茶叶多酚氧化酶基因克隆与序列分析

以天然无咖啡碱南昆山毛叶茶、英红9号和福云6号三个茶树品种为研究材料,采用同源克隆法,根据已克隆的植物多酚氧化酶基因的序列分析,设计特异引物,从三个茶树品种中克隆获得多酚氧化酶基因全长,分别编码595、599和597个氨基酸。序列比较分析表明,茶树多酚氧化酶基因的核苷酸序列同源性高于92.6%,氨基酸序列同源性高于94.6%,并包含两个富含组氨酸的铜离子保守区域。      

蓝圆鲹在腌制过程中N-二甲基亚硝胺和N-二乙基亚硝胺的变化规律

研究蓝圆鲹在不同腌制条件下N-二甲基亚硝胺(NDMA)和N-二乙基亚硝胺(NDEA)的变化规律。以蓝圆鲹在腌制过程中产生的NDMA和NDEA为指标,分别考察粗盐和精盐、温度、盐度、干腌和湿腌法对NDMA和NDEA含量变化的影响。结果表明:(1)相同盐度下,粗盐腌制的样品中NDMA和NDEA含量较精盐腌制高;(2)盐度相同时,温度越高,NDMA和NDEA的含量也越高;(3)温度相同时,样品中的NDMA和NDEA含量以盐和鱼质量比1∶5组最高,盐和鱼质量比1∶8组次之,盐和鱼质量比1∶3组最低;(4)采用干腌法腌制时,当腌制时间大于10 d时,所有试验组中NDMA和NDEA含量的峰值均消失;(5)湿腌法比干腌法样品中NDMA和NDEA含量高。因此,为减少腌制产品中NDMA和NDEA的积累,建议采用精盐低温高盐的干腌法进行腌制,并在腌制时间超过10 d NDMA和NDEA含量的峰值降低后进行食用。     

丝氨酸羟甲基转移酶基因的功能表达及其活性鉴定

从大肠杆菌染色体DNA中成功克隆到丝氨酸羟甲基转移酶基因 ,并将其插入表达载体 pET15b中 ,在大肠杆菌中得到了高表达。基因互补实验鉴定了其活性     

O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶与肿瘤

DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)是机体修复烷基加合物的关键酶.该酶结构与功能异常与肿瘤发生、发现、有效治疗及肿瘤耐药性等方面都有着密切的联系,本文综述了近年来的研究进展.     

红曲菌Mn-SOD基因克隆、表达及序列分析

为得到产Mn-SOD工程菌及表达产物,通过设计出红曲菌H4000 Mn-SOD简并引物得到目的基因片段,再设计全长引物利用PCR技术扩增红曲霉Mn-SOD基因的全长序列。经EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ酶切后连接至相同酶切的表达载体pET28a,并转化至E.coli BL21进行诱导表达。克隆得到的基因预测编码152个氨基酸,预测相对分子量为17 kDa。同时,将克隆得到的Mn-SOD基因与NCBI数据库进行比对,发现该序列与橙色红曲霉超氧化物歧化酶(SOD)基因相似度达到99%,与炭疽菌、米曲霉、黄曲霉的Mn-SOD基因也有较高的相似度。通过SDS-PAGE检测蛋白表达情况,目标蛋白相对分子质量约为19 kDa,与预测分子量基本相符。该表达蛋白在pH2.0保温处理1 h,仍具有较高的Mn-SOD酶活。     

氧甲基转移酶编码基因ploy(A)加尾促进粘质沙雷氏菌合成灵菌红素能力研究

粘质沙雷氏菌能在30℃ 高效合成灵菌红素,但在37℃甚至更高温度则丧失合成能力.研究表明,在37℃甚至更高温度下,粘质沙雷氏菌中灵菌红素合成关键酶氧甲基转移酶(O-methyltransferase,PigF)的表达量显著下降.因此,通过人工在pigF基因3′端添加6条不同的poly(A/T)尾来提高pigF基因mRN...     

