联合补充维生素D、胶原肽和钙对成骨细胞发育的影响

目的:观察联合补充维生素D、胶原肽和钙对MC3T3-E1成骨细胞增殖及对骨保护素细胞内核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)、骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)基因表达的影响。方法:α-MEM培养基培养MC3T3-E1细胞。检测Ca~(2+)(20μg/m L)、维生素D(0、10-12、10-11mol/L)、胶原肽(0、50、100μg/m L)三者交互作用剂量对MC3T3-E1细胞增殖的作用及RANKL、OPG mRNA表达。结果:维生素D、胶原肽和钙交互剂量作用下细胞增殖水平无明显差异。维生素D联合钙能够明显降低RANKL mRNA表达水平,提高OPG mRNA表达水平,降低RANKL/OPG比值。而胶原肽联合钙对RANKL以及OPG mRNA表达无明显影响。结论:维生素D联合钙可通过抑制小鼠成骨细胞RANKL mRNA表达、促进OPG mRNA表达,从而促进骨的形成,抑制骨的吸收。维生素D和钙联合补充胶原肽,对成骨细胞RANKL,OPG mRNA表达并无明显影响。     

鲫鱼卵唾液酸糖肽对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化及OPG/RANKL基因表达的影响

目的:研究鲫鱼卵唾液酸糖肽(Ca-SGPP)对成骨细胞MC3T3-E1骨形成活性及OPG/RANKL基因表达水平的影响。方法:在MC3T3-E1细胞中加入不同浓度的Ca-SGPP,采用MTT法、试剂盒和茜素红染色法检测Ca-SGPP对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响;利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测MC3T3-E1细胞骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、骨保护素(OPG)及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因m RNA表达水平。结果:Ca-SGPP可显著促进MC3T3-E1细胞增殖及ALP、OCN和COL I的分泌,提高MC3T3-E1细胞矿化能力,上调其BMP-2表达水平及OPG/RANKL的比值,且分子质量大的糖肽效果更佳。结论 :CaSGPP具有促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的能力,其机制可能与OPG/RANKL比值上调有关。     

虾肽对MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的:从红虾副产物中提取虾肽,研究其促MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化及矿化的活性。方法:用MTT法检测不同浓度虾肽对MC3T3-E1成骨细胞存活率的影响;诱导成骨细胞分化,在3 d和7 d时,测定其碱性磷酸酶(ALP)活性,在7 d和14 d时,测定其细胞骨钙素(OCN)及Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)含量,21 d时茜素红染色测定细胞诱导培养矿化程度;采用qPCR和Western blot方法检测虾肽对OPG/RANKL/RANK信号通路中骨形成关键基因和蛋白OPG、RANKL以及RUNX2表达的影响。结果:虾肽质量浓度为0.02,0.05,0.1 mg/mL时,显著促进MC3T3-E1细胞的增殖;ALP、OCN及COL-Ⅰ的含量相较于对照组均增加,矿化结节面积显著增大(P <0.05);此外,虾肽上调了ALP、OCN、COL-Ⅰ基因的表达,促进OPG和RUNX2基因及蛋白表达的水平,抑制RANKL基因及蛋白表达的水平。结论:虾肽能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖分化与矿化,激活OPG/RANKL/RANK信号通路,从而促进成骨细胞的分化及骨形成。     

不同浓度牛乳铁蛋白对成骨细胞与破骨细胞共培养的影响

研究证实牛乳铁蛋白具有成骨活性功能,既能刺激成骨细胞增殖,也能诱导破骨细胞凋亡。骨骼的生长发育是一动态平衡的生物过程,是通过成骨细胞诱导的骨生成和破骨细胞诱导的骨吸收所调节的。采用成骨细胞MC3T3-E1细胞与破骨前体细胞RAW264.7细胞1∶1的比例直接接触的共培养方式,研究不同浓度(20、100、500μg/m L)的牛乳铁蛋白对共培养中成骨细胞和破骨细胞活性以及破骨细胞骨吸收功能的影响。首先,通过碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测共培养上清中的ALP活性,发现低浓度的牛乳铁蛋白能够抑制成骨细胞的ALP活性,而中高浓度的牛乳铁蛋白能够显著地促进成骨细胞的ALP活性。利用TRAP活性检测试剂盒及ELISA检测试剂盒,则发现低中浓度的牛乳铁蛋白能够促进破骨细胞的TRAP活性,而高浓度的牛乳铁蛋白能够显著地抑制破骨细胞的TRAP活性和共培养体系RANKL/OPG的比值。最后,通过骨吸收陷窝实验,证实了中高浓度组的牛乳铁蛋白能够显著地抑制破骨细胞的骨吸收功能。结果表明了高浓度的牛乳铁蛋白在共培养体系中不仅能够促进成骨细胞的活性,并且对破骨细胞具有抑制活性及功能的作用。     

