一种稳定的超薄切片铅染色方法

随着电子显微镜在生物医学研究中的广泛应用,对所观察样品的制备条件的要求也越来越严格。自从Watson(1958)首先提出铅化合物可以增加超薄切片中细胞超微结构的反差以来,目前国内外多采用Reynolds(1963)介绍的柠檬酸铅作为常规铅染液。但多年来,超薄切片的铅污染却是许多实验室普遍存在的问题,它直接影响着切片的质量和电镜观察效果,原因在于过去所用的铅染液在接触空气中的二氧化碳以后常产生碳酸铅沉淀,污染切片。而且铅染液不能长期贮存,否则污染会更加严重。为了解决这个问题,我们参照Hanaichi等(1986)改进的铅数染液配方和染色方法进行染色。获得了满意的结果,特报告如下。     

一种简易的超薄切片染色器

本文介绍了一种简易的超薄切片染色器的制作和使用方法。各实验室都有制作比染色器所需的材料,其制作和使用方法简单。可进行铀、铅单、双重染色。染色效果良好。在透射电镜生物样品超薄切片染色(尤其铅染)过程中,往往由于CO_2的影响,常在超薄切片上产生碳酸铅沉淀,使切片受到污染,影响观察,严重时无法观察使之前功尽弃。我们参考LKB2160型染色机的工作原理和染色过程,结合工作中的实践,自制了一种简易的染色器,可进行铀、铅单、双重染色。使用此染色器,可使超薄切片的染色达到防污染、规格化、省时间的效果。现将其制作及使用方法介绍如下:     

一种高效的超薄切片染色法

本文介绍使用“连通式”玻管染色装置(如图)的超薄切片染色法及在染色中应注意的事项。经多次使用证明,用该法染出的超薄切片电子着色均匀,结构清晰,有良好的反差。该法能保证切片染色条件的一致,有效地防止切片染色污染,提高染色质量。用该法染色,染液用量省,染20张载网只需1ml染液,降低了铀、铅污染环境的可能性。染色和冲洗时间大大缩短,染30张载网前后共只需30分钟,大大提高了工作效率。该染色装置由三部分组成,制作如下:A.染色管取一根长130mm、内径6mm的玻管,用酒精喷灯加热玻管的一端至内径缩为1mm。在距另一端20mm处,用喷射火焰打一个     

微波辐射超薄切片快速染色法

本文介绍一个微波辐射超薄切片快速染色法。该方法与常规染色方法相比具有以下突出优点:染色速度快且操作简便,整个染色过程可在数分钟内完成;经微波辐射染色处理的动植物组织切片染色均匀,污染少,反差比常规染色法稍强。动植物组织切片微波辐射染色的最佳辐射时间有所不同,铀染色动植物组织切片最佳辐射时间均为30秒;铅染色动物组织切片最佳辐射时间为30秒,而植物组织切片为20秒。染色液经微波辐射后的温度应控制在20～40℃。     

一种快速简便的超薄切片选择性染色法

利用铀 铅 铜选择性染色技术 ,能使细胞中线粒体和高尔基体染色很深 ,内质网也有一定程度的染色 ,而细胞核和其它细胞质成分染色很淡 ,便于分析统计线粒体的面积 ,研究高尔基体和内质网的关系等 ,对生物医学的研究工作提供了一种新的方法[1,2 ] 。但此法染色时间过长且容易出现污染样品的现象。现我们采用微波辐射技术 ,加快制样染色过程 ,取得满意的效果[3 ] ,现介绍如下。材料和方法1 主要仪器 :本实验所用微波炉的型号为Ｗｂｌ 5 30 0 1型 (国营陕西通达电器厂生产 )工作频率为2 4 5 0ＭＨｚ ,最大输出功率为 5 30Ｗ。微波辐射时在微…     

Sato′S铅染液的改良及长期贮存法

Ｓａｔｏ′Ｓ铅染液的改良及长期贮存法杨传红赖晃文（广州军区广州总医院医学实验科，广州５１００１０）目的：解决铅离子与空气中的ＣＯ２结合，形成铅颗粒沉淀在超薄切片上，污染超薄切片的问题。方法：使用改良后经双层微孔滤膜过滤的Ｓａｔｏ′Ｓ铅染液，并在使用前...     