银杏类黄酮O-甲基转移酶活性的高效液相色谱分析

首次明确了银杏叶片类黄酮生物代谢关键酶O-甲基转移酶(flavonoid O-methyltransferase,FOMT)活性的HPLC测定技术与方法。采集扬州大学银杏种质资源圃银杏雄株成熟叶片,提取粗酶液,根据FOMT催化反应生成S-腺苷-L-高半胱氨酸(SAH)的原理,以山奈酚、槲皮素和异鼠李素等3种黄酮苷元为反应底物,采用优化的HPLC体系检测样品中FOMT催化反应生成的SAH峰面积,通过标准曲线求得不同反应底物的FOMT相对活性。FOMT活性反应生成物SAH在1.5～20μg/mL内呈良好的线性关系,RSD为2.1%(n=5),建立了FOMT活性测定优化体系。不同反应底物的FOMT活性表现不同,山奈酚与异鼠李素显著高于槲皮素。FOMT活性HPLC测定方法准确、快速、可靠、灵敏度高。     

高山红景天中糖基转移酶家族cDNA全长基因的克隆

为了获得高山红景天中红景天苷生物合成关键酶-- UDP- 糖基转移酶家族基因的全长cDNA 序列,采用在线简并引物设计软件结合3′-RACE 技术获得两个糖基转移酶基因的3′端部分序列,进一步采用不同的5′-RACE试剂盒扩增两个基因的5′端序列,结果显示利用Takara 公司的试剂盒扩增可以得到cDNA全长序列(GenBank登录号为EF508689 和EU567325),而采用Invitrogen 公司的试剂盒得到的序列不包括全部开放读码框。实验证明,利用Takara 公司的SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit 克隆获得基因全长序列的比率更高。     

新型甜味剂N-（对氯苯甲基）-阿斯巴甜的制备研究

为制备新型高倍二肽甜味剂,从甜味机理出发,通过钯碳催化和阿斯巴甜分子选择性催化加氢反应方法,以对氯苯甲醛为原料,研究制备新型高倍甜味剂N-(对氯苯甲基)-阿斯巴甜.结果表明,所得产物由于在阿斯巴甜分子上引入了疏水基团"Cl",甜度大大提高,约为蔗糖的1 500倍.     

有机磷化合物与甲基丙烯酰胺复配阻燃真丝织物

采用有机磷化合物二甲基-2-甲基丙烯酰氧基-乙基磷酸酯(DMMEP)、甲基丙烯酰胺(MAA),以及以上2种物质的共混溶液,分别对真丝织物进行常规接枝,经过单因素分析探讨各自最优的接枝工艺。然后对整理后的丝织物做了接枝率、极限氧指数、炭长的测定,并对接枝织物的表面红外进行了表征,且通过扫描电镜对燃烧后残留炭渣的形态结构进行了分析。结果表明,通过对DMMEP和MAA进行复配,真丝织物能够获得非常好的阻燃性能。     

南昆山毛叶茶cDNA文库构建

本研究以天然低咖啡碱茶树品种-南昆山毛叶茶春季嫩稍为材料,采用Stratagene公司ZAP系列试剂盒成功构建了该品种全长cDNA文库.原始文库滴度为6.0×105pfu/ml,重组率为97.3%,1.0～2.0kb的插入片段占整个文库的70%左右,达到一个高质量cDNA文库的要求,文库经扩增后滴度为1.9×109pfu/ml,重组率达到99.1%.     

Subacute oral toxicity of cocoa tea (Camellia ptilophylla) water extract in SD rats

Camellia ptilophylla, known as cocoa tea, is a natural decaffeinated tea plant which has been proved with potential bioactivities. This study was carried out to evaluate the safety of green cocoa tea water extract (CWE) by determining its potential toxicity after subacute administration in SD rats. In the subacute toxicity study, oral administration of CWE up to 800 mg kg^?1 body weight day^?1 for twenty‐eight consecutive days did not cause either mortality or toxicity in SD rats, regardless of gender. There were no adverse effects in body weight, food consumption, relative organ weight, haematological parameters, clinical chemistry, gross pathology and histopathology between treatment and control groups. Several parameters (e.g. neutrophils%, Ca²⁺, total Ca) in CWE‐treated rats with high dosage were significantly different from the control groups, but still in a safety level. A dose of 800 mg kg^?1 day^?1 was identified as the no observed adverse effect level (NOAEL) in this study.     

CODEHOP法设计引物克隆色盐杆菌ST307胆碱脱氢酶基因及其序列分析

目的研究色盐杆菌ST307甜菜碱的合成,克隆分析其胆碱脱氢酶betA基因片段。方法采用醇提法提取色盐杆菌ST307中的甜菜碱并检测,用CODEHOP在线程序设计简并引物扩增胆碱脱氢酶betA基因序列,并进行序列分析。结果色盐杆菌ST307细胞中积累甜菜碱,通过PCR获得长度为485 bp的betA基因片段。BLAST序列分析显示该基因序列与多个菌株的betA基因序列具有较高的同源性,最高达83%。核苷酸序列比对及进化树构建结果显示,色盐杆菌ST307胆碱脱氢酶基因序列与Pseudomonas fulva 12-X进化关系最为接近。结论 CODEHOP法设计的简并引物可信性较强,同时betA基因片段的成功克隆将为获得ST307胆碱脱氢酶基因的全序列、研究耐盐机制和遗传改良提供科学依据。     

南昆山毛叶茶对tBHP诱导损伤NIH3T3细胞的保护效果

本研究以南昆山毛叶茶为材料,探讨其水提物对叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,tBHP)诱导小鼠成纤维细胞NIH3T3氧化损伤的保护作用.以tBHP诱导NIH3T3细胞建立氧化损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,...     