鳕鱼骨胶原肽的制备及其对成骨样MG-63细胞作用机制的研究

以水产加工下脚料鳕鱼骨为原料,对其进行基本组成分析与组织结构观察。从鳕鱼骨中提取胶原蛋白并酶解制得不同分子量段的胶原肽。探讨不同分子量胶原肽组分对MG-63细胞碱性磷酸酶(ALP)活性及相关因子骨形态发生蛋白(BMP-2)、骨保护素(OPG)与核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)m RNA表达水平的影响。结果表明:鳕鱼骨中蛋白质含量较高(14.5%),Van Gieson染色发现鳕鱼骨中含有大量的胶原蛋白纤维。鳕鱼骨胶原肽能够提高细胞ALP活性,同时显著上调细胞BMP-2 m RNA的表达水平;鳕鱼骨胶原肽可有效提高细胞OPG/RANKL m RNA的相对表达量,以间接对破骨细胞的成熟及活化进行调控。鳕鱼骨可作为一种优良的天然蛋白源,鳕鱼骨胶原肽能够作为一种有效的抗骨质疏松营养强化剂加以开发。     

一种含姜黄食品对去卵巢模型鼠骨组织的影响

目的:探讨一种含姜黄食品对去卵巢模型鼠骨组织变化的影响。方法:采用双侧去卵巢法制备去卵巢诱发骨质疏松大鼠模型,将动物分为假手术组、模型对照组、含姜黄受试物组和不含姜黄受试物组,连续喂养90 d,测定各组大鼠体重变化、血清中骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)及核因子Κ-β受体活化因子配体(Receptor Activator for Nuclear FactorΚ-βLigand,RANKL)水平、大鼠股骨长度以及骨组织形态学检测。结果:喂养90 d后,姜黄组大鼠体重增长趋势与假手术组较为接近(p0.05)。姜黄组大鼠血清OPG水平、股骨长度、骨小梁厚度以及成骨细胞数显著高于模型对照组(p0.01),RANKL水平、骨小梁间隙以及破骨细胞数显著低于模型对照组(p0.01)。姜黄组与不含姜黄组比较,大鼠血清中OPG、骨小梁厚度高于不含姜黄组(p0.05),RANKL、骨小梁间隙低于不含姜黄组(p0.05);姜黄组大鼠股骨长度及成骨细胞数显著高于不含姜黄组(p0.01),破骨细胞数显著少于不含姜黄组(p0.01)。结论:实验结果表明,此含姜黄食品对去卵巢模型鼠骨组织退变有一定的抑制作用。     

淫羊藿对成骨细胞和破骨细胞作用的研究进展

淫羊藿可促进成骨细胞增殖分化,抑制破骨细胞,其机制与调节多种骨相关蛋白质及其mRNA表达等有关。淫羊藿血清代谢物也可促进成骨细胞增殖分化。现参考近年文献,综述淫羊藿对成骨细胞和破骨细胞作用的研究进展,为进一步研究淫羊藿提供新的思路。建议加强淫羊藿体内作用试验及代谢物作用机制的研究。     

二膦酸盐对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞中OPG/RANKL表达的影响

目的研究二膦酸盐作用于人骨肉瘤细胞株MG-63细胞后,对细胞中成骨细胞护骨素(OPG)及细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法人骨肉瘤细胞株MG-63细胞培养、传代后分为:二膦酸盐10μmol/L组、二膦酸盐50μmol/L组和阴性对照组3组,保温72 h后,应用RT-PCR和Western blot检测干预后OPG和RANKL mRNA和蛋白水平的表达。结果二膦酸盐作用于人骨肉瘤细胞株MG-63细胞后,细胞中OPG mRNA和蛋白水平表达升高,RANKL mRNA及蛋白水平则降低(均P<0.05)。结论二膦酸盐可能通过调节人骨肉瘤细胞株MG-63细胞OPG/RANKL轴的表达,抑制骨肉瘤的溶骨性破坏,对治疗人骨肉瘤有潜在价值。     

