玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测

建立了玉米转基因成分中35S启动子非同源模板的竞争定量PCR检测系统.竞争定量PCR的关键问题是内标物的制备.实验中非同源模板的构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严紧型扩增,回收预期DNA片段并将其构建到T-easy载体上.通过调整非同源模板浓度使竞争物PCR产物亮度与1%GMO玉米的亮度相同,从而确定转基因玉米的检出限为1%.然后以确定的内标物浓度与不同含量的GMO玉米样品进行竞争定量PCR反应,以此进一步确定样品中GMO的含量范围.     

转基因食品的快速PCR鉴定

用十六烷基-二甲基-乙基-溴化铵(CTAB)法快速高效地从样品中提取了可供分析的基因组DNA，经PCR扩增，鉴定了含有35S启动子和NOS终止子的转基因样品，该方法的灵敏度可达0．1％，并且具有很好的稳定性。     

玉米中转基因成分的定性PCR检测

利用改良CTAB法提取玉米产品的基因组DNA,应用PCR检测方法,并以玉米特异性内源基因IVR为内参,花椰菜花叶病毒35S启动子（CaMV35S启动子）、农杆菌胭脂碱合成酶终止子（NOS终止子）为靶基因检测玉米中是否存在转基因成分。实验结果表明,有些玉米样品中存在转基因成分,表明市场上存在未经标识的转基因玉米及其加工品。     

多重PCR方法检测食品中转基因成分

根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止子（NOS）的序列，设计合成了两对不同的引种和相对应的两种荧光双链探针（FDCP），分别建立了多重PCR，应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法，并利用该套方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测，发现13份样品有6份检出35S启动子、NOS终止子，其余7份样品的检测结果为阴性，表明作者建立的多重PCR方法能有效检测出35S和NOS成分，其中多重PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点，多重荧光PCR法则更为简便、快速、准确。     

非转基因身份保持体系的经济因素分析

由于转基因食品可能具有潜在的环境安全性和食用安全性问题，欧盟、日本、韩国等许多国家纷纷制定了严格的转基因食品管理法规，要求转基因含量超过一定限值的产品都应进行转基因标识，但消费者更愿意选择非转基因食品。据报道，2003年美国转基因大豆种植量占大豆总种植量的81％，在非转基因农产品的生产和加工过程中难免会造成转基因材料的污染，     

郑州工程学院学报2004年总目次

第 1期粮食粉尘的性质与粉尘爆炸关系的研究周乃如 ,朱凤德 ,张　音 ,等 ( 1)……………………………………………………锈赤扁谷盗与其它几种储粮害虫对磷化氢的耐受性比较王殿轩 ,原　锴 ,武增强 ,等 ( 4)…………………………………非晶颗粒态木薯淀粉化学反应活性研究梁　勇 ,张本山 ,杨连生 ,等 ( 9)……………………………………………………制备微孔淀粉工艺条件的研究周　坚 ,沈汪洋 ,万楚筠 ( 14)…………………………………………………………………玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测栾春光 ,马　林 ,郝彦玲 ,等 ( 19)…     

转基因食物中常见外源基因PCR检测方法的建立

通过对CTAB法、胍-氯仿法和试剂盒法三种植物基因组提取方法进行比较,筛选出回收率最大的CTAB法用于本实验样品基因组的提取。其次,以转基因作物中9种常见的外源基因序列为模板,设计出9对引物,拟扩增片段皆小于200bp以适用于深加工食品的检测,并进行了引物的特异性、灵敏度、适用性验证试验。最后,将所建立的普通PCR检测方法应用到了转基因样品的实际检测中。结果表明,所建立的针对转基因作物中9种常见外源基因的PCR检测方法特异性强、灵敏度高,相对检测限可达0.1%～0.5%,约18～90拷贝的基因组。因此,该方法可用于转基因食品及加工品中常见基因的筛选检测。     

玉米中转基因成分的定性PCR检测

利用改良 CTAB 法提取玉米产品的基因组 DNA,应用 PCR 检测方法,并以玉米特异性内源基因 IVR 为内参,花椰菜花叶病毒 35S 启动子(CaMV35S 启动子)、农杆茵胭脂碱合成酶终止子(NOS终止子)为靶基因检测玉米中是否存在转基因成分.实验结果表明,有些玉米样品中存在转基因成分,表明市场上存在未经标识的转基因玉米及其加工品.     

