应用ELISA法检测静脉注射用人血免疫球蛋白抗补体活性

目的　建立检测静脉注射人血免疫球蛋白的抗补体活性的ELISA方法及其相应的标准品。方法用C1q包被酶标板 ,以辣根过氧化物酶标记的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA HRP)作为酶标记物 ,邻苯二胺为底物。结果　应用ELISA法检测静脉注射用人免疫球蛋白抗补体活性具有准确性高 (97 2 % ) ,精确性好 (试验内精密度为6 7% ,试验间精密度为 9 1% ) ,特异性强 ,灵敏性高 (测定限度为 0 2ACA单位 ,测量限度为 0 3ACA单位 )等特点。结论　ELISA法检测抗补体活性简便、快捷、准确     

静脉注射用免疫球蛋白的抗补体活性及部分免疫学特性测定

本文采用100CH_(50)法测定静脉注射用免疫球蛋白(IVIG)的抗补体活性(ACA)。对IVIG的pH,Na~+含量及不同成分的缓冲液进行了试验比较;ACA重复测定结果的变异系数在15％以内;MG在含微量IgG多聚体情况下,多聚体与ACA的关系不明显;17批MG都含有麻疹抗体和白喉抗体,IgA含量不等,不含IgM。     

静脉注射人免疫球蛋白的质量控制

静脉注射用人免疫球蛋白 (IVIG)在抗体置换、免疫调节等方面有着广泛的应用。由于IVIG经静脉注射 ,且用量较大 ,其质量控制尤为重要。控制IVIG质量主要包括IgG的完整性、抗补体活性 (ACA)、多聚体含量、杂蛋白含量、抗体效价、病毒安全性等方面。     

冻干低pH静脉注射用人血免疫球蛋白的试制

作者参照美国 Cutter Biological 的免疫球蛋白第三代产品 Gamimune-N~R 的工艺,以低温乙醇法从人血浆分离的组分Ⅱ沉淀糊为原材料,经过再加工制得最终酸碱度为 pH 4.0、蛋白浓度为5%,麦芽浓度为10%的冻干制剂。该制剂的 r 球蛋白纯度>98%;IgG 分子单体为100%,无聚合体和碎片;IgG 亚类均存在并与正常人血浆构成比相似;抗补体活性(ACA)和前激肽释放酶激活物活性(PKA)测定均符合有关质量标准。该制剂的冻干剂型较液体剂型对热的稳定性明显提高。安全性良好、疗效肯定。     

重组牛碱性成纤维细胞生长因子治疗Ⅱ度烧伤的临床疗效

目的 观察重组牛碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对烧伤创面愈合的治疗作用。方法 选择浅Ⅱ度和深Ⅱ度烧伤病例共920例,分别用bFGF治疗其烧伤创面,用药剂量为144U/cm2观察伤后8d（浅Ⅱ度）和15d（深Ⅱ度）创面愈合率,以及创面完全愈合时间。结集8d愈合率总体治疗组为77.6％±24.4％,对照组为51.7％±26.4％;完全愈合时间总体治疗组为9.6±2.4d,对照组为12.6±2.9d。15d愈合率总体治疗组为75.2％±26.3％,对照组为53.3％±25.4％;完全愈合时间总体治疗组为17.5 ±4.5d,对照组为21.9±5.5d。结论 bFGF具有明显的促进Ⅱ度烧伤创面愈合的作用。     

大规模生产静脉注射用人血免疫球蛋白工艺的研究

本文介绍一种制备静脉注射用人血免疫球蛋白(IVIG)的工艺。工艺流程为:以低温乙醇法的 FⅢ上清为原料,经 NMWL 为3万的超滤膜脱醇,DEAE-Sephadex-A-50吸附,pH3.8～4.0条件下超滤,最后添加麦芽糖等稳定剂冻干。本工艺具有收率高、质量好、生产过程简单温和、经济效益显著等特点,适于大规模生产。     

肝癌患者血清免疫球蛋白检测的临床价值研究

目的探讨肝癌患者体液免疫指标血清IgG、IgA、IgM及与AFP的关系的临床价值。方法采用免疫透射比浊和化学发光法检测免疫球蛋白和AFP,同时与50例健康对照组的检测结果进行比较。结果肝癌的IgG、IgA比正常人明显升高(P<0.01),IgM与正常人无差异(P>0.05);AFP阳性和AFP阴性肝癌患者的免疫球蛋白无差异(P>0.05);肝癌患者的AFP与免疫球蛋白无相关性。结论肝癌患者的体液免疫功能增强,AFP与免疫球蛋白无相关性。     

散射免疫比浊法检测类风湿性关节炎患者血清CRP和免疫球蛋白研究

目的探讨散射免疫比浊法检测类风湿性关节炎患者血清CRP和免疫球蛋白的意义。方法采用散射免疫比浊法对63例类风湿性关节炎患者血清CRP和血清免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)进行检测,同时35例健康体检者作为对照,分析其结果。结果类风湿性关节炎患者与正常人比较血清CRP、IgG、IgA、IgM水平升高,活动期患者与正常组相比差异有统计学意义(P<0.01);非活动期患者与正常组相比差异也存在统计学意义(P<0.05)。经治疗后,患者治疗后血清CRP显著低于治疗前(P<0.01),而血清免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)无显著变化(P>0.05)。结论检测类风湿性关节炎患者血清CRP和免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)水平的变化规律,对临床诊断、评价疗效和预后提供一定的参考依据。     

