白腐真菌产锰过氧化物酶的研究

以锰过氧化物酶活性为评价指标,研究各种因子对白腐真菌生长及产锰过氧化物酶的影响。结果表明:藜芦醇、苯甲醇和吐温80的添加有利于促进白腐真菌的生长及产锰过氧化物酶活性,在浓度分别为150mg·L-1、150mg·L-1、14mg·L-1时对白腐真菌生长及产锰过氧化物酶促进作用最好;Ca2+、Fe2+对白腐真菌生长及产锰过氧化物酶活性的影响是一致的,均表现为"先促进,后抑制"的作用;Cu2+浓度小于0.4mg·L-1时能略微促进白腐真菌的生长及产锰过氧化物酶活性,大于该浓度时具有较明显的抑制作用。     

不同培养条件对云芝(Coriolus versicolor)木质素降解酶产酶影响的研究

本文研究了不同培养条件对云芝（Coriolusversicolor）三种木质素降解前产酶的影响，发现三种木质素降解酶即水质素过氧化物酶（Lip）、赖锰标木质素过氧化物酶，（Mnp）和漆酶的产生和培养条件关系很大，添加黎芦醇（VOH）能显著地提高三种酶的产量，当VOH浓度为1mmol／L时，可使木质素过氧化物酶产量提高10倍，添加Mn2＋对赖锰木质素过氧化物酶有促进作用，但对木质素过氧化物酶有抑制作用。提高其它微量元素（Cu2+，Fe2+,Zn2+，Ca2+）等同样能显著促进三种酶的产生。采用30信浓度时，赖锰木质素过氧化物酶的量要比1培浓度时提高6倍。三种酶的最适产酶pH相差很大，木质素过氧化物酶在pH4．5～5．5左右，赖锰木质素过氧化物酶在PH5．5～6.5左右，而漆酶则抵达pH3．5～4．0．Tween80在低浓度时（0.01％-0.02％）有一定的促进作用，而在高浓度则有抑制作用。C／N比则是影响产酶的另一因素，低碳培养基比低氮培养基更适宜三种木质素降解酶的产生。同时，在低氮培养基和低碳培养基下，上述因素对三种酶产生的影响也存在显著差异。这有可能是云芝的木质素降解酶在不同的C／N下其产生机理存在差异。     

固体培养条件下外加营养碳源及微量元素对贝壳状革耳菌酶系产生的影响

研究了固体培养条件下外加营养碳源葡萄糖及土豆汁 ,微量元素Cu2 + 、Mn2 + 对贝壳状革耳菌产木素降解酶、纤维素酶和半纤维素酶的影响。结果表明 ,营养碳源和微量元素对贝壳状革耳菌漆酶的产生有显著的促进作用 ,外加碳源土豆汁要比外加葡萄糖所产生的促进作用大。对于依赖锰过氧化酶、CMC酶和半纤维素酶 ,外加营养碳源和微量元素对其产生无明显影响 ,而微晶纤维素酶在各个固体培养过程中都未检测到。     

Cu~(2+)修饰低固载量固定化漆酶的活性研究

由于漆酶这种生物蛋白酶有容易变性失活且不可重复使用的特性,限制了漆酶的应用和发展。因此如何提高漆酶的活性,稳定性以及重复使用性尤为重要。本文采用交叉偶联技术,将漆酶固定在具有核壳结构的磁性纳米粒子Fe3O4/SiO2上,并研究了用Cu2+修饰后的低固载量固定化漆酶的活性变化以及修饰后固定化漆酶的稳定性。实验结果显示:Cu2+修饰后的低固载量固定化漆酶的相对活性提高了54%;而且在温度不太高的情况下,修饰后的低固载量固定化漆酶的相对活性优于修饰前的固定化漆酶;修饰后的固定化漆酶降解浓度为10mg·L-1的普施安染料,重复利用13次后降解率仍然可以达到92%。     

氮源浓度和芳香化合物对白腐菌Panus conchatus产木素降解酶的影响

白腐菌Panusconchatus只分泌锰过氧化物酶和漆酶，不分泌术素过氧化物酶，该菌分泌这两种酶的能力大大高于同样培养基条件下的Pleuronssajor-caju。氮源浓度对Panusconchatus分泌术素降解酶的能力有显著影响，高氮条件可能是这种类型的白腐菌生产木素降解酶的必要条件。研究不同芳香化合物对Panusconchatus木素降解酶分泌情况的影响发现，紫丁香醇和香豆酸对其锰过氧化物酶和漆酶分别起显著的诱导作用。     