应用间接ELISA方法定量检测转基因抗虫玉米

应用纯化的Bt1杀虫晶体蛋白质作为标准蛋白和免疫抗原，通过抗体-抗原-酶标抗体反应，建立了间接酶联免疫吸附测定法（ELISA），以快速检测转基因抗虫玉米中的BtL表达蛋白，用建立的ELISA法对4种进口玉米实物样品进行了测定，实验结果得到了免疫印迹分析的验证，并与进口试验盒方法的定量分析结果相一致。     

大口径毛细管气相色谱法测定汽车漆中乙二醇乙醚乙酸酯的含量

建立了汽车漆中乙二醇乙醚乙酸酯含量的分析方法，汽车漆样品经正己烷萃取后，以乙二醇乙醚为内标物，采用大口径毛细管气相色谱法分析，方法快速、准确、重现性好。回收率在98．5％－101．4％，相对标准偏差CV为0．65％（n=5)。     

大豆LEA蛋白Em的表达可提高大肠杆菌和烟草耐盐性

将大豆Em（LEA1）基因构建到原核表达载体pET28-Em中．转化大肠杆菌，经SDS—PAGE电泳及电喷雾质谱鉴定．结果显示，经IPTG诱导的重组菌可表达约18kDa的特异蛋白．这种蛋白具有良好的可溶性和热稳定性．在含800m mol／L NaCl培养基中，含空载体的对照菌生长迟滞期约为50h，含Em基因的重组菌生长迟滞期为32h，表明大豆Em蛋白的表达可提高大肠杆菌对盐胁迫的适应能力及耐盐性．在此基础上，构建了含Em基因的真核表达载体pBI—Em．再利用根癌农杆菌介导法将该基因转入烟草．PCR及RT-PCR结果显示，大豆Em基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中，并能正常转录．转化率为53％．转Em基因烟草植株在含有质量分数1．5％NaCl的培养基中生长状况好于对照植株，叶片的叶绿素含量高于对照植株的叶片．结果表明，大豆Em基因的表达可提高大肠杆菌和转基因烟草的耐盐性．     

高效液相色谱法测定高纯度邻羟基苯甲醚

对用高效液相色谱-反相色谱内标法测定高纯度邻羟基苯甲醚进行了研究。采用C18反相柱,流动相为V（甲醇）：V（质量分数为0．2％乙酸水溶液）=50：50,紫外检测波长为275nm,流速为0．8mL／min。邻羟基苯甲醚的最低检测质量浓度为0．04ug／mL,在0．1～100ug／mL范围内邻羟基苯甲醚的峰面积与质量浓度的线性关系良好（y=0．9999）。以对苯二酚为内标物,用内标法检测高纯度邻羟基苯甲醚含量。用此方法邻羟基苯甲醚回收率为99．9％～100．2％。     

转基因产品的PCR—ELISA液相杂交检测条件研究

确定杂交液成分，选择探讨浓度，将5′端标记生笔素的PCR扩增产物与5′端标记地高辛的探针呈液相混合，在PCR管中按优化后的条件（92℃，5min；55℃，5min）进行液相杂交。杂交产物通过链霉亲和素被固定在微孔表面，同时在含高浓度二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）的杂交液中将非特异结合的探针解离，然后对被固定的特异杂交产物进行ELISA检测。PCR－ELISA液相杂交检测方法操作简便，特异性高，避免了繁琐的杂交程序和对人体有害的溴乙锭，适用于转基因产品及春加工食品的快速检测。     