罗非鱼头磷脂对RANKL诱导RAW264.7细胞分化的抑制作用及其对破骨细胞凋亡作用的机理

目的:探讨罗非鱼头磷脂(tilapia head phospholipid,TH-PL)对破骨细胞生物活性的影响。方法:首先采用溶剂法提取罗非鱼头总脂,通过硅胶柱层析分离得到TH-PL,采用薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)、傅里叶红外变换光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)和气相色谱分析其性质与部分结构。其次利用核因子κB受体活化因子受体的配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)体外诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞,建立破骨细胞模型,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色法评价TH-PL对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响,荧光染色法、流式细胞仪测定法和蛋白免疫印迹法检测TH-PL对破骨细胞凋亡的影响。结果:制备的TH-PL占罗非鱼头干质量的1.52%,TLC和FTIR法确定所得样品为TH-PL,且含有丰富的不饱和脂肪酸,约占38%。TRAP染色实验表明,50、100μg/m L TH-PL显著抑制RAW264.7分化为破骨细胞;进一步实验证明,TH-PL能够引起破骨细胞线粒体跨膜电位下降,导致细胞内caspase-3的蛋白表达量上升,诱导破骨细胞凋亡。结论:体外细胞实验证明,TH-PL具有显著的抑制破骨前体细胞分化和促进破骨细胞凋亡的作用。     

维生素K2单独及与钙剂联合使用对斑马鱼骨骼健康的改善作用及机制研究

目的：研究维生素K₂单独使用及与钙剂联合使用对斑马鱼骨骼健康改善作用及机制。方法：采用转基因Tg系健康斑马鱼作为实验动物,利用泼尼松龙诱导骨质疏松斑马鱼模型,显微镜下观察并拍照,以斑马鱼成骨细胞荧光面积和荧光密度为指标,评价药物处理后斑马鱼骨骼发育情况,并采用Real-time qPCR检测相关基因表达变化。结果：在5～20μg/mL的实验安全剂量范围内,维生素K₂及与D₃和钙剂联合使用,均能显著改善由泼尼松龙诱导的斑马鱼成骨细胞荧光面积和荧光密度的降低(P<0.05);维生素K₂通过促进成骨细胞生成相关的alp、bmp2a和bmp4基因的表达,抑制破骨细胞生成相关的opg、rank1、trap、ctsk基因的表达以及抑制细胞外基质中骨钙化相关基因vdrb、sparc、colla2表达从而发挥功效。结论：维生素K₂通过促进成骨细胞生成相关基因的表达,抑制破骨细胞和细胞外基质中骨钙化相关基因的表达,发挥改善斑马鱼骨骼健康的作用,其与钙剂联合给药,可提升其改善骨骼健康能力。     

不同浓度牛乳铁蛋白对破骨细胞活性的影响

目的研究不同浓度牛乳铁蛋白对于破骨细胞的活性的影响。方法首先通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同浓度的牛乳铁蛋白对RAW264.7的细胞毒性,进而在核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of the NF-κB ligand,RANKL)(100 ng/m L)诱导下形成破骨细胞。通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色法观察阳性多核细胞,检测不同浓度的牛乳铁蛋白对于破骨细胞形成的影响。通过TRAP活性检测试剂盒检测上清中的TRAP活性,及通过人工骨板观察破骨细胞的骨吸收功能。结果牛乳铁蛋白对RAW264.7细胞无毒性,对破骨细胞的形成有显著的抑制作用,并且能够显著地降低破骨细胞的活性,对破骨细胞的骨吸收活性也有抑制作用。结论牛乳铁蛋白对破骨细胞的活性有显著影响,可能会在以破骨细胞活性过度表达为特征的骨病中起到重要作用。     

二膦酸盐对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞中OPG/RANKL表达的影响

目的 研究二膦酸盐作用于人骨肉瘤细胞株MG-63细胞后,对细胞中成骨细胞护骨素(OPG)及细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）表达的影响.方法 人骨肉瘤细胞株MG-63细胞培养、传代后分为:二膦酸盐10 μmol/L组、二膦酸盐50 μmol/L组和阴性对照组3组,保温72 h后,应用RT-PCR和Western blot检测干预后OPG和RANKL mRNA和蛋白水平的表达.结果 二膦酸盐作用于人骨肉瘤细胞株MG-63细胞后,细胞中OPG mRNA和蛋白水平表达升高,RANKLmRNA及蛋白水平则降低(均P＜0.05).结论 二膦酸盐可能通过调节人骨肉瘤细胞株MG-63细胞OPG/RANKL轴的表达,抑制骨肉瘤的溶骨性破坏,对治疗人骨肉瘤有潜在价值.     

