RNA干扰Livin基因对甲状腺乳头状癌的增殖及侵袭抑制作用及其分子机制

目的:探讨Livin对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、凋亡及侵袭的影响以及可能的调控分子机制。方法:构建靶向Livin基因的慢病毒sh RNA载体,转染甲状腺乳头状癌细胞株TPC-1,实验分为干扰组、阴性对照组和空白组。应用RT-PCR和Western印迹检测转染Livin-sh RNA后细胞Livin m RNA和蛋白表达水平的变化。应用MTT、流式细胞仪、Western印迹与Transwell侵袭实验检测Livin对甲状腺乳头状癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。并接种于裸鼠模型中,进一步确定Livin在体内对甲状腺乳头状癌细胞的影响。结果:慢病毒Livin-sh RNA载体成功抑制TPC-1细胞中Livin m RNA和蛋白的表达;转染Livin-sh RNA后TPC-1细胞的增殖能力受到明显抑制(P<0.01),转染Livin-sh RNA组、阴性对照组和空白组的凋亡率分别为(15.72±0.21)%,(4.54±0.13)%和(4.87±0.22)%,三组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。干扰组穿膜细胞数明显少于阴性对照组和空白组(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,干扰组细胞AKT、p-AKT及PDK1蛋白表达量均下调(P<0.05),而PTEN蛋白明显上调(P<0.05)。甲状腺乳头状癌裸鼠模型结果表明干扰组肿瘤的生长速度、肿瘤质量[(1.11±0.08)g]明显小于空白组[(1.90±0.15)g]和阴性对照组[(2.10±0.12)g]。结论:沉默Livin基因能抑制甲状腺乳头状癌细胞的增殖、侵袭及体内生长,促使甲状腺乳头状癌细胞凋亡的发生,可能是通过抑制PI3K-AKT信号转导通路来发挥作用。     

体外RNA干扰下调DEPTOR表达对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡能力的影响

目的:研究探讨应用RNA干扰技术构建人DEPTOR基因的shRNA慢病毒载体,鉴定在多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞上的沉默效果,并评价DEPTOR对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡能力的影响。方法:设计4个DEPTOR siRNA序列,化学合成后退火形成双链,克隆到酶切的hU6-MCS-CMV-EGFP(GV115)-shRNA慢病毒载体。重组质粒经PCR测序鉴定后,脂质体介导下转染293T细胞,Western blot检测DEPTOR的表达,筛选出干扰效果最佳的GV115-shRNA。将筛选的GV115-shRNA与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成病毒,收集病毒上清并浓缩,测定浓度。将病毒颗粒感染多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞,应用Real-time PCR方法从mRNA水平及Western blot方法从蛋白水平检测DEPTOR的沉默效果。运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测骨髓瘤细胞增殖能力的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡;用Western blot分析cleaved caspase-3和cleaved PARP的变化。结果:构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,成功筛选出最有效抑制DEPTOR表达的shRNA2序列,包装病毒后滴度达到1×109TU/ml。慢病毒感染RPMI-8226细胞后可表达EGFP,Real-time PCR和Western blot检测DEPTOR的表达明显下降。下调DEPTOR基因可显著减慢骨髓瘤细胞的生长速度(P<0.05),肿瘤细胞的凋亡率上升(P<0.01)。DEPTOR shRNA上调cleaved caspase-3、cleaved PARP和Bax表达,下调Bcl-2及PI3K/Akt信号通路的表达(P<0.01)。结论:成功构建了DEPTOR shRNA重组慢病毒载体,其转染多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞后显著抑制了DEPTOR的表达。DEPTOR shRNA可以有效地诱导骨髓瘤细胞的凋亡,并抑制肿瘤细胞的增殖。PI3K/Akt信号通路可能参与了其凋亡过程。     

Pokemon对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响

目的建立稳定表达pokemon乳腺癌细胞系,并观察pokemon对乳腺癌细胞系MCF-7侵袭转移能力的影响。方法构建表达pokemon慢病毒载体,将Pokemon表达慢病毒载体转染MCF-7细胞,通过Western blot方法检测稳定性表达pokemon MCF-7细胞中Pokemon-GFP融合蛋白的表达情况,应用Transwell试验及划痕实验观察pokemon的高表达对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响。结果成功建立稳定表达pokemon的MCF-7细胞系,pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力。结论 Pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力。     