籼型杂交水稻保持系IR58025B pin2转基因植株

杂交水稻技术在中国及其他国家已作为发展水稻生产,满足不断增加的人口对粮食需要的一条关键途径．而另一方面,据估计因螟虫危害造成水稻年均损失为5％～10％,有时高达60％～95％．应用马铃薯蛋白酶抑制剂基因(potato proteinase inhibitor Ⅱor pin2)进行粳稻的遗传转化实验表明,其转基因粳稻植株对螟虫的抗性显著提高,且该转基因能在后代中稳定遗传(Duan et al．,1996)．为了改良杂交水稻对螟虫的抗性,以大面积应用的籼型杂交稻保持系IR58025B成熟胚为外植体材料、以pin为目的基因、通过基因枪法高效获得了大量转基因植株．PCR检测结果表明转基因pin2成功地整合于植株基因组中．三化螟幼虫饲喂试验结果初步证实了该转基因在转基因当代植株中的表达．     

大豆PM2蛋白及其结构域可提高烟草耐盐性

深圳市微生物基因工程重点实验室已利用大肠杆菌异源表达体系证明了大豆PM2蛋白（LEA3）的耐盐功能，并首次证实PM2蛋白序列中的22-氨基酸结构域（PM2B）为一主要耐盐结构域．为在高等植物中进一步验证PM2蛋白及22-氨基酸结构域的耐盐功能，将大豆PM2及PM2B基因克隆至植物表达载体pB1121，并利用农杆菌侵染法转化烟草叶盘，通过PCR扩增法鉴定转基因植株．结果表明PM2及PM2B基因已整合至转基因烟草的基因组DNA中，转化率分别为44．4％和62．5％．与含1．5％（质量分数）NaCl的培养基比较，转基因烟草植株的生长状况和叶片的叶绿素含量，结果表明转PM2和PM2B基因的烟草耐盐性明显高于对照（转化pB1121载体）植株．这说明转PM2和PM2B基因可提高烟草的耐盐能力．可见，PM2蛋白及22-氨基酸结构域在原核和真核细胞中的耐盐保护作用可能是相似的．     

气相色谱法测定玉米须中邻苯二甲酸二丁酯

建立以气相色谱技术测定玉米须中环境激素邻苯二甲酸二丁酯（DBP）的含量,以了解玉米须中DBP的含量状况．玉米须样品用石油醚提取,采用气相色谱法进行分析检测玉米须中DBP的含量．DBP的标准曲线回归方程为Y=1857．7x＋720．63,相关系数为0．99995,平均回收率为102．17％,RSD为8．75％,n=5．该方法灵敏度较高,结果准确,适用于玉米须中DBP含量的检测,能够准确的反映玉米须中邻苯二甲酸二丁酯的含量．     

高效液相色谱法测定残渣中TA和BA的含量

应用高效液相色谱法,采用非极性键合硅胶固定相,以醋酸盐缓冲溶液为流动相,铜离子为反离子,ＵＶ２４０ｎｍ检测,内加法定量,同时测定了ＴＡ残渣中对苯二甲酸（ＴＡ）和苯甲酸（ＢＡ）的含量。考查了流动相中的甲醇含量、铜离子浓度和ｐＨ值的影响。ＴＡ和ＢＡ的回收率分别为９９．６％～１０９．０％和９１．４％～１０９．９％,变异系数分别小于０．９２％和７．４１％。该方法与气相色谱法相比,具有样品不需预处理、分析速度快等优点。     

玉米储藏过程中品质指标变化研究

对玉米生活力测定方法进行了研究，得到最佳的测定条件为：红四氮唑(TTC)浓度为0．5％，加热温度45℃，加热时间为10 min．对陈化的不同玉米样品脂肪酸值、发芽率和生活力进行了测定，实验表明：玉米生活力可以做为玉米储藏品质的判断指标．     

气相色谱法测定茴香醛

选用8％OV－210为固定相，间甲苯酚为内标物，测定茴香醛的含量。结果表明，该方法快速、准确，标准偏差＜0.1％，回收率为98.2％～99．3％。