以CXCR4为靶点的抗HIV药物研究进展

趋化因子受体CXCR4是HIV进入宿主细胞的辅助受体之一,在HIV进入免疫细胞过程中起着重要作用。以CXCR4为靶点的新型抗HIV药物的设计与开发已成为抗艾滋病研究领域的一个热点课题。综述了CXCR4抑制剂在抗HIV治疗领域中的研究进展。     

一类时滞HIV模型的Hopf分支

研究了一类带时滞的HIV病毒的CD4＋细胞模型及它的平衡点的稳定性,当该模型满足一定条件时,它的平衡点稳定,当平衡点不稳定时研究了Hopf分支的存在性.     

阻断HIV-1进入细胞的抑制剂研究

为了解决HlV-1病毒耐药的难题,研究阻断病毒进入细胞的抑制剂是一个重要途径,通过对近年来国 内外学者在阻断HIV-1病毒进入宿主细胞的抑制剂方面所发表的文献进行分析,概述了阻断HIV-1病毒进入宿主细胞的抑制剂的研究进展．阻断病毒进入细胞的抑制剂具有强大的抗逆转录病毒作用,它的优势在于可以对抗目前所有的HIV-1耐药毒株,它分为阻断病毒与细胞吸附的抑制剂、阻断病毒进入的抑制剂及阻断病毒与细胞融合的抑制剂．提出了研究抑制剂时可考虑的几个不同靶点．     

猪CD163瞬时转染CHO-K1超表达细胞模型的构建及鉴定

猪CD163基因的基因组包括16个内含子、18个外显子,其相关蛋白产物是血红蛋白-触珠蛋白清除剂并可作为病原体受体,在介导感染、维持细胞内环境稳态等方面具有重要功能.本研究旨在构建猪CD163瞬时转染仓鼠卵巢上皮细胞系CHO-K1的超表达细胞模型并对其进行鉴定,以期为CD163分子功能的深入研究奠定基础.研究首先构建p...     

哌啶基氯代苯甲酰胺非肽类小分子的合成及表征

在介导HIV进入细胞受体的过程中,非肽类小分子具有重要的药理学意义,开发具有高活性、高选择性及良好药代动力学性质的新药已成为研究的热点,该类小分子具有氯原子、苯甲酰胺、哌啶等活性基团而备受关注.本文合成了哌啶苯甲酰胺的邻对位二取代、对位以及邻位氯化物(7);通过(7)、1-(对氯苯甲氧基)-2-溴甲基-4-溴苯(3)合成了三种新的哌啶基氯代苯甲酰胺类非肽类小分子8a-8c,对三种氯代苯甲酰胺进行了生物活性检测及IR、MS、1H NMR表征.结果表明N-乙基-4-氯-N-(N-(2-对氯苯甲氧基-5-溴苯甲基)-4-哌啶基)苯甲酰胺8a具有较好的生物活性.     

CDld基因稳定转染Panc-1细胞系的建立

实验采用PCR法获得CD1d基因片段,将其插入慢病毒pReceiver-Lv201载体（带GFP荧光）中获得EX-S0249-LV201重组质粒,经转染试剂EndoFectin-Lenti转染到293T细胞中获得慢病毒LP-S0249-LV201,用包装获得的慢病毒感染胰腺癌Panc-1细胞,在不同时间段用倒置荧光显微镜观察绿色荧光,并用反转录酶聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法验证获得的表达细胞株.实验结果显示经RT-PCR和Western blotting检测证实慢病毒LP-S0249-LV201 转染至Panc-1细胞株后,该细胞株表达CD1d基因和蛋白,成功建立了稳定表达CD1d基因的Panc-1细胞系,为进一步研究CD1d基因在胰腺癌免疫基因治疗中的作用奠定基础.     