微小RNA-21在乳腺癌细胞中的作用

目的:探讨微小RNA(miR)-21在乳腺癌细胞(MCF7)中的作用。方法:对MCF7细胞转染miR-21,采用免疫组织化学法检测转染后程序性细胞凋亡4(PDCD4)表达;用噻唑蓝(MTT)比色法测转染miR-21后MCF7细胞增殖;流式细胞术检测转染后MCF7细胞凋亡。结果:经免疫组织化学检测,转染组未见染色,对照组细胞胞质呈棕褐色,转染组PDCD4的表达明显低于对照组,MTT法检测转染组细胞活力增加(P<0.05)。转染组的凋亡率为(3.14±0.24)%,明显低于空白组、空质粒组的(8.04±0.02)%、(9.41±0.53)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PDCD4是miR-21的靶基因之一,miR-21的高表达可促进乳腺癌的发展。     

沉默VEGF基因对腺样囊性癌细胞侵袭的影响

目的:利用RNAi技术沉默腺样囊性癌细胞株ACC-2中VEGF的表达,探讨其对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法:利用RNAi技术沉默VEGF表达,用Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力的变化。结果:与对照组比较,VEGF的siRNA能有效地抑制实验组ACC-2细胞的侵袭能力。结论:沉默VEGF减弱腺样囊性癌的侵袭能力。     

Kiss-1高表达抑制结肠癌侵袭与转移能力的影响

目的探讨Kiss-1高表达对结肠癌SW480细胞侵袭与转移能力的影响,初步明确Kiss-1基因对基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和MMP-2表达的影响。方法用脂质体转染方法将质粒p EGFP-N1-Kiss-1及p EGFP-N1空载体质粒瞬时导入结肠癌SW480细胞,细胞随机分三组:空白对照组、阴性对照组、实验组。应用Transwell实验检测结肠癌细胞的侵袭能力、Western-blot和Real-time PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Kiss-1表达对MMP-9、MMP-2表达的影响。结果成功将p EGFP-N1-Kiss-1重组质粒瞬时导入结肠癌SW480细胞。Transwell实验检测出实验组较阴性对照组和空白对照组能明显降低SW480细胞侵袭能力的作用(P<0.05)。Western blot和Real-time PCR检测出实验组Kiss-1蛋白和mRNA表达水平较阴性对照组或空白对照组显著增加,而实验组MMP-9、MMP-2蛋白和mRNA表达水平显著降低,其差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 Kiss-1抑制MMP-9和MMP-2的表达,其调控机制可能与抑制结肠癌的侵袭和转移能力有关。     

活化蛋白1在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用

目的观察活化蛋白1(AP-1)在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组,实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组(高糖组)、P38MAPK-shRNA慢病毒转染组、P38MAPK信号转导阻断剂组、无关shRNA转染组、AP-1抑制剂SP600125组。采用TUNEL和流式细胞术检测细胞凋亡,用EMSA检测MC3T3-E1细胞AP-1的活性。结果与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1成骨细胞P38MAPK表达、AP-1活性、细胞凋亡显著增加。P38MAPK-shRNA慢病毒转染组和P38MAPK信号转导阻断剂组MC3T3-E1细胞AP-1活性较高糖组分别下降57.9%(P<0.01)和45.6%(P<0.05)。AP-1抑制剂组MC3T3-E1细胞凋亡率较高糖组下降39.7%(P<0.01)。结论高糖通过激活P38MAPK增加AP-1活性,诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡,抑制AP-1活性后高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡显著下降。     

