纤维联接蛋白FN、凝血酶敏感蛋白(TSP)在成纤维细胞及骨髓基质细胞的免疫电镜定位

本文用免疫电镜技术(过氧化酶标记和胶体金标记)在来自兔角膜瘢痕的纤维母细胞和来自小鼠骨髓的长期培养的基质上进行了纤维粘连蛋白(FN),血小板凝血酶敏感蛋白(TSP)定位。结果显示在纤维母细胞和骨髓基质细胞表面以及细胞外细纤维构成的网中。另外,有时在上述二种细胞胞浆中也可以看到FN和TSP的定位。应用免疫电镜技术可以研究各种结缔组织增生性疾病,FN和TSP的分布以及它们和结缔组织增生的关系,为纤维化形成机制以及胶原形成细胞、基质细胞和其它细胞的关系提供了形态学依据。     

细胞的标志酶细胞化学反应

在电镜细胞化学研究中,一个重要的部分是研究细胞的标志酶以及某些细胞特有的标志酶。这些标志酶为研究细胞器的结构与功能、细胞器的相互关系以及细胞的鉴别等提供了新的途径。我们采用十多种标志酶(见表)的电镜细胞化学反应,开展了下列研究工作:     

胃癌印戒细胞超微结构酶细胞化学研究：五种细胞器标志酶的电镜观察

胃印戒细胞癌多见于30岁以下的女性,其侵袭力强,转移率高,这种生物学行为的发生机理日益受到关注。但从酶学特别是对多种细胞器标志酶进行超微结构水平的研究,文献中未见报告。本文应用酶细胞化学技术对胃癌印戒细胞五种细胞器标志酶(碱性磷酸酶AKPaee,酸性磷酸酶Acpace,葡萄糖-6-磷酸酶G6Pase,焦磷酸硫胺素酶TPPaee和细胞色素氧化酶Coaee)进行了细胞和超微结构水平的定位观察,并以正常胃粘膜作为对照,探讨了胃癌印戒细胞五种细胞器标志酶的分布特点及其与生物学行为间的关系。结果发现:正常胃粘膜上皮细胞AKPace均阴性;Acpase活性以主细胞为最强,旦分布于自噬及分泌溶酶体中;胃粘膜上皮细胞的核周间隙和粗面内质网(RER)G6paee均阳性,主细胞富于RER     

大鼠粒细胞内质网的电镜细胞化学反应

大鼠骨髓的粒细胞,从幼稚发育成熟,形态变化很大。其中内质网的形态及功能变化十分显著。为进一步了解内质网的这些变化,我们在形态观察的基础上,对大鼠骨髓进行电镜细胞化学实验。利用髓过氧化物酶(MPO)反应和葡萄糖—6—磷酸酶(G—6—Pase)反应二种方法,从二个不同侧面了解内质网在粒细胞发育过程的结构与功能状况。     

酸性磷酸酶在大鼠脉络丛上皮细胞内的亚细胞定位

研究大鼠脑室脉络丛上皮细胞内酸性磷酸酶(Acid phosphatase,AcPase)的超微结构分布.取成年SD大鼠侧脑室、第三脑室和第四脑室的脉络丛组织,按硝酸铅法进行酸性磷酸酶电镜酶细胞化学染色显示.透射电镜下ACPase阳性反应物仅见于脉络丛上皮细胞内的初级和次级溶酶体上.通过延长孵育时间和改变固定条件(戊二醛浓度为0.5%)在脉络丛上皮细胞内的高尔基复合体扁囊和囊泡中也观察到了ACPase阳性反应物.各脑室脉络丛上皮细胞酸性磷酸酶的分布未见明显差异.文中讨论了脉络丛上皮细胞内ACPase的分布特征及其功能.     

人脑膜瘤磷酸酶电镜细胞化学研究

手术切除脑膜瘤8例,经病理检查亚型分为纤维型、脑膜上皮型、砂粒型和血管瘤型脑膜瘤,分别进行碱性磷酸酶(ALP)、5′—核苷酸酶(5′—Nase)、酸性磷酸酶(ACP)、胞嘧啶单核苷酸酶(CMP酶)和焦磷酸硫胺素酶(TPP酶)电镜细胞化学研究,结果如下:人脑膜瘤ALP主要定位于毛细血管内皮细胞膜上,在不同亚型脑膜,ALP反应强度和定位不同,砂粒型脑膜瘤瘤细胞质膜、细胞内粗面内质网显示很强的ALP阳性反应,其余亚型脑膜瘤瘤细胞ALP为阴性反应。5′—Nase主要定位于各亚型脑膜瘤的细胞质膜上。其中砂粒型脑膜瘤瘤细胞质膜上5′—Nase活性最强,血管瘤型脑膜瘤瘤细胞质膜上5′—Nase活性最弱,但在核膜上有较多的5′—Nase反应产物。该亚型     