携带全长抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b—Anti—CD20载体构建与表达研究

构建Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒载体并探索该腺病毒在体外表达全长抗体的能力.合成部核糖体进入位点(IRES)序列,将其与美罗华抗体重轻链连接,克隆到pDC338质粒载体上,并与以11b型腺病毒(Ad11b)Fiber替代5型腺病毒(Ad5)Fiber的嵌合型腺病毒骨架质粒pAd5F11b进行重组,获得Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒.将鉴定正确的病毒空斑感染293细胞,ELISA检测其表达水平以及间接免疫荧光检测该病毒表达抗体的特异性.结果表明,嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20在293细胞中的表达量高达3.78 μg/ml±0.30 μg/ml,间接免疫荧光(IFA)显示该病毒表达的抗体只与CD20+的Raji细胞有特异性结合,而与CD20-的Molt-4细胞无结合能力.成功构建了高效表达抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20.     

抗PD-L1CAR基因的构建及CAR-T的功能活性研究

鉴于嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cells,CAR-T)疗法应用于肿瘤治疗的临床试验已取得很大突破,设计了程序性死亡配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)特异性CAR-T细胞以体外杀伤肺癌细胞。通过克隆表达PD-L1_((73-739)),并纯化PD-L1蛋白以免疫BALB/c小鼠制备获得PD-L1单克隆抗体;克隆PD-L1单克隆抗体单链可变区片段,与CD28、4-1BB、CD3-ζ链的基因体外融合构建第三代CAR基因,并克隆于慢病毒载体pCDH-CMV-EF1-copGFP上,包装成慢病毒。该慢病毒感染CD~(8+)T细胞,扩增5d,测定CAR的表达,表达率可达到22%以上。PD-L1靶向的肿瘤细胞杀伤作用分析显示,抗PD-L1CAR-T细胞有一定的体外杀伤活性。     

马传染性贫血病毒膜蛋白基因的改造及其在真核细胞中的表达

以马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)天然膜蛋白基因(gp120)为基础设计的DNA疫苗在马体内的表达量很低,这与密码子使用偏嗜性、RNA剪切位点多和导致RNA不稳定性的腺苷丰富区的大量存在有关.为解决这些问题,合成了EIAV gp120基因(Syn-env),使其密码子偏嗜性符合高水平表达的哺乳动物基因.EIAV弱毒疫苗的制备过程中,出现了几个重要而稳定的N-糖基突变住点,以Syn-env为基础,运用重叠延伸PCR定点突变策略获得了6个具有不同N-糖基缺失组合的gp120基因.将突变后的基因克隆到真核表达载体pVRCSV1.0,然后转染Hela细胞,发现这些重组质粒均获得了表达.进而为比较6种质粒诱导机体免疫保护效果,阐明EIAV弱毒疫苗减毒机理奠定了基础.     

H5N1禽流感病毒蛋白对1F1TM基因家族转录的影响

干扰素诱导的跨膜蛋白(Interferon induced transmembrane protein,简称IFITM)通过抑制病毒进入细胞来保护细胞,使其免受多种病毒的感染。为了鉴定H5N1病毒本身和结构蛋白是否作为IFITM基因的新调节因子,通过试验探讨了H5N1病毒和结构蛋白对IFITM基因家族转录的影响。结果显示,H5N1病毒的NS1、M1、NP和PB2蛋白在A549细胞中增加了IFITM1、IFITM2和IFITM3表达,对HEK293T细胞没有影响,在HEK293T细胞和A549细胞上,没有发现H5N1病毒的HA和NA蛋白影响IFITM基因家族表达。即在H5N1禽流感病毒感染期间,NS1、M1、NP和PB2蛋白的过表达可以直接刺激IFITM1、IFITM2和IFITM3的上调,而呼吸系统的上皮细胞可能首先被影响,特别地,NP和NS1显示对IFITM基因家族的表达显示更显著的作用。     

恩曲他滨的合成工艺优化

为满足临床对HIV药物的需求,优化了HIV核苷类逆转录酶抑制剂恩曲他滨的合成工艺。以苯甲酸钠和溴乙醛缩二乙醇为原料,经五步反应,即缩合、缩醛水解、脂肪酶Novozyme 435催化环化和酰化,合成中间体（2R, 5S）-2-苯甲酰氧甲基-5-乙酰氧基-l, 3-氧硫杂环戊烷,然后将其进行偶联、水解反应得到99.7%纯度的恩曲他滨,总收率为51.3%。制备的化合物通过核磁共振氢谱（1H NMR）以及核磁共振碳谱（13C NMR）确证。与已有工艺相比,本合成工艺具有安全性好、收率高、成本低的特点,易于生产出符合原料药质量标准的产品。     

HIV检测方法研究进展

获得性免疫缺陷综合症简称艾滋病(AIDS),是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一种严重的传染性疾病.本文综述了目前HIV的检测方法,包括免疫学方法?分子生物学方法以及基因芯片技术的应用.     