Kiss-1与结肠癌SW480细胞增殖的关系

目的以结肠癌细胞SW480为模型,初步探讨Kiss-1基因过表达与结肠癌细胞增殖的关系。方法采用脂质体转染的方法将Kiss-1/pEGFP-N1重组质粒转染至SW480细胞,上调结肠癌细胞中Kiss-1的表达水平,经G418筛选出稳定表达株;根据细胞分为3组:阴性对照组(转染pEGFP-N1空载体)、实验组(转染pEGFPN1-Kiss1)及空白对照组(未转染)。Western blot检测转染后细胞中Kiss-1表达量的变化;采用CCK8试验分析Kiss-1对SW480细胞增殖的抑制效果。结果成功将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞,western blot检测出阴性对照组和空白对照组中显示Kiss-1低表达,实验组Kiss-1表达量增加,CCK8试验表明实验组细胞增殖率明显低于对照组(P<0.05)。结论 Kiss-1可抑制结肠癌细胞的增殖率。     

沉默乙酰肝素酶对人胃癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰沉默乙酰肝素酶(heparanase, HPA)基因表达对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响.方法:根据人HPA基因序列转录RNA的位置及小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)设计原则,设计了4个靶位点,并构建了4个分别针对靶位点的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达载体,同时合成了阴性和阳性对照质粒表达载体.采用阳离子脂质体法将以上质粒转染入人胃癌SGC-7901细胞,分别采用RT-PCR和Western印迹法检测转染前后HPA mRNA和蛋白表达的变化,选出对HPA沉默效果最佳的质粒,再应用Transwell小室基质侵袭实验和划痕损伤实验分别研究HPA表达沉默后对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移能力的影响.结果:质粒载体pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085沉默人胃癌SGC-7901细胞HPA mRNA和蛋白表达的效果最好.pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组中穿透Transwell小室基质的SGC-7901细胞数(289.90±18.11)明显高于对照组(44.00±15.22) (P<0.05),SGC-7901细胞的迁移距离在48、72和96 h内 pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组明显低于对照组(P<0.05). 结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌SGC-7901细胞中HPA mRNA和蛋白表达,从而抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力.HPA可能是治疗胃癌侵袭和转移的一个新靶点.     

靶向沉默RACK1基因对肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:研究沉默RACK1基因对人肺腺癌细胞株A549裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:使用人肺腺癌细胞株A549建立裸鼠皮下移植瘤模型。待肿瘤直径为0.3~0.5 cm时将荷瘤裸鼠随机分成3组,每组6只,分别于瘤内注射生理盐水(空白组)、空载质粒-脂质体复合物(空载组)及shRNARACK1质粒-脂质体复合物(实验组)。观察三组裸鼠的皮下移植瘤体积变化,绘制肿瘤生长曲线,并用Western blot检测各组肿瘤组织中RACK1蛋白的表达。结果:移植瘤形成后第28天,与空白组和空载组比较,实验组移植瘤生长速率、肿瘤体积和重量均明显降低(P<0.05)。转染干扰载体RACK1-shRNA对裸鼠肺腺癌移植瘤的的抑瘤率为39%。Western blot结果显示,实验组移植瘤组织中RACK1蛋白的表达明显低于空白组和空载组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:沉默RACK1基因对肺腺癌裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用。     

钢铁企业PM_(2.5)污染情况分析及防控措施研究

介绍了PM2.5概念、组成、来源及危害,从太原市的地形、地貌、气象特征对PM2.5的影响方面进行了论述,对钢铁企业排放PM2.5的主要工序进行了分析,并针对太钢当前PM2.5的防控措施提出了一些建议。     

中国土建类专业评估认证与注册师制度回顾与思考

专业评估认证已成为教育界和关心教育人士议论的热门话题之一。土建类专业评估认证是中国开展得最早的专业评估认证,有近20年的专业评估认证的经验。文章分析了中国土建类专业评估认证的基本情况、中国建设行业注册师制度情况、对专业评估认证及注册师制度的思考,以及完善建设行业注册师制度的建议。     

特雷克斯(Terex)主要并购整合历程与成就研究

特雷克斯是一家经营方式独特的跨国公司,1986年创建于美国特拉华州.凭借其独特的收购兼并经营方式,在工程机械领域迅速扩张,不断将世界各地有名的单一工程机械品种生产商整合在自己的品牌下.     