卵黄高磷蛋白磷酸肽及其钙螯合物在双细胞共培养体系中对成骨细胞分化的促进作用

研究了卵黄高磷蛋白磷酸肽（Phosvitin Phosphopeptide,PPP）及其钙螯合物（PPP-Ca）在成骨细胞（MC3T3-E1）和破骨前体细胞（RAW264.7）共培养体系中对成骨细胞分化的调节作用。对细胞毒性、碱性磷酸酶（AKP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的活性和TRAP染色进行分析;用RT-PCR技术进一步探究成骨细胞RANKL/OPG通路相关蛋白的mRNA表达情况。结果发现,PPP和PPP-Ca可以使MC3T3-E1体系中的AKP活性分别增加9.5%和12.7%;PPP和PPP-Ca的加入可以使MC3T3-E1体系中OPG基因mRNA的表达量从0.92分别提升至1.25和1.39、使RANKL基因mRNA的表达量从1.00分别提升至1.23和1.45。该研究结果表明,PPP和PPP-Ca可有效促进成骨细胞的分化。实验结果为进一步探索磷酸肽在多细胞模型体系中的作用提供了研究基础,同时为磷酸肽的功能活性开发提供理论依据。     

夏枯草黄酮对去卵巢大鼠骨质疏松的抑制作用

本研究通过干预去卵巢大鼠骨质疏松动物模型,探讨夏枯草黄酮对骨质疏松大鼠骨量、生物力学性能及骨代谢的影响。经夏枯草黄酮处理后,取血清检测血矿物质、护骨素(OPG)、碱性磷酸酶量(ALP)的含量变化,取各组股骨进行骨密度测定和骨组织形态检测,并用荧光定量PCR的方法检测Ⅰ型胶原、整合素β1与粘着斑激酶的mRNA表达。结果显示,夏枯草黄酮组ALP(3.03±0.22 IU/L)、破骨细胞数(0.23±0.05 1/mm2)、骨吸收周长百分数(14.94±5.12%)低于模型组(P0.05),而OPG量(186.34±44.21pg/mL)、骨密度、骨小梁相对体积(26.11±5.32%)和厚度(587.16±165.01?m)与模型组相比则有所增加(P0.05);表明夏枯草黄酮能够提升去卵巢大鼠的成骨细胞的功能,减缓骨吸收和骨代谢,促进骨形成,降低骨小梁损失,抑制骨量减少与骨强度降低,从而提升去卵巢大鼠的骨密度,最终对骨质疏松症起到了抑制作用。     

乳铁蛋白促进骨健康作用的研究进展

乳铁蛋白是一种由上皮细胞分泌产生的分子量大约为80 ku的糖蛋白,在体内和体外都有很好的促进骨生长的作用,乳铁蛋白促进骨健康作用机制主要包括抑制成骨细胞凋亡、促进成骨细胞增殖和分化、免疫调节和抑制破骨细胞形成等。乳铁蛋白促进成骨作用方面受到其铁饱和度、环境中葡萄糖浓度和乳铁蛋白比例、乳铁蛋白糖基化差异以及不同来源的影响。     

水解蛋黄粉改善鼠骨代谢和生长的研究

以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1、大鼠破骨细胞和大鼠为实验模型,通过测定碱性磷酸酶(ALP)活性、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、骨溶蚀陷窝和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)荧光染色等多种骨代谢生化指标,研究源于鸡蛋蛋黄的水解蛋黄粉改善骨代谢的生理作用机制。结果表明:水解蛋黄粉通过促进成骨细胞生长、抑制破骨细胞分化与破坏、提高骨端生长板细胞活性等机制改善骨代谢、促进骨骼生长。     

乳铁蛋白对幼年大鼠骨健康影响

目的:研究乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)对幼年大鼠骨健康的作用。方法:将40 只4 周龄雄性SD大鼠随机分为对照组(0 mg/kg bw/d)、LF低剂量组(100 mg/kg bw/d)、LF中剂量组(500 mg/kg bw/d)和LF高剂量组(1000 mg/kg bw/d),连续喂养30 d后,测定幼年大鼠体重和脏体比变化、股骨骨密度(Bone mineral density,BMD)和骨微观结构变化、血清及股骨骨髓组织中抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRACP)、基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、组织蛋白酶K(Cathepsin,CTSK)、核因子κB受体激活因子配体(Receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(Osteocalcin,OPG)水平。结果:灌胃LF 30 d后,与对照组比较,LF剂量组幼年大鼠体重、脏体比增长趋势相近,差异不显著(P>0.05),LF中、高剂量组骨小梁数量(Trabecular bone number,Tb.N)、骨小梁厚度(Trabecular bone thickness,Tb.Th)、血清及股骨骨髓组织中OPG和OPG/RANKL水平显著增加(P<0.05),骨小梁分离度(Trabecular bone space,Tb.Sp)、TRACP、MMP-9、CTSK和RANKL显著降低(P<0.05)。结论:补充LF能够减少幼年大鼠骨吸收,增加骨形成和骨量,调节骨代谢平衡,促进骨健康。     