Cu2+改性SBA-16固定化漆酶的研究

以介孔分子筛SBA-16为载体,用浸渍法将Cu2+负载于SBA-16上制备了Cu/SBA-16,然后用吸附法固定化漆酶,以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐为底物考察了漆酶的最适pH值、固定化体系中的载酶量以及Cu2+对固定化漆酶活性的影响。结果表明,在p H值为3时,漆酶具有较高的活性;固定化漆酶的活性随着酶和载体质量比的升高先快速升高然后趋于稳定,当酶和载体质量比为96 mg/g时,固定化漆酶的活性达到较高值;负载Cu2+后,Cu/SBA-16固定化漆酶的活性与Cu2+负载量呈现一定的正相关性。     

白腐真菌Hyprocrea lixii AH的产酶特性研究

为了确定白腐真菌(H.lixii AH)在SMA培养基中的最佳产酶条件,利用正交试验研究了藜芦醇、Cu2+以及表面活性剂(吐温)的用量对真菌H.lixii AH生长和产酶的影响.发现吐温80和低浓度Cu2+对真菌的生长有促进作用,过氧化物酶和多酚氧化酶受Cu2+影响最大,优选浓度均是0.2g/L.LiP、MnP和Lac...     

漆酶催化儿茶素及儿茶酚合成黑色素的研究

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,具有广泛的底物催化性。在漆酶的介导下对不同酚类底物合成带色产物进行了研究,发现儿茶素和儿茶酚能够合成黑色素。重点研究了黑色素合成的影响因素:底物的比例对黑色素的影响很大,1∶1为最佳比例;光照对黑色素的合成几乎无影响;漆酶活力越高对反应越有利;不同来源的漆酶催化反应的最适温度和最适p H不同;有机溶剂乙醇、正丙醇、正丁醇和丙酮对黑色素合成有促进作用,而有机溶剂甲醇和异戊醇又起抑制作用;金属离子Na+、Mn2+、Mg2+、Sr2+、K+有一定的抑制作用,并且浓度越高抑制作用越强,而加入Cu2+、Fe2+、Fe3+时分别产生青灰色、绿色、灰黑色沉淀,没有黑色素生成;底物浓度对黑色素合成的影响呈钟形,0.1 mol/L最适宜;震荡有利于漆酶催化黑色素的合成。通过漆酶合成的黑色素有望用于改进染发剂的配方。     

灰树花漆酶的酶学性质及其脱色作用研究

通过对液体发酵灰树花漆酶的酶活、Km常数、温度和p H值的测定,探讨了Cu2+、Fe3+、Ca2+对漆酶酶活的影响,观察了漆酶对5种染料的脱色作用效果。结果表明:灰树花发酵液中漆酶氧化ABTS的Km为1.35×10-5mol·L-1,在p H值2~6的范围内均表现酶活,最适p H值为3.0,在25~70℃温度时范围内均有酶活,在50~55℃时酶活性最高。Cu2+、Fe3+、Ca2+对漆酶的活性均有抑制作用,Ca2+离子的抑制作用较弱。灰树花漆酶对甲基橙、甲基红、溴甲酚绿、甲基蓝和亚甲基蓝染料的脱色率分别为85.77%,81.10%,72.68%,22.02%和4.22%。介体ABTS对漆酶处理甲基蓝的脱色有促进效果,而对亚甲基蓝、溴甲酚绿和甲基红的脱色促进效果较弱,对甲基橙的脱色无促进作用。结论:本研究中灰树花漆酶最适p H值为3.0,在50~55℃时酶活性最高;灰树花漆酶对甲基橙、甲基红、溴甲酚绿染料的脱色效果理想。     

