鸡胚多肽分子量分布研究比较

采用Sephadex G-25层析、SDS-PAGE电泳等分析方法对鸡胚多肽水解产物的分子量分布进行分析,结果表明,蛋白酶所得到的水解产物肽分子是连续分布的,不同的酶酶解液所得的多肽分子量分布不同。TR-菠萝复合酶酶解液中酶解得到较多低于MW30000不同分子量的低分子小肽,因此选择其作为酶解鸡胚蛋白的最佳作用酶。     

不同孵化时期鸡蛋蛋清小分子多肽的鉴定及功能分析

通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF MS/MS)技术,比较不同孵化时期鸡胚蛋蛋清中产生的小分子多肽,研究肽段与鸡胚发育之间的联系。结果显示在孵化第0、6、14、16 d分别得到837、879、872和842条肽段(共3430条)。除丛生蛋白肽段外,大部分被鉴定到的肽段来源于蛋清中低丰度蛋白。其中926条肽段来源于与鸡胚先天免疫有关的9种蛋白质,如防御素、白细胞介素6等;256条肽段来源于与鸡胚呼吸系统发育相关的3种蛋白质,cx9C基序蛋白、sprouty蛋白和碳酸酐酶。结果表明由蛋清蛋白质内源性酶降解形成的小分子多肽可能对鸡胚发育时形成的呼吸和免疫系统等发挥重要作用。     

黑龙江小麦麦胚多肽的制备及抗氧化功能研究Ⅱ.超滤法精制抗氧化麦胚多肽工艺条件的优化

采用3ku和6ku的超滤膜对麦胚多肽进行分级分离,考察3种分离产物对DPPH ·的清除能力,发现分子质量在3ku以下的麦胚多肽对DPPH ·的清除率可达75.32%,高于其他分离产物。采用响应面试验方法对麦胚多肽的超滤条件进行优化试验,结果表明,最佳超滤条件为超滤压力0.08MPa、超滤时间23min、超滤pH6.83、溶液质量分数2%,此时膜通量为4.85L/(m2 ·h)。所得分子质量小于3ku的麦胚多肽在质量分数11%时,其DPPH ·清除率为78.93%。超滤法精制的麦胚多肽具有良好的DPPH ·的清除能力。     

孵育法富集麦胚多肽工艺参数优化

对孵育法富集麦胚多肽工艺进行优化。结果表明：孵育时间、温度、孵育液pH 值及液料比对麦胚孵育液中多肽含量有显著影响。采用Design Expert 中Box-Behnken 试验设计对上述因素进行响应面优化,结果表明当孵育时间6h、孵育温度49℃、孵育液pH3 及液料比10:1(mL/g)时为最佳组合,麦胚孵育液中多肽含量高达88.46mg/g,是原料麦胚的2.98 倍。     

鸡胚酶解液通过不同分级超滤膜理化性质研究

鸡胚是具有生命力的鸡蛋,具有药理作用。利用不同分离膜超滤分离纯化鸡胚多肽,研究比较不同膜的超滤液的蛋白含量、酸性肽含量、氨基态氮、水分含量、灰分、pH、贮藏稳定性、活性提取物蛋白和pH稳定性,其理化物质含量都是随SPE膜减小而减少,SPE膜越小所得超滤液越稳定。     

呈味肽的制备、纯化与鉴定

采用酶解法以鸡肉为原料进行鸡肉蛋白多肽的制备,通过葡聚糖凝胶柱层析法对混合多肽进行不同分子质量片断的分离,确定最优的分离填料为G25、洗脱液为乙醇-水,在此条件下,分子质量＜1 000 u的组分通过分离富集含量可达100%、分子质量＞5 000 u的组分含量达78%、分子质量1 000～5 000 u的组分含量达70%。通过感官评价、电子舌分析发现,不同分子质量片段多肽提供的风味侧重点不同,分子质量＜1 000 u的多肽热反应产物在醇厚感、嗜好性方面最优。利用高效液相色谱、液质联用仪对该肽段进一步纯化与鉴定,找到其中5条呈味肽,并采用固相合成法制备,经感官评价验证其呈味功能,发现在清水评价中,合成的5条多肽呈味效果以酸、甜、鲜味为主;在鸡粉溶液加香评价中,呈现鲜味最强的多肽为γ-L-Glu-L-Glu和γ-L-Glu-L-Val-Gly;呈现醇厚感最强的多肽为L-GSH。     

超滤技术分离双低油菜ACE抑制肽及其性能研究

采用超滤技术对双低油菜酶解物中的ACE抑制肽进行了分离提纯研究,考核了分离参数对分离效果的影响,分析了不同分子质量段多肽HPLC肽谱的变化,研究了双低油菜高ACE抑制活性多肽的耐消化性、酸碱稳定性和耐热性。结果表明,超滤分离能明显提高双低油菜ACE抑制肽的活性,截留分子质量为3 ku的超滤膜透过液IC50值下降了15%,活性多肽回收率超过58%,酶解物中有4个高活性的组分峰,小于3 ku分子质量段的ACE抑制肽有良好的耐热性、酸碱稳定性和耐消化性。     

四季豆叶富硒肽的酶法制备工艺及抗氧化活性研究

采用四季豆叶富硒蛋白(SPK)为材料，利用碱性蛋白酶对其进行酶解。通过单因素和响应面试验，确定最优酶解条件，利用超滤截流不同分子质量(10、5、1 kDa)的酶解液得到多肽，并对其进行体外抗氧化活性分析。结果表明：在底物添加量3%(以超纯水质量计)、酶解时间120 min、酶解温度50℃、加酶量3%(以SPK质量计)、pH 9.5的条件下，水解度为12.74%±1.12%。当四季豆叶富硒多肽质量浓度为0.5～3.0 mg/mL时，低分子质量(<1 kDa)组分多肽的抗氧化能力总体上优于其他3组组分多肽(>10、5～10、1～5 kDa)。     

酶解核桃蛋白制备抗氧化肽的研究

利用木瓜蛋白酶酶解核桃分离蛋白制备小分子活性肽,并研究了不同分子量段核桃小分子肽的抗氧化性能。通过单因素实验和正交实验,确定了木瓜蛋白酶制备抗氧化肽的最佳酶解条件为:pH8.5,温度50℃,酶与底物浓度之比[E]/[S]=3:100,底物浓度[S]=3.5g/100mL,酶解时间5h。用截留分子量分别为3kDa和10kDa的超滤膜将核桃粗肽液分离成<3kDa、3～10kDa及>10kDa3个分子量段,并对不同分子量段核桃多肽的抗氧化性进行了研究,结果表明,分子量<3kDa的核桃多肽的抗氧化性大于其他两个分子量段。     

超声波对鸡骨蛋白酶解产物的影响及机理研究

利用超声波技术辅助酶解鸡骨架,制得鸡骨蛋白酶解产物,比较了超声功率、超声处理时间对鸡骨架酶解产物特性的影响。实验结果表明,不同超声波功率及超声处理时间对酶解液的水解度、多肽含量、滋味等特性的影响程度不同,800 W、30 min为最适超声条件,在此条件下,鸡骨蛋白酶解液的水解度及其多肽含量得到提高,DH可达24%,同时鲜味增强;蛋白结构分析表明,超声破坏了蛋白的网络结构,蛋白分子的活性位点被更多的暴露,使得酶解过程中的水解度、活性肽段释放效率、鲜味响应值得到提升。