烟草法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及序列分析

采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,以烟草品种K326叶片总RNA为模板扩增出烟草法呢基焦磷酸合酶基因fps,克隆至载体PMD19-T中。序列分析表明,所克隆的cDNA序列全长702 bp,共编码234个氨基酸残基,其核酸序列与玉米、杜仲、拟南芥、青蒿、Nicotiana sanderae×Nicotiana langa-dorffii杂交种的法呢基焦磷酸合酶基因的核酸序列同源性分别为74%,76%,77%,80%和97%。     

苦荞麦主要过敏蛋白N端基因片段的克隆及序列分析

为了获得苦荞麦主要过敏蛋白全长基因并深入开展苦荞过敏蛋白的研究,本实验在先前获得的苦荞麦主要过敏蛋白C端(TBa)基因序列的基础上,设计不同的引物,以开花20d左右的苦荞麦果实为材料提取总RNA,并以此RNA为模板,通过RT-PCR和5’-RACE等方法,扩增,克隆获得苦荞麦主要过敏蛋白N端(命名为TBb)cDNA序列。序列分析结果表明,该序列由1005bp组成,开放阅读框为960bp,可编码一个由320个氨基酸残基组成的功能蛋白。同源性分析显示,此核苷酸序列与甜荞麦过敏性贮藏蛋白及豆球类蛋白的同源性达到90%。由此核苷酸序列推导出的氨基酸序列与甜荞麦13S贮藏蛋白有84%的同源性,与甜荞麦主要过敏蛋白有76%的同源性。苦荞麦主要过敏蛋白N端基因的获得为该蛋白的重组表达及其生物学活性等研究建立了前期基础。     

2种山葡萄白藜芦醇合酶基因的克隆与序列分析

目的:白藜芦醇合酶(resveratrol synthetic enzyme,RS)是植物白藜芦醇合成途径中的关键酶,为获得高效表达的白藜芦醇合酶基因,方法:利用已知的葡萄RS基因(AF274281)序列设计并合成一对引物,以2种不同来源的山葡萄叶片基因组DNA为模板,PCR扩增包含RS完整基因在内的一段序列;在此基础上采用悬挂延伸PCR法分别克隆目的基因。结果:测序与序列分析表明,RS全长基因片段大小均为1 536bp,其中包含一个内含子及两个外显子,同源性比较,其内含子碱基变化较大。悬挂延伸PCR法克隆获得的目的基因,开放读码框分别为1 170 bp和1 182bp,编码389/392个氨基酸残基,命名为CNRS1、CNRS3。同源性比较发现,CNRS1、CNRS3与已知葡萄RS基因序列的同源性分别为98%、97.5%。结论:以上结果证实CNRS1、CNRS3属葡萄RS基因家族成员,为今后进一步对该基因的研究与利用打下了基础。     

凝乳酶的基因克隆、序列分析及初步表达

PCR扩增得到微小毛霉凝乳酶结构基因并测定其核苷酸序列，用DNAman软件分析其核苷酸序列及推衍得到的多肽序列，结果表明扩增得到的片段为凝乳酶基因。构建了重组菌Pichia pastoris KM71／PIC9K-mcp，通过G418抗性筛选得到具有多拷贝基因的整合重组菌MK3。用甲醇诱导进行初步发酵试验，测得重组菌MK3酶活为5．4U／ml。     

Studies on fatty acid composition in tea Camellia sinensis

The proportions of fatty acids, viz lauric, myristic, palmitic, oleic, linoleic, and linolenic, in tea leaf, Camellia sinensis (L) O Kuntze, were determined at different stages of manufacture as well as in Mack tea. No significant variations were observed in the fatty acid contents of three major cultivars, Assam, China and Cambod. However, some variations were noticeable in leaf cropped in different months. Manufacturing stages have a pronounced effect on the relative proportions of the various fatty acids. Monthly distribution of total lipid was also followed in tea leaf, and the pattern of variation observed was identical for all the three cultivars.