P」dCTP通过缺口转移标记DNA,研究调钙蛋白时用~(45)Ca示踪,研究蛋白质、多肽、激素时用~(125)I标记。这样在     

以~(18)F-FDG为辅基的~(18)F-氟标记方法研究进展

在核医学分子影像领域用于正电子示踪剂的~(18)F-氟标记方法中,基于含~(18)F-氟中间体分子(即辅基)的方法其反应条件温和、化学选择性好,产物易纯化,是进行~(18)F-氟标记的经典策略之一。2-~(18)F-氟代-2-脱氧-D-葡萄糖(2-~(18)F-fluoro-2-deoxy-D-glucose,~(18)F-FDG)是目前临床最常用的正电子示踪剂,其分子结构简单、亲水性强、易获得,是用于间接~(18)F-氟标记的理想辅基。通过比较其方法学参数,并分析标记产物性能可知,以~(18)FFDG为辅基的间接~(18)F-氟标记方法有酶法、成肟法、巯基连接法、"点击化学"法等,在小分子、肽、酶和纳米粒的~(18)F-氟标记研究中均有报道。此外,微流控芯片等新技术在上述方法中也有应用。与~(18)F-FDG连接可方便地同时实现被标记分子糖基化和~(18)F-氟标记,显著改善标记产物的体内分布和消除特性,虽存在反应步骤多、被标记分子需修饰等局限,但以~(18)F-FDG为辅基进行~(18)F-氟标记仍是一种具有较高可行性和应用价值的间接~(18)F-氟标记策略。     

~(99m)Tc-特丁基异腈的标记及在鼠体内的代谢和分布

本文报道了使用均相配体交换法标记~(99m)Tc-特丁基异腈(~(99m)Tc-TBI)的方法和步骤。其方法是;将0.5—3.0ml的~(99m)Tc-GH溶液与0.2ml的TBI乙醇溶液混合后放入100℃沸水浴中15—30分钟后置室温冷却即可使用。该法标记方便,标记率和放射化学纯度均大于90％,便于临床推广和使用。~(99m)Tc-TBI在大鼠血中清除快,T_(1/2)α为3.7分,T_(1/2)β为63分,给药后30分钟     

液体闪烁体LSPBⅡ与LS二甲苯应用交叉分析报告

应用氚(~3H)标记抗原或抗体的RIA(放射免疫分析)在医学检测中发展很快,受到临床的重视。因抗原或抗体分子中多数含H原子,所以用~3H标记其抗原和抗体的免疫活性、抗原抗体结构不至改变。但~3H属于低能β射线,探测应在液闪条件下进行。目前国内外通常用LS二甲苯(LSX),其缺点毒性大,对水和环境污染严重,对人体健康有害。为了克服这些缺点,本工作在重庆大学研制LSP,LSPB的基础上,探讨毒性小,适合于RIA分析~3H-cAMP(氚标环磷酸腺苷),~3H-cGMP(氚标环磷酸乌苷)的闪烁体。采     

~(99m)Tc-标记尿激酶(血栓显像剂)的研制及动物实验

尿激酶(Urokinase)为自人尿中提取的高纯度的乾冻酶制剂。尿激酶能直接激活体内纤溶酶元,转变为纤溶酶。纤溶酶具有强烈的水解纤维蛋白的作用,从而达到溶解血栓的效果。用~(99m)Tc标记尿激酶后,仍然保持一定的生物活力,将标记物注入到人体后,通过γ照相或闪烁扫描进行显像可以寻找血栓位置。 由于尿激酶不具有抗原性,故不会引起过敏反应,用~(99m)Tc标记尿激酶不仅用于肢体深静脉血栓的诊断,     

~(125)I的绝对测量

一、引言 近年来~(125)Ⅰ用作示踪原子日益增多,特别是在放射免疫试验中用来标记抗原。为确定~(125)Ⅰ标记的抗原或其它~(125)Ⅰ标记物的比放射性,除用相对测量法外,还可用绝对测量法。 ~(125)Ⅰ的衰变方式为电子俘获,其中K层电子俘获占80％,L、M……层电子俘获占20％(图1)。电子被俘获后分别产生特征K-X射线(27.5千电子伏)、L-X射线等,后者能量太小对测量无贡献。核俘获电子后,生成激发态~(125)Te,在回到基态时释放35.5千电子伏的