静脉注射人免疫球蛋白生产工艺、质量控制的演变及评价思考

<正>人血浆中含有约20种蛋白,其中大部分是白蛋白(35～40 mg/mL),免疫球蛋白的浓度约为8～12 mg/mL。血液中的免疫球蛋白分为IgG、IgA、IgM、IgD及IgE,前3者占比分别约为75%、15%、10%,根据亚型不同IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4,不同亚型的IgG半衰期不同,IgG1、IgG2和IgG4的半衰期3～4周,IgG3的半衰期仅约2周。     

高效液相色谱法测定婴幼儿乳制品中免疫球蛋白IgG的含量

本文建立了一种测定婴幼儿乳制品中免疫球蛋白IgG含量的方法。针对前处理方法及高效液相色谱条件进行实验研究,确定了提取溶剂、离心速率、超声时间、样品稀释倍数、调pH值所用酸及检测波长、色谱柱、流速、柱温、流动相的pH值的参数值,采用保留时间定性,峰面积外标法定量。方法检出限为0.7μg.mL-1,回收率为92.16%,标准偏差3.34%,IgG浓度在0.1~1.0mg.mL-1范围内与其色谱峰面积之间为线性关系:y=2519x-24.71(R2=0.9992)。对实际样品中的IgG含量进行了测定。本文方法所获得的色谱峰分离度优于国标方法。     

抗流感病毒鸡卵黄免疫球蛋白IgY的制备和性质

用流感病毒免疫产蛋鸡,获得的免疫卵黄经两步盐析和一步凝胶过滤分离得到的IgY经SDS-PAGE分析其纯度在95%以上,纯化的IgY经胃蛋白酶(pH=4 0,37℃)酶解后,得到的片段抗体为Fab。采用竞争抑制ELISA法对IgY和Fab的免疫反应活性进行了对比,表明IgY经胃酶切解后保留了约70%的反应活性。     

三种方法检测静注免疫球蛋白中IgG含量的比较

目的 选定检测静注免疫球蛋白中ＩｇＧ含量的方法。方法 采用紫外分光法、火箭免疫电泳法、单 向辐射状免疫扩散法检测静注免疫球蛋白中ＩｇＧ含量。结果 火箭免疫电泳法与紫外分光法和单向辐射状免疫扩 散法之间差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）,紫外分光法与单向辐射状免疫扩散法之间差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。紫外 分光法变异系数（ＣＶ％）最小。结论 为选定静注免疫球蛋白ＩｇＧ含量检测方法提供了依据。     

进化免疫球蛋白结合分子LD5的原核表达、纯化及结合活性

目的对新型进化免疫球蛋白(Ig)结合分子LD5进行原核表达和纯化,并鉴定其结合活性。方法将LD5基因片段克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠杆菌后,IPTG诱导表达。以8mol/L尿素裂解菌体后,上清经Ni2+-NTA柱纯化,并对纯化蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。以ELISA和Dot blot对LD5蛋白结合IgG、IgM活性进行鉴定。结果LD5分子在大肠杆菌中获得成功表达,表达的融合蛋白相对分子质量为59000。Western blot表明纯化的LD5蛋白能特异结合IgG。ELISA结果显示,LD5在结合IgM上较SpA具有明显的优势。结论LD5分子在大肠杆菌中已成功表达,纯化的LD5蛋白保留了天然Ig结合分子的结合活性。     

静注人免疫球蛋白在其适应证及超适应证中应用的研究进展

静注人免疫球蛋白（human immunoglobulin for intravenous injection,IVIG）作为一种重要的人免疫球蛋白制品广泛应用于多种疾病的预防和治疗。目前,美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration,FDA）批准的IVIG适应证有8种,中国食品药品监督管理局（China Food and Drug Administration,CFDA）批准的适应证为4类。由于药品说明书内容的局限性、修订的滞后性及复杂性,在实际临床诊疗过程中,国内外更多的是将IVIG用于超适应证治疗。因此,本文就IVIG在其适应证及超适应证中应用的研究进展作一综述,以期深入了解国内外IVIG的超适应证用药情况,为IVIG的合理使用提供参考。     

静注人免疫球蛋白在治疗自身免疫疾病和炎症所引发皮肤病的应用

静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)是由多种蛋白组成,包括IgG、IgM、IgA、IgE抗体及少量的白蛋白,还包括氯化钠、麦芽糖等物质。由于IVIG从健康人血浆中提取,因此含有多种人体所需要的自然抗体,一直以来被用作治疗传染性疾病和免疫缺陷疾病。近些年发现IVIG可以治疗多种临床疾病,包括自身免疫和炎症疾病及其所引起的多种皮肤科相关疾病。本文针对IVIG治疗因自身免疫系统紊乱或炎症引发的皮肤疾病的应用作一综述。     