扁桃酸酰胺作用阴道滴虫的电镜观察

扁桃酸酰胺(Mandelic Amide)已证实为桃叶膏抗滴虫的有效成份,为探讨此成份的杀虫机制,作者曾作了光镜下的形态观察,而对电镜下的超微结构改变未见有过记载。本文就电镜下的观察结果报导如下。观察方法是在培养48小时的滴虫培养管内加入40mg/5ml扁桃酸酰胺,培养48小时后制备样品。另外取一滴虫培养管不加药品作对照组,并与实验管同时进行样品制备。样品制备是将上述两种标本,先以2.5％戌二醛液在室温下作一级固定,15分钟后,用pH7.4磷酸缓冲液水洗1小时,再入1％四氧化锇二级固定2小时。用乙醇进行系列脱水,用环氧树酯包埋处理48小时,作超薄切片,切片用醋酸铀和柠檬铅作双染色,随后在H—600型电镜下观察拍片。     

用常规透射电镜观察半薄切片——铀—铅—铜浸染技术的应用

在常规透射电镜中,超薄切片的厚度一般不超过0.1微米,否则就看不清样品的细节。但是,使用特殊的标本本浸染方法,选择性地对某些细胞结构染色,就可以在一般透射电镜下观察半薄切片。本实验采用铀—铅—铜浸染技术,选择性地染色一部分细胞器,在75—100KV透射电镜下观察0.25—0.5微米的半薄切片。结果表明,这一技术在超微结构研究中有一定实用意义。实验方法:用2％戊二醛灌注大鼠,取肝、肾、十二指肠和睾丸等组织,切成1立方毫米小块。组织块经缓冲液漂洗后,在42℃下先放入5％醋酸铀水溶液(PH3.5)浸染1小时,再在硝酸铅—硫酸铜—枸椽酸钠溶液中浸染1小时,然后在4℃下用1％饿酸后固定12小时、常规环氧树脂包埋,最后将组织块切成0.25—0.5微米半薄切片,在透射电镜下观察。     

SARS CoV感染Vero E6的电镜研究

我们用广州地区临床确诊的SARS病人的咽拭子标本感染Vero E6细胞,将感染3天即严重病变的Vero E6细胞进行3％戊二醛和l％锇酸双固定,经乙醇脱水后用Spurt包埋剂包埋。样品进行超薄切片和用醋酸氧铀和柠檬酸铅双染色后即可用透射电子显微镜进行观察。正常的Vero E6细胞也同上操     

一株来自脑炎患者的类C型逆转录病毒形态学研究

在探讨神经系统疾病病毒病因的研究中,蓝祥英等从一例脑炎患者血细胞培养中获得一株可检出逆转录病毒样颗粒,称为CM_1的细胞株后,又将CM_1细胞株的无细胞滤液转化另一多发性硬化患者外周血淋巴细胞,而成CM_2细胞株。本文报告CM_2细胞株及其病毒的超微形态。材料和方法:培养传代的CM_2细胞以及加PHA和TPA激活的CM_2细胞分别离心成团,4％戊二醛固定,常规方法包埋,制备超薄切片,铀一铅双染色,JEM1200EX电镜观察。结果和讨论:培养传代的CM_2细胞以及经加PHA和TPA激活的细胞,大小约9—15微米,个别巨大细胞可达20微米以上。细胞核明显多形性,核内以常染色质为主,胞浆以丰富核蛋白体     

蛋白质晶体结构的研究

应用电子显微学方法研究蛋白质薄晶体结构,通常使用负染色方法。然而它存在缺陷:负染色剂在电子束照射下会发生变化,如醋酸铀体积减少达15％,这会引起蛋白质表面移动(P.Un-win)。其次由于负染色液与氨基酸残余侧链基因的化学作用。会出现正的或负的染色,使得图象难以解释(W.Chin)。最后负染色的样品大约只能获得15～20A的分辨率。如不进行染色,也有问题:象衬度非常弱;存在真空损伤——蛋白质从含水状态到电镜真空中,因干燥而引起损伤;最后是幅射损伤——蛋白质晶体对电子束非常敏感,典型的蛋白质晶体,大约在le/A~2的电子剂量时就开始被破坏(Stenn)。这样的剂量是远小于通常观察时的剂量。为解决这些问题,A.Klug等人采用下列方法:用相位衬度成象;用葡萄糖取代水介质,由于葡萄糖不挥发,有利于真空保     

小胆管上皮细胞和肝硬化的胶原纤维增生——电镜观察

胶原纤维增生是肝硬化形成的关键过程。在肝硬化形成过程中往往有小胆管增生,而增生的小胆管周也是肝纤维化的主要部位之一。但小胆管上皮细胞与胶原纤维生成的关系尚未完全明了。本文报告对肝硬化等肝病活检标本中小胆管的观察并探讨小胆管上皮细胞在胶原纤维增生中的作用。材料和方法:9例慢性肝炎、8例病理诊断为肝硬化的临床活检和6例胆道梗阻而行外科手术的肝组织标本,戊二醛、四氧化锇双固定,常规包埋制备超薄切片,铀一铅双染色,JEM1200EX电镜观察。     