银耳对小鼠腹腔巨噬细胞功能和超微结构影响

巨噬细胞(MΦ)来源于单核吞噬细胞系统,分布广泛,在机体抗肿瘤和抗感染过程中可能起着临视作用。这些细胞不仅具有吞噬活性,而且参与多种代谢、免疫和细胞生长调节过程(1)。在正常条件下,巨噬细胞处于休止状态,活性较低,但一经激活,在形态、代谢和功能上均可出现显著的变化。活化的巨噬细胞对肿瘤细胞的溶解过程大致可以分为两个步骤:(1)巨噬细胞与肿瘤细胞紧密结合。(2)溶解肿瘤细胞(2)。一些药物如免疫增强剂等[3]也能激活MΦ。我们用银耳孢子提取物注射到小鼠腹腔,四天后观察到小鼠腹腔巨噬细胞体积增大,形态上有明显的改变,胞浆内酸性磷酸酶活     

培养脊神经节细胞酸性磷酸酶的超微分布

我们已经先后报道了线状溶酶体 (ＮＬＹ)在中枢神经细胞 (大脑大锥体细胞 ;小脑浦肯野氏细胞 ;脊髓前角运动细胞 )的分布[1] ,但至今未见神经节细胞ＮＬＹ的报道。本研究采用酸性磷酸酶[2 ] (ＡｃｉｄＰｈｏｓｐｈｏｔａｓｅ ,ＡＣＰ)的电镜酶细胞化学技术显示初代培养的胎鼠脊神经节细胞ＡＣＰ的分布 ,并进行了电镜观察 ,旨在探讨脊神经节细胞ＮＬＹ的存在和研究其生物学特性提供依据。材料与方法实验动物选用妊娠 14日的健康孕鼠 (Ｗｉｓｔａｒ种系 ) ,拉断头颈处死消毒后剖开子宫 ,取出胎鼠 ,超净工作台中 ,解剖镜下分离出胎鼠脊神经节 ,…     

铈在磷酸酶电镜细胞化学中的应用

在磷酸酶细胞化学反应中,酶作用于底物所产生的初级反应物为磷酸,日前常用铅为捕捉剂,与磷酸反应形成高电子密度的磷酸铅沉淀,在电镜下探测。由于铅捕捉剂对酶有一定抑制作用,而且容易产生非特异性反应,近年来人们开始寻找新的捕捉剂,其中铈是较理想的一种,我们采用这种新捕捉剂铈开展了CMP酶和G—6—P酶等磷酸酶的细胞化学反应,获得了较好的效果。铈为捕捉剂的电镜细胞化学基本方法和步骤与我们以前报道的铅法相同(见细胞生物学杂志7增:3-14),但细胞化学反应液配方不同。CMP酶细胞化学反应液内含有2mmol/LC-5′-MP、40mmol/L醋酸钠缓冲液(pH5.0)、2mmol/L氯化铈(CeCl_4)、5mmol/L氯化锰和     

电镜酶细胞化学的概况及其操作注意事项

电镜酶细胞化学方法是在光镜酶组织化学基础上发展起来的。酶的检出法有金属沉淀法和色素法。金属沉淀法常以铅盐、铜盐、钡盐等金属作为捕捉剂。其中铅盐是比较理想的捕捉剂。铅捕捉剂广泛用于检出磷酸酶,酯酶和转移;在酸性、碱性、中性等PH范围内均可使用;而且反应一次完成。色素法有偶氮色素法、二氨基联苯胺     

蝌蚪皮肤细胞中磷酸酶定位的电子显微镜研究

本实验以花背蟾蜍后肢芽期的蝌蚪为材料,研究酸性磷酸酶及碱性磷酸酶在表皮细胞中定位。酸性磷酸酶在细胞表面个别粘液泡、细胞间连接复合体及细胞间隙上都有分布。在细胞内此酶主要定位于溶酶体、高尔基复合体及内质网上。碱性磷酸酶主要定位于细胞表面的微绒毛、细胞间隙、连接复合体及胶原纤维上。     

用铈结合细胞增透剂和稳定剂定位组织块细胞内的磷酸,酶

用铈作为酶反应捕捉物同时结合细胞增透剂Triton X—100和细胞成分稳定剂(皂角苷,Saponin),能够成功地定位出硬骨鱼精巢组织块中细胞内的酸性磷酸酶。本文的结果表明,铈/细胞增透剂方法比传统的铅方法具有特异性高、扩散少、反应充分等多方面优点。     

电镜在巨核细胞性白血病诊断中的应用

巨核母细胞及不成熟幼稚巨核细胞性白血病,单靠一般形态学分析,难以鉴别本病的病理细胞,必须结合电镜细胞化学及特异性抗体免疫标记综合判断明确诊断。标本采自5例巨核细胞性白血病患者的周围血及骨髓穿刺,同时分别做一般超微结构观察,血小板过氧化物酶(PPO)反应,髓过氧化物酶(MPO)反应及抗血小板糖蛋白单抗(CD_(41)、CD_(42))免疫金标记。电镜下5例病人白血病细胞的共同超微结构特征有(1)细胞大小不一,少数幼稚型细胞,比原粒,原红,原     