金属离子对纤维素酶内切酶和外切酶活性的影响

金属离子可以影响纤维素内、外切酶的活性,且不同金属离子对其活性影响程度也不同。据此,本实验选取三种纤维素酶进行单因素实验,对其内、外切酶活性进行研究。实验结果表明,当金属离子的质量浓度为:K+0.9 mg/mL,Ca2+0.3 mg/mL,Zn2+1.2 mg/mL,Cu2+1.2 mg/mL,能较好地提高纤维素内切酶活;而Mg2+﹑Ca2+﹑Ba2+﹑Cu2+﹑Zn2对纤维素外切酶活都有抑制作用;Al3+对纤维素内、外切酶活都有抑制作用;不同价态阴离子对纤维素内、外切酶活影响不大。     

碳源和Mn(Ⅱ)对白腐菌Panus conchatus产木素降解酶的影响

研究了碳源及二价锰离子Mn（Ⅱ）对白腐菌Panusconchatus产木素降解酶的影响。结果表明碳源的种类对标过氧化物酶（MnP）和漆酶（laccase）产生的影响有明显的差异。Mn(Ⅱ）对P．conchatusMnP和laccase的产生有明显调节作用。不加Mn(Ⅱ)条件下,P.cochatrus几乎不分泌MnP,而laccase在木素降解醇中占据了主导地位。加入并提高Mn（Ⅱ）浓度,MnP活力随之提高,而laccase活力却相应降低。     

糙皮侧耳菌漆酶的分离纯化及部分性质研究

对糙皮侧耳菌5.42产生的漆酶粗酶液通过超滤浓缩、DEAE-Cellulose和SephadexA-50纯化,得到纯化18.1倍漆酶,得率36%,用PAGE检测为单一条带,用SDS-PAGE证明漆酶的分子量为61.4 kD,而用经过高效液相色谱分离的酶液进行质谱检测分子量为60.5 kD。该酶最适温度为40℃,最适pH为5.0。金属离子对酶活有很大的影响,其中K+、Mn2+、Cu2+有明显促进作用,Hg2+、Ag+、Ba2+等对酶活有明显的抑制作用。该酶与果胶酶按比例组合在一起,对荨麻生物脱胶取得良好的脱胶效果——木质素去除率为85%。     

白腐菌对活性艳红的降解研究

白腐真菌是一类丝状真菌,由于能分泌漆酶(Lac),锰过氧化物酶(Mn P)和木质素过氧化物酶(Lip)在废水处理方面有着广泛的应用。本实验初步探究了白腐菌对不同浓度活性艳红的脱色效果,实验结果表明活性艳红浓度在10-60 mg/L的浓度下并没有引起白腐菌毒性,并且白腐菌对活性染红的脱色主要有菌丝体的吸附和酶的降解两方面的作用。     

Fe_3O_4\SiO_2纳米粒子担载的固定化漆酶的稳定性和普施安染料的脱色研究

漆酶是一种生物蛋白酶,容易变性失活且有不可重复使用的特性,限制了漆酶的应用和发展。因此,如何提高漆酶的稳定性和重复使用性尤为重要。本文采用交叉偶联技术,将漆酶固定在具有核壳结构的磁性纳米粒子Fe3O4/SiO2上,探讨了密闭条件下热处理对固定化漆酶热稳定性的影响,及固定化漆酶降解不同浓度普施安的活性。结果表明:Fe3O4\SiO2纳米粒子担载的漆酶经70℃热处理后,仍有70%的活性,表现出良好的热稳定性;固定化漆酶对不同初始浓度普施安的脱色反应,符合一级反应。     

重组蛹虫草超氧化物岐化酶脱辅基蛋白的表达、纯化及其活性重建

目的表达并纯化重组蛹虫草超氧化物歧化酶脱辅基蛋白,并考查各种金属离子对其活性重建的作用。方法用不含Cu2+和Zn2+的培养基培养重组菌株,并表达重组蛋白,采用DEAE-FF和CM-52进行纯化;在脱辅基蛋白溶液中加入Cu2+、Mn2+、Mg2+、Ni2+或Ag+,测定SOD酶活力的变化。结果蛹虫草脱辅基Cu,Zn-SOD在不含Cu2+和Zn2+的培养基中得到表达,纯化后的样品经SDS-PAGE分析,在相对分子质量17000处出现单一条带,经活性电泳分析无酶活力;脱辅基蛋白活性重建的最适宜Cu2+浓度为0.005mmol/L,但其紫外吸收图谱与天然SOD不同;0.1mmol/L的Mn2+、Mg2+、Ni2+、Ag+重建的酶活力远低于Cu2+重建的cm-SOD的酶活力。结论已成功表达并纯化了蛹虫草脱辅基Cu,Zn-SOD,各种金属离子只能有限地重建脱辅基Cu,Zn-SOD的活性。     