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用

目的：从鲫鱼卵中提取唾液酸糖蛋白,研究其对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用,并探究其作用机理。方法：采用切除大鼠双侧卵巢的方法建立骨质疏松症大鼠模型,灌胃鲫鱼卵唾液酸糖蛋白（400 mg/（kg·d））90 d后,分别检测大鼠尿液骨吸收指标（脱氧吡啶啉、钙、磷）、血清骨吸收指标（抗酒石酸酸性磷酸酶、组织蛋白酶K）、血清骨生成指标（骨源性碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型前胶原羧基端前肽）以及血清骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、核因子κB受体活化因子（receptor activator for nuclear factor-κB,RANK）、核因子κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）含量。结果：鲫鱼卵唾液酸糖蛋白能显著降低骨质疏松症大鼠尿液脱氧吡啶啉（P＜0.01）、钙（P＜0.01）、磷（P＜0.01）含量和血清抗酒石酸酸性磷酸酶（P＜0.01）、组织蛋白酶K（P＜0.01）活性,防止大鼠骨吸收;显著降低血清骨源性碱性磷酸酶（P＜0.01）活性和骨钙素（P＜0.01）、Ⅰ型前胶原羧基端前肽（P＜0.01）含量,抑制大鼠高骨转换速率;显著上调OPG（P＜0.01）含量,下调RANKL（P＜0.01）含量,降低RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞增殖分化,降低骨吸收。结论：鲫鱼卵唾液酸糖蛋白具有改善去卵巢大鼠骨质疏松症的作用,其作用机理可能与下调RANKL/OPG比值有关。     

鹅骨胶原蛋白及肽对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及向成骨分化的影响

本实验通过研究鹅骨胶原蛋白、含钙胶原蛋白、胶原肽、含钙胶原肽对大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及向成骨细胞(Osteoblast,OB)分化的影响,阐述鹅骨胶原蛋白及多肽对骨质疏松的作用机制。采用MTT(噻唑蓝)法测定鹅骨胶原蛋白及多肽对BMSCs增殖的影响;碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色、ALP活性测定、茜素红染色和骨钙素(BGP)分泌量测定分析BMSCs成骨分化能力。结果表明,相较于对照组,试验组可促进BMSCs的增殖,第14d ALP染色试验组ALP染色阳性率显著高于对照组(p0.05),第7 d和第14 d鹅骨胶原蛋白及肽可显著提高ALP的活性表达(p0.05),第21 d茜素红染色试验组钙结节个数相较于对照组显著增加(p0.05),骨钙素分泌量试验组显著高于对照组(p0.05)。由此表明,大分子胶原蛋白、含钙大分子胶原蛋白、小分子胶原多肽、含钙小分子胶原多肽均可促进BMSCs的增殖及向成骨细胞分化,以含钙小分子胶原多肽作用效果最佳。     

桑白皮提取物对破骨细胞 和成骨细胞活性的影响

目的:探究桑白皮提取物对破骨细胞和成骨细胞活性的影响。方法:通过回流提取和大孔树脂、聚酰胺柱层析制备桑白皮的四种提取物(水提物W、醇提物E、纯化提取物R和PA),采用可见分光光度法对不同提取物中的黄酮含量进行测定。采用1α,25-(OH)₂VitD₃诱导兔原代骨髓细胞以获得破骨细胞,诱导培养8 d后进行TRAP染色,通过TRAP+细胞计数考察桑白皮提取物对破骨细胞形成的影响。培养MC3T3-E1 Subclone 14细胞,采用MTT法考察桑白皮提取物对成骨细胞增殖的影响。结果:桑白皮四种提取物中黄酮的含量为:PA(37.23%) > R(26.80%) > E(21.83%) > W(15.38%)。提取物PA(10、20、50 mg/L)、R(20、50 mg/L)、E(10、20 mg/L)和W(20 mg/L)实验组与空白对照组相比,TRAP+细胞个数减少,且具有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。MTT法增殖试验结果表明,四种提取物各剂量组均能促进MC3T3-E1 Subclone 14的增殖,与空白组相比具有极显著性差异(P<0.01),且促增殖作用随黄酮含量增加而增强。结论:桑白皮提取物能够抑制破骨细胞的形成,且对成骨细胞的增殖有促进作用,黄酮类化合物可能是桑白皮发挥活性作用的重要成分。