人免疫球蛋白中甲肝抗体效价ELISA检测方法的建立及验证

目的建立人免疫球蛋白产品中甲肝抗体效价ELISA检测方法,并对该方法进行验证及初步应用,以期满足《中国药典》三部(2015版)对人免疫球蛋白产品中甲肝抗体效价的质量控制检测要求。方法将人免疫球蛋白甲肝抗体国际标准品(97/646)稀释后,采用建立的ELISA法检测甲肝抗体效价,分别验证方法的线性、准确性和精密度,试验均重复3次。应用建立的方法检测我国3家企业共13批人免疫球蛋白产品中的甲肝抗体效价。结果甲肝抗体效价在10~50 m IU/ml浓度范围内线性良好,相关系数为0.994 8;用建立的方法检测浓度为15、25、35 m IU/ml人免疫球蛋白甲肝抗体国际标准品的回收率在86.9%~104.4%之间,3次测定结果的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于10%。用建立的方法检测我国3家企业共13批人免疫球蛋白产品中的甲肝抗体效价,结果均低于《中国药典》三部(2015版)对甲肝抗体效价不低于100 IU/ml的新增要求。结论建立的ELISA方法快速、准确,可用于检测我国人免疫球蛋白产品的甲肝抗体效价。     

液液旋流器中粒径、流量和效率的关系

在固液旋流器中 ,流量和粒径被孤立地看作是影响分离的两个参数。本文以除油旋流器的实验结果为基础 ,阐述了液液水力旋流器中流量的作用机理 ,以及液滴和流量之间的联系 ,综合分析了粒径和流量对分离的影响 ,定性地给出了液液水力旋流器的粒径 -流量 -效率曲线 ,并为液液旋流器的深入研究提供了新思路     

论纺前粘胶液管道输送中熟成度的变化

运用化工传递理论剖我液在管道输送中熟成度的变化,揭示了粘胶液熟成度分布状态,并探讨成品质量的影响 。     

静注人免疫球蛋白产品中活化Ⅺ因子活性凝血酶生成试验检测方法的建立

目的建立静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)中活化Ⅺ因子(activated factorⅪ,FⅪa)活性凝血酶生成试验(thrombin generation assay,TGA)的测定方法。方法采用自动校正凝血酶生成(calibrated automated thrombogram,CAT)分析仪,建立IVIG中FⅪa活性检测方法,并确定方法的线性范围和检测限,验证方法的精密度和准确性。采用建立的方法对4家血液制品公司的29批IVIG产品进行FⅪa活性定量测定。结果 FⅪa浓度在3. 34～27. 84 mIU/mL范围时,与凝血酶峰值浓度(peak thrombin concentration,PTC)呈良好的线性关系,回归方程为Y=-0. 022 8 X~2+1. 891 6 X+10. 282,R~2=0. 989;检测限为2. 76 mIU/mL;供试品的6次测定结果 RSD为12. 9%;低、中、高浓度加标样品的回收率分别为86. 7%、116. 7%、121. 6%,RSD分别为16. 4%、19. 8%、8. 4%。29批IVIG产品中,不同厂家及相同厂家不同批次间FⅪa活性均存在一定差异。结论建立了用于检测IVIG产品中FⅪa活性的TGA方法,且具有良好的线性、精密性及准确性,可用于评价IVIG产品的致血栓风险。     

人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白双抗体夹心ELISA检测法的建立及验证

目的建立人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,ALG)双抗体夹心ELISA检测法,并进行验证。方法以兔抗猪Ig G包被酶标板,HRP酶标记的鼠抗猪Ig G为二抗,建立人血清中ALG含量的双抗体夹心ELISA检测法,并对方法中包被浓度及二抗浓度进行优化,同时验证该方法的重复性、敏感性、准确性、特异性及稳定性。采用优化后的方法对14位严重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)患者进行ALG的血药浓度监测(therapeutic drug monitoring,TDM)。结果最佳包被浓度为1∶2 000,最佳二抗稀释度为1∶8 000。参考品浓度在4.9~5 000μg/ml范围内标准曲线的四参数Logistic曲线拟合较好,R2值为0.991 1,在4.9~156μg/ml范围内的线性拟合也较好,R2值为0.991 5,批内重复性CV值均10%;其检测底限为0.39μg/ml;浓度为500、50及5μg/ml参考品的回收率为91.2%~107.0%;该方法可特异性检测出注射ALG患者血清中ALG含量;包被好的ELISA板及二抗、底物于4及37℃条件下分别保存1~3周及1~3 d后检测结果均较稳定。经DAS 3.1.4软件分析,14名经ALG治疗的SAA患者血清中ALG的曲线下面积(AOC)为(7.3±5.1)mg/(L·d)(95%CI),半衰期(t1/2)为(20.65±38.67)d(95%CI)。结论该方法具有良好的重复性、准确度及稳定性,可用于ALG的TDM。