灵芝超高压突变株漆酶的纯化和酶学性质

灵芝超高压突变株G1502的发酵液经浓缩、DEAE-纤维素柱层析,纯化出一种漆酶。其最适作用温度为45℃,在不高于45℃的条件下保存5 h,残余酶活在97%以上;最适pH为4.4,在pH=3.8~6.6内保存,残余酶活在80%以上。漆酶催化愈创木酚的υmax和Km分别为2.28μmol.L-1.min-1和1.94×10-4mol.L-1。金属离子K+和Cu2+对酶有激活作用,Fe2+、Co2+、Ca2+、Na+、Ba2+对酶活有很大的抑制作用。     

漆树漆酶催化单宁酸的氧化反应研究

用分光光度法考察漆树漆酶催化单宁酸的氧化情况,探讨了pH值、反应温度、单宁酸浓度、有机酸和金属离子等对催化反应的影响.结果表明,当反应温度为30℃时,漆树漆酶催化反应效果较好;在pH值为4.2～ 9.8的范围内,反应速率随pH值增大而加快;单宁酸浓度在1.47×10-5 ～ 2.94×10-4 mol·L-1时,反应速率随底物浓度的增大呈线性增加;Cu2 、Mg2 和Ni2 三种金属离子对催化反应有激活作用,其中Cu2 影响最大;而柠檬酸和乙二胺四乙酸对酶催化反应均有抑制作用.     

氮源浓度和芳香化合物对白腐菌Panus conchatus产木素降解酶…

白腐菌Ｐａｎｕｓｃｏｎｃｈａｔｕｓ只分泌锰过氧化的酶和漆酶，不分泌木素过氧化物酶。该菌分泌这两种酶的能力大大高分子同样培养基条件下的Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｓａｊｏｒ－ｃａｊｕ。氮源浓度对Ｐａｎｕｓｃｏｎｃｈａｔｕｓ分泌木素降解酶的能力有显著影响，高氮条件可能是这种类型的白腐菌生产木素降解酶的必要条件，研究不同芳香化合物以Ｐａｎｕｓｃｏｎｃｈａｔｕｓ木素降解酶分泌情况的影响发现，紫丁胺醛和香豆酸对其锰过     

黄孢原毛平革菌选择性合成木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶

在黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)的限氮浸没式培养中，研究了不同条件对选择性合成木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)的作用. LiP只在很窄的氮源浓度范围内(0.8~1.8 mmol/L)才能测到，而MnP在较宽浓度范围内(0.4~1.8 mmol/L)表现出较高的酶活水平. 培养基中缺乏Mn2+不能合成MnP，但可以得到活力较高的LiP. [Mn2+]在0.06~0.84 mmol/L时可获得LiP. 添加微量Mn2+即可获得较高活力的MnP，此后增加Mn2+对MnP的活力影响不大，直至浓度为3.36 mmol/L才表现出明显的抑制作用. 通纯氧可使LiP活力提高50%，但对MnP影响不大.     

白腐菌预处理对稻草化学组分及酶水解的影响

采用5株白腐菌预处理稻草,对预处理过程中产生的木质纤维素降解酶系以及稻草化学组分变化进行了分析,研究了预处理对后续纤维素酶水解效率的影响。研究结果表明,5株白腐菌在预处理期间(0~50天)均能检测到漆酶(Lac)、锰过氧化物酶(MnP)和纤维素酶(Cel)活性,但未检测到木质素过氧化物酶(LiP)活性。其中凤尾菇培养第20天Lac活性达到最高,为2244 U/L;平菇培养40天MnP活性最高,达771 U/L;凤尾菇和平菇的木质素降解选择性指数(SI)随着预处理时间延长呈上升趋势,培养至50天时平菇的SI达到1.87,比其它4株白腐菌表现出更好的选择性降解木质素能力。云芝4号、平菇和凤尾菇表现出良好的预处理效果,经此3菌株预处理50天的稻草粉,在每克底物20 FPU酶用量条件下用纤维素酶水解48 h,酶水解总糖转化率分别达到59.6%、56.3%和54.4%。