治疗性双质粒HBV DNA疫苗的纯化与检定

目的研究双质粒HBVDNA疫苗(pS2.S和pFP)的纯化工艺,并建立质控标准。方法首先对两工程菌(DH5α/pS2.S和DH5α/pFP)的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;然后通过三步柱层析(依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析)进行质粒纯化,并检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定。结果质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量的RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,最后经阴离子柱层析有效去除内毒素,并浓缩了质粒,质粒得率为0.9～1.1mg/g菌,质粒总回收率达78%。三批终产品全面质量检定均符合规定。结论建立了稳定的双质粒HBVDNA疫苗(pS2.S和pFP)的纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定基础。     

橡胶密封件生产工艺与质量检测

因其密封件几何形状简单,使用方便,广泛被采用运用到各流体系统中。生产橡胶密封件的厂家逐步形成完整的设计、加工体系,但密封件的生产工艺过程繁琐,质量性能检测不容忽视,本文针对生产工艺过程及其成品的质量检测进行梳理,在关键工序容易出现的质量波动进行预控,以求对密封件的质量有所保证。     

疫苗生产工艺的验证

<正>近年来,国际上不断提高对疫苗生产质量的要求,并逐步强化生产工艺的验证。各国的疫苗质量管理部门越来越意识到生产工艺验证对保证疫苗质量的重要性,因此纷纷验证其生产工艺是否符合预定     

DNA疫苗研究的发展方向

为促进海内外学术交流,《中国生物制品学杂志》自本期起,不定用地刊出国内外专家学者就生物技术领域的热点问题撰写的述评。欢迎业内人士就已发表的述评提出不同意见,并展开讨论,共同促进生物制品事业的发展。     

疫苗开发的动向

疫苗作为防病的手段已有多年历史 ,在消灭天花 ,降低小儿麻痹、麻疹等许多疾病的发病率方面均起了重要的作用。但是 ,当前仍有一些疾病 ,如癌症、ＨＩＶ、结核以及疟疾等发病率逐年上升 ,难以治愈 ,严重威胁着人类的健康。因此 ,许多科学家致力于疫苗的更深入研究。随着生物化学、分子生物学、免疫学等学科的发展 ,近 2 0年的时间内 ,疫苗领域取得了很大的进展 :一、纯化疫苗及重组疫苗的应用 :近年来 ,纯化疫苗及重组疫苗发展较快 ,目前已经研制成功的有无细胞百日咳疫苗、嗜血性流感杆菌、脑膜炎球菌、肺炎球菌、葡萄球菌、Ｂ群链球菌等多…     

治疗用质粒DNA的纯化工艺

目的探索适合大规模生产治疗用质粒DNA的纯化工艺。方法采用中空纤维柱收菌、碱裂解,再应用中空纤维柱浓缩质粒,经分子筛、亲和、离子交换等层析分离纯化质粒DNA,并应用凝胶电泳、PCR、核酸蛋白检测仪、BCA蛋白检测试剂盒和内毒素检测试剂盒对所纯化的质粒DNA进行全面检定。结果所获得的超螺旋质粒DNA达到样品总质粒的91.2%;质粒DNA总纯度为1.8;内毒素含量小于10EU/mg;几乎检测不到蛋白质残留,未检出基因组DNA残留。各项指标均符合有关质量标准。结论所采用的纯化工艺省时省力,制备的质粒DNA纯度高,适用于大规模生产治疗用质粒DNA。     

DNA疫苗的安全性分析

近年来,DNA疫苗的研究已引起了国内外学者的广泛关注,并取得了迅速发展。在这种新型疫苗进入临床研究前,必须对其安全性作出评价。本文对该疫苗接种后能否整合入宿主细胞基因组中、能否导致原癌基因激活或抑癌基因的抑制等安全隐患、DNA疫苗的标准化及接种DNA疫苗风险与效率比等作了比较全面的分析。     

治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂的稳定性

目的考察治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂A、B的稳定性。方法按照《中国药典》三部(2010版)方法,对治疗性双质粒HBV DNA疫苗制剂A、B分别进行影响因素试验、加速试验、长期试验,在不同条件下考察样品的基本性状,特别检测质粒DNA的超螺旋比例及进行细胞学转染试验和体内药效学试验。结果双质粒HBV DNA疫苗制剂在破坏性因素的影响下,于光照(4 500±500)Lx、高温(40和60℃)、反复冻融(-20℃←→4℃和-20℃←→RT)条件下5 d均不稳定;匀速振动(140和240 r/min)10 d不稳定;在(25±2)℃、相对湿度(60±10)%的条件下放置1个月不稳定;在温度2~8℃条件下放置2年保持稳定。结论双质粒HBV DNA疫苗制剂对光照、温度敏感,应避光低温保存,避免反复冻融,适合现代快速长途运输,长期保存应在2~8℃条件下,暂定二年有效期,为治疗性双质粒HBV DNA疫苗的临床用样品的运输和保存提供了依据。     

治疗性双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺研究

目的研究双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法首先通过计算质粒拷贝数,检测工程菌DH5α/pS2.S和DH5α/pFP在传代过程中的遗传稳定性,通过摇瓶培养确定培养基组成,再在30L发酵罐内,通过改变培养基成分、培养时间、补料方式,确定最佳发酵参数。并将确定的最佳发酵参数应用于50L发酵罐连续3批中试规模的发酵,同时考察在发酵培养过程中质粒稳定性和超螺旋质粒DNA的比例。结果工程菌DH5α/pS2.S和DH5α/pFP在连续传代30次后,质粒拷贝数保持稳定。确定最佳发酵参数为以甘油为碳源的培养基培养,梯度恒速流加方式补料,培养时间为10h。通过3批稳定发酵,最终可获得湿菌58.0~71.8g/L,质粒含量可达到1.11~1.58mg/g菌,超螺旋质粒DNA的比例达93%以上。结论已建立了稳定的双质粒HBV DNA疫苗工程菌中试发酵工艺,为进一步规模化生产奠定了基础。     