HIV-1整合酶活性检测方法的研究进展

HIV-1整合酶介导病毒DNA与宿主染色体的整合,是病毒复制周期中必不可少的环节,抑制整合酶能有效阻止病毒在体内复制.同时,人体细胞中无整合酶的功能类似物,因此,整合酶是抗HIV-1的理想靶点.近年来,整合酶活性的体外检测方法得到快速发展,并广泛应用于整合酶活性检测、反应机理研究及整合酶抑制剂的体外筛选等研究中.本文综述了整合酶活性检测方法的研究进展.     

APOBEC 家族的功能研究进展

APOBEC是人体内具有胞嘧啶脱氨酶活性的家族，共11个成员，是人体的天然防御者。 APOBEC通过与DNA和RNA结合，使底物上的胞嘧啶C脱氨基，可完成其各自不同的功能。 APOBEC1编辑载脂蛋白B的mRNA，AID在抗体成熟中的体细胞超突变和类别转换重组中起关键作用，APOBEC3可抑制反转录病毒复制，而APOBEC2和APOBEC4的功能还不完全清楚。采用文献综述法，比较分析近年来国内外关于APOBEC家族各成员的结构和功能研究的新进展，为进一步研究APOBEC家族的抗病毒功能和艾滋病等疾病的治疗提供参考。     

多酸化合物的药学应用进展

介绍了多金属氧酸盐化学的发展过程,综述了多酸化合物的药学应用进展,包括其在抗艾滋病（HIV）、抗肿瘤、抗病毒等方面的研究情况.同时,展望了未来多酸药学应用研究的主要领域及亟需解决的关键问题.     

UOP连续重整装置大型化的新技术

随着国内连续重整装置的大型化,基于大型装置的连续重整技术得到日益完善。目前国内引入较多的是UOP连续重整装置新技术。从并列式反应器布置、再生烟气氯吸收（Chlorsorb）技术、冷态催化剂提升系统和闭锁料斗压力控制等方面对新技术和传统技术进行了比较,展示了新技术的优越性。     

无煤柱分阶段沿空留巷煤与瓦斯共采方法与应用

针对深井高瓦斯低透气性煤层群的典型赋存特征,结合淮南矿区千米深井无煤柱煤与瓦斯工程实践,提出了改进Y型通风模式,即分阶段沿空留巷方法,完善了对共采工程的维控预应力锚固技术.工程实践表明:预应力锚固技术可以实现深井强动压开采过程中对沿空留巷和回风巷道围岩稳定的有效维控,至第1阶段结束,留巷顶板下沉量为144mm,两帮移近量为351mm,分阶段沿空留巷对共采巷道的维护时间缩短了4/5.减少了留巷变形速度稳定后累计变形的不利影响.超前工作面布置的瓦斯抽采工程中,单孔抽采瓦斯浓度(体积分数)达到40%,实现了煤与瓦斯共采.     

Research on Dynamic Model of the Human Body

After summarizing the current situation of the research on human body modeling, a new dynamic model containing 5 equivalent masses has been proposed and the corresponding dynamic equations has been deduced too. By using this new model, more detailed information about the situation of the human body under impact and vibration can be obtained. The new model solves the problem that transmission functions of forces inside the human body can‘t be deduced by using 3-equivalent-mass model. It will find its usage in many applications.     

计算机病毒检测的探索—程序自保持检测法

根据计算机病毒的特性，在程序正确性理论基础上，本文提出了有关计算机病毒的推论：某一特定的程序运行环境。如果未被病毒侵入，当工仅当程序语义的自保持性未被破坏，并给出了新的程序语义自保持测试定理，建立了计算机病毒检测的方法──程序自保持法．