大鼠肺巨噬细胞iNOS电镜细胞化学定位显示法

目的;对大鼠肺泡巨噬细胞NOS进行细胞内定位显示。方法：由大鼠支气管肺泡灌洗液中获取肺泡巨噬细胞,富集制备成单层细胞爬片。在37℃,5％CO2的二氧化碳培养箱中,用LPS（1g/L）刺激24h以诱导肺泡巨噬细胞NOS表达。采用NADPH－d电镜细胞化学术对肺泡巨噬细胞NOS进行定位显示。结果：活化的AM胞浆内可见大量颗粒状电子密度沉淀。结论：NADPH－d电镜细胞化学方法所显示的AM诱导型NOS是胞浆酶。     

5’—核苷酸酶和硷性磷酸酶在二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌细胞中的定位

我们用光镜和电镜观察了5′—核苷酸酶和硷性磷酸酶在二乙基亚硝胺诱发SD大鼠肝癌细胞中的定位,结果发现这两种酶是定位在正常鼠肝细胞毛细胆管微绒毛区和SD大鼠肝癌癌细胞毛细胆管微绒毛区,而且后者(图3、4、5)比前者(图1、2)丰富得多。提示肝癌患者血清中上述两种酶显著增高,可能系因癌变而使酶经毛细胆管附近的相邻两个细胞缝隙连接而进入血液循环。     

大鼠心肌偶联的电镜及酶细胞化学研究

大鼠心肌偶联的电镜及酶细胞化学研究王仁鹏，吕银慧，陈希炜（第三军医大学中心实验室，重庆６３００３８）本文应用常规电镜和葡萄糖－６－磷酸酶（Ｇ６Ｐ酶）细胞化学技术对大鼠心房及心室心肌细胞的心肌偶联进行了超微结构观察，以期为心肌细胞的兴奋－收缩偶联功能提...     

胃癌的粘液分泌及其病理学意义(超微结构观察)

对35例手术切除的胃癌,电镜下观察其粘液分泌活动,另6例胃镜活检标本行电镜水平的胞嘧啶单核苷酸酶(CMPase)反应。粘液颗粒在高尔基复合体处形成。具有正常极性的瘤细胞,粘液颗粒以外倾方式把内容物排到细胞游离面,较少见情况下,也可排到细胞内微囊或周围的间质中。有时粘液颗粒和初级溶酶体结合或被包绕在自噬体内,最后被溶酶体酶消化(粒溶,crinophagy)。此现象由于粘液颗粒内显示CMPase活性而得到确证。胃癌细胞的粒溶在文献上未曾提及。Resau在体外短期培养的胰组织中发现酶原颗粒的粒溶,说明此过程也可出现在外分泌细胞。苗氏以组化方法在粘液细胞癌细胞内发现酸性磷酸酶和β—葡萄糖醛酸酶活性均较高,间接证实我们的发现。     

小脑浦肯野细胞酶细胞化学的超高压电镜观察

本研究采用电镜酶细胞化学方法显示小脑浦肯野细胞酸性磷酸酶活性分布,在超高压电镜下进行了观察,探讨了线状溶酶体的存在。实验动物采用 wistar 成年健康大鼠,体重150克左右,乙醚麻醉,用30mM pipes 缓冲液(PH7.4,8％蔗糖)缓冲配制的2％PFA(多聚甲醛)和GLA(戊二醛)混合固定液进行心脏灌流10分钟,立即取小脑切1mm×2mm小块,于4℃继续浸泡固定1小时后,同种缓冲液洗净。用 microslicer(微组织切片机)作成40μm非冻结切片,置入 Gomori’s 改良法配制的孵育液中,37℃恒温振荡孵育40分钟。对照组去除底物,在孵育液中加入氟     

植物叶肉细胞内果糖1.6—二磷酸酶（FDPase）的电镜细胞化学定位法

本义在探讨果糖1.6—二磷酸酶(FDPase,EC3.1.3.11)细胞化学反应条件的基础上,初步建立了植物叶肉细胞内FDPase的电镜细胞化学定位法。本研究表明:FDPase的最适pH约为8.6;最适底物浓度约为1mM;mg～(+2)是FDPase活性绝对必需的;FDPase是一种膜束缚酶,它特异性地定位于叶绿体的类囊体膜。     

二氧化钛纳米颗粒对小鼠单核巨噬细胞超微结构影响的电镜研究

目的：应用电镜观察二氧化钛纳米颗粒（nano-TiO2）对小鼠单核巨噬细胞超微结构的影响。方法：将不同浓度的nano-TiO2溶液加入小鼠单核巨噬细胞（Rawcell）中,在37℃、5%CO2的细胞培养箱中孵育4h,收集细胞,制样后在透射电镜下观察小鼠单核巨噬细胞超微结构的改变。结果：电镜下,nano-TiO2的粒径为20～35nm。致密的nano-TiO2通过内吞进入细胞,当浓度超过200μg/mL时,细胞胞质空泡内吞噬有大量成簇的致密颗粒,细胞核固缩,染色质浓缩、边集,出现早期细胞凋亡改变。