细菌DNA疫苗的研究进展

DNA疫苗是20世纪90年代初出现的一种新型疫苗,近年来发展迅速,在预防和治疗病毒性疾病及肿瘤等方面效果显著。随着DNA疫苗研究的不断深入,很多细菌DNA疫苗相继出现。本文就细菌DNA疫苗的研究进展作一综述。     

管道射线检测质量控制措施

射线检测广泛应用于管道焊缝内部质量的检验,如果控制不好,将会引起漏检、误判,甚至人为错判,使管道在安装过程中留下质量隐患。针对石油化工装置管道射线检测过程中存在的一些问题,本文结合实例进行了分析,从管道单线图管理、不合格对接焊缝重焊、监督抽查等方面提出了管道射线检测的质量控制措施。     

浅谈企业生产过程中的质量管理

阐述了生产过程中的质量管理的重要性,企业质量管理的方法、企业标准化管理、售后服务、质量控制点建设、质量管理小组活动的作用.     

治疗性HIV-1重组DNA疫苗的构建与免疫效果评价

目的　构建编码HIV- 1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因嵌合的核酸疫苗 ,并评价其免疫效果。方法　将编码HIV -1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因插入到真核表达载体pVAXI中 ,构建HIV- 1治疗性重组核酸疫苗质粒。通过ELISA试剂盒检测免疫恒河猴血清中HIV -1特异性抗体 ,并通过淋巴细胞转化实验检测HIV -1特异性T淋巴细胞增殖反应。结果　构建的重组核酸疫苗质粒pVAXI -MEGp2 4免疫恒河猴后 ,能有效地刺激产生T淋巴细胞特异性增殖反应 ,并诱导产生抗HIV -1特异性抗体。结论　所构建的重组核酸疫苗质粒能诱导机体产生免疫反应。     

水质安全的管理检查方法

构建科学合理的水质安全管理检查方法,不断完善和发展供水水质督查体系是安全饮用水保障领域的重要课题.通过对净水关键环节、水质控制制度的建立和实施、水质标准执行、水质突发事件、净水材料和药剂、水质投诉处理等的研究,提出了水质安全管理检查的流程和具体内容,认为水质安全管理检查应列入供水水质督察体系中,为城市供水水质安全管理提...     

天然玫瑰水生产工艺与质量控制的初报

玫瑰水是由玫瑰鲜花用水蒸馏得到的一种产品。玫瑰水中含多种水溶性芳香活性成分,有浓郁芳香的气味,可消除面部皱纹、去除黑眼圈和眼袋,并可用于面膜护理,是一种天然化妆产品原料。生产过程采用水中蒸馏法,流出液温度与蒸馏时间决定玫瑰水的产品等级。为保证玫瑰水质量,需严格控制生产过程中的各种条件。     

CpG-ODN对乙肝核酸疫苗及重组疫苗免疫效果的影响

目的研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpGODN)对乙肝核酸疫苗及重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响。方法核酸疫苗实验组用CpGODN与乙肝核酸疫苗联合免疫BALBc小鼠,阳性对照组注射核酸疫苗,阴性对照组注射质粒pVAX1;重组疫苗分4个实验组,用CpGODN与不同剂量的重组疫苗配伍后分别免疫BALBc小鼠,阳性对照组注射重组疫苗,阴性对照组注射生理盐水。应用ELISA检测小鼠血清中的抗HBs水平。结果CpG与乙肝核酸疫苗组抗体阳转率比阳性对照组提高3倍,抗体水平提高2倍。CpG与重组疫苗组的阳转率和阳转时间均高于或早于CpG与核酸疫苗实验组。加入CpGODN后,即使重组疫苗用量减少3倍,诱导抗体水平和阳转率均无明显改变。结论CpGODN可提高乙肝核酸疫苗和重组疫苗的免疫效果,并使抗体产生的时间提前。     

P-糖蛋白基因疫苗的构建与鉴定

目的　制备P 糖蛋白基因疫苗。方法　利用PCR方法扩增编码人类P 糖蛋白多药耐药基因序列胞外区约 1kb片段 ,与真核表达载体pcDNA3进行定向重组 ,限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切反应及测序鉴定该重组基因疫苗 ,磷酸钙共沉淀法转染人类K5 62红白血病细胞 ,经G418筛选后 ,免疫组化分析该重组基因疫苗表达产物的抗原特异性。结果　构建了pcDNA3 MDR1重组基因疫苗。限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切分别显示 5 .4kb的载体片段及约 1kb的插入序列 ,测序 948个碱基中除 2个碱基突变外均与原序列排列相符。免疫组化方法证实细胞膜表面MDR1约 1kb片段的表达产物可被抗Pgp抗体识别。结论　构建的pcDNA3 MDR1重组基因疫苗可被市售的Pgp抗体特异性识别 ,具有Pgp抗原特异性     

层析技术纯化核酸疫苗

目的利用层析技术制备高纯度的核酸疫苗。方法用层析技术中的凝胶过滤、亲和、离子交换层析3种方法,依次对核酸疫苗进行纯化,并检测其纯度。结果连续使用3种层析方法获得的DNA达到了理想的分离效果,琼脂糖凝胶电泳未检出RNA,A260与A280的比值介于1.80~2.00之间,其中环状DNA达90%以上。经离子交换层析后的内毒素含量小于10EU/mg DNA,宿主DNA残留量小于0.002μg/μg DNA。结论纯化的核酸疫苗均符合国家标准,为制备核酸疫苗奠定了基础。