精索静脉曲张不育者精子的超薄切片和冷冻蚀刻的电镜观察

精索静脉曲张影响精子发生和精液质量,导致男性不育。为探讨不育的原因,本实验采用超薄切片和冷冻蚀刻复型膜的电镜观察。材料和方法:两例青年男性不育者,年龄为29岁,31岁,婚后三年不育,有双侧中度精索静脉曲张。超薄切片制备:2.5％二醛,1％锇酸双固定,酒精脱水,环氧树脂812包埋,超薄切片厚度500埃左右,铀、铅双染色。冷冻蚀刻复型膜制备:新鲜精液固定于2.5％戊二醛,经30％甘油生理盐水处理12小时,BAF—400D高真空冷冻蚀刻仪制成复型膜,电镜观察。观察结果:超薄切片:精索静脉曲张患者精液内可见头帽期和顶体期精子细胞,且形态异常,如顶体扩张,细胞核染色质松散,核内出现大空腔。发育成熟的精子头畸形,中段线粒体排列紊乱等。冷冻蚀刻复型膜:患者     

显示弹性纤维系统的一种鞣酸细胞化学染色方法

弹性纤维是结缔组织中的一种重要成分。弹性纤维系统包括三种不同类型的纤维,分别称为弹性纤维、前弹性纤维及耐酸纤维。用常规透射电镜制备方法只能显示弹性纤维,而且其电子密度及反差均不够理想。如在电镜标本的制备过程中,加入鞣酸则能很好地显示弹性纤维的两种成分及三型纤维。鞣酸加入戊二醛固定液或鞣酸加入醋酸铀染色液的方法,均已有过报道,作者对常规固定的标本,在染色前用鞣酸处理,获得良好的效果,现介绍如下。     

新发现的几个微生物超微结构

在用电镜系统地观察大量的细菌超薄切片标本中,偶然发现了几个新的超微结构。例如霍乱弧菌的多层外膜泡(multilayer outer-membrane);钩端螺旋体的各种球状体(various spheroid),以及支原体的细胞内出芽(intracellular budding)。材料和方法:一,材料:所用菌种分别由各类细菌专业实验室提供,于培养至既定时间取样。二,方法:从固体培养基上刮取菌苔,或从液体培养物中离心分离菌体。用戊二醛和四氧化饿固定,系列乙醇脱水,Epon812树脂包埋,LKB超薄切片机切片,乙酸双氧铀和柠檬酸铅染色,H-660透射电镜观察。     

生物样品制备中铅染色方法的改进

铅是原子序数为82的重金属元素，是目前应用最广的透射电镜生物样品制备中使用的电子染色剂。铅染色剂对细胞的超显微结构具有广泛的染色作用，如对细胞的膜结构、细胞核、染色质、胶原纤维等都有很好的染色效果。关于透射电镜生物样品制备中铅染色方法经常使用的有如下两种。     

提高电镜超薄切片染色效率的自制装置

用传统的方法进行透射电镜超薄切片染色费时费工,且易造成污染,本文介绍一种自制的染色装置能很好地解决这一问题,提高染色效率,不同生物样品的超微结构保存良好、清晰.     

电镜生物样品制备与观察中污染问题的探讨

电镜生物样品制备与观察中污染问题的探讨陈文列陈莲云钟秀容（福建医科大学电子显微镜室，福州３５０００４）在生物医学样品的透射电镜观察中，一般见到的污染物常被认为是超薄切片染醋酸铀、柠檬酸铅未洗净而产生的沉淀，但实际上污染源可来自于固定至观察全过程，本文...     

马铃薯脱毒组培苗的电镜检测研究

马铃薯脱毒组培苗生产是马铃薯脱毒种薯繁育体系的重要环节,脱毒效果是脱毒组培苗质量的主要评价指标,直接影响到核心种薯的质量及整个体系的运行,因此,脱毒效果的检测是该体系的一个重要的技术组成部分。本项研究应用电镜技术系统地试验了对马铃薯脱毒组培苗的检测方法。(1)负染液的选择。应用烟草花叶病毒(TMV)、香石竹斑驳病毒(CarMV)、马铃薯病毒X(PVX)三种具有代表性的不同形态的植物病毒,对钼酸铵、磷钨酸钠、钨酸钠、醋酸铀等四种染液进行选择,其中2％钼酸铵(pH6.4)对球形病毒CarMV染色极佳,     

透射电镜超薄切片滴管式染色法的改进

在应用透射电镜超薄切片滴管式染色法的基础上,对其进行了一些改进,使其操作更为方便高效,在避免染色操作中铅污染的同时也很好地避免了铀污染,取得了比较好的效果。