基于城乡一体的规划和管理的转型及重构——南京浦口地区规划实践和探索

2008年1月1日开始实施的《中华人民共和国城乡规划法》,建立了由城镇体系规划、城市规划、镇规划、乡规划和村庄规划构成的我国法定城乡规划体系,标志着我国城乡规划在法律制度上迈上了一个新台阶.新的城乡规划法,打破了长期存在的城乡二元分治情况,加强城乡统一规划管理,促进了城乡经济社会全面协调可持续发展.但同时它仅仅只是解决了城市和村镇的统一规划问题,对于存在于乡村地区的大量的自然,历史等资源的规划和保护,利用的问题,并没有纳入统一规划和管理,本文通过结合南京浦口的规划实践工作,提出基于城乡一体的规划编制设想,目的旨在探索地方层面的规划编制如何能进一步结合地区管理需要,实现规划与管理的无缝对接,充实和完善城乡规划体系.     

浅析城市市政给排水规划设计的研究与分析

在现实生活中,因为各种原因的限制以及约束,导致城市给排水规划设计存在一些没解决的问题,需要得到进一步的改善。本文首先介绍了城市市政给排水设计的一些背景,然后阐述了设计中应考虑的几点问题,希望能为同行提供一些帮助。     

无阀滤池在丁腈橡胶污水处理中的应用

采用GIS技术、GPRS技术及物联网传感等技术实现对城区"雨情"实时发布、"涝情"及时预警、"排涝"资源科学调度.并结合WebGIS地理技术设计和大型应用数据库系统,在此基础之上,对各种信息资源进行全面的整合和重组.本系统在东营市上线运行以来,对大、暴雨监测,多次利用排水模型进行预警,针对实时降雨强度进行报警,通过短信、LED显示大屏等多种渠道对广大市民进行提醒,对人民大众出行和生产带来了很大的方便和指导意义.     

BIM在机电安装施工管理中的应用和探索

BIM技术可以实现各专业的协同设计,可在机电安装项目中,模拟所有管线的综合排布位置和工序,并进行施工模拟,为工程实际安装阶段的工作提供更有价值的信息。该文从机电安装的角度,结合实际案例,在机电综合排布、碰撞检查等方面的应用进行了阐述,验证BIM技术在机电安装施工管理中的作用,并对BIM技术对安装工业化进程的推动作用进行了探讨。     

小城镇发展与水土流失治理

建设与发展小城镇,其目的在于集中人口、控制人口、改善环境、发展经济、增强国力。实现人口控制、资源开发、环境保护协调发展。中国要发展,环境要改善,国民素质要提高,农村人口(特别是山区人口)必须聚集。小城镇的建设与发展是农业工业化、农村城市化的必然趋势,结合国家大力发展小城镇的契机,利用小城镇的建设聚集农村和山区人口,做好区域内水土流失治理具有现实意义和长远意义。     

我国历史文化名城名镇名村保护的回顾和展望

回顾1982年以来30年我国历史文化名城名镇名村保护发展历程,初步分为历史文化名域保护兴起、历史文化街区深入保护、历史文化名城名镇名村全面保护3个阶段.从历史文化名域名镇名村评选评价、保护体系、保护规划等方面探讨了一些概念和方法问题,并对我国今后的历史文化名域名镇名村保护提出了工作和研究建议.     

榫卯的繁简和大小

在古时候,支撑起一栋楼房的是木材,而木材与木材相连接固定的方法,就是榫卯.古时候的木匠,技艺精湛,手艺超群,在没有任何图纸的情况下,可以把楼房建造起来而不倒塌.一根根木材靠着木匠做出的榫卯搭接在一起,最后形成了亭台楼阁.榫卯作为木材和木材之间的连接点、固定点,不仅扮演着结构的角色,也扮演着美观的角色.其质量好坏直接关系到建筑的优劣,榫卯是建筑的重要组成部分,其审美功能不容忽视,它不但能体现建筑的个性和特色,还能增添建筑的美观.文章主要通过研究中国古建筑各个地方的榫卯,结合观察法、现场调研法、文献阅读法、经验总结法,分析探讨榫卯的繁简、大小与构件的承重有何种关系,得出结论并运用于毕业设计当中.