农产品中大肠杆菌O157∶H7的来源及分布研究进展

近年来,由大肠杆菌O157∶H7污染农产品而引起的食源性疾病频繁发生。农产品可能会在生长过程中感染大肠杆菌O157∶H7,了解农产品中大肠杆菌O157∶H7的来源及其分布,可以为预防农产品污染提供建议。本文就农产品中大肠杆菌O157∶H7可能的来源和其在农产品中的大致分布情况进行了综述。     

复合乳酸菌对肠出血性大肠杆菌O157∶H7抑制作用的研究

本研究利用实验室保存的7株常见乳酸菌进行抑制大肠杆菌O157∶H7实验,其中4株乳酸菌对大肠杆菌O157∶H7有明显抑制效果,分别为嗜酸乳杆菌(SL1)、鼠李糖乳杆菌(SL2)、干酪乳杆菌(SL3)、植物乳杆菌(SL4)。将4株乳酸菌混合后不但抑菌效果强于4株任意单独菌株,其发酵滤液pH相比4株单独菌株下降速度最快,且pH最低。说明混合后的乳酸菌产酸能力也明显增强。将SL1、SL2、SL3、SL4通过排列组合(C(n,m))可分成11组混合菌液,然后通过牛津杯抑菌方法进行抑菌实验,结果显示乳酸菌组合(SL2、SL3、SL4)具有最佳抑菌效果。再将SL2、SL3、SL4按正交设计方案以不同比例的接种量混合成复合菌剂进行抑菌实验,结果表明:乳酸菌组合(SL2、SL3、SL4)以3∶1∶3比例制备复合菌剂时,对大肠杆菌O157∶H7的抑制效果最好。      

食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的检测技术研究进展

近年来,因食源性致病菌造成的食品中毒正在不断增加,严重威胁了人类的健康,大肠杆菌（E.coli） O157∶H7由于其低感染剂量和高致病性等特点引起了研究人员和世界卫生组织的高度重视。因此精准快速的检测食品中的E.coli O157∶H7对食品安全问题有着重要的意义,是预防和控制食源性疾病传播的重要技术,为此本文对E.coli O157∶H7的常规检测方法、免疫学法、分子生物学法和其他方法进行论述,介绍了这些方法的优缺点,对各种方法进行了整体比较,以期为有关工作者在选择检测方法或研发新方法提供参考。     

甘草提取液对大肠杆菌O157∶H7抑菌作用及豆腐干的保鲜研究

研究了甘草提取液对豆腐干中大肠杆菌(E.coli)O157∶H7的抑菌作用以及对豆腐干在10℃下的贮藏保鲜作用。根据响应面法优化的最佳工艺条件得到甘草提取液,用于大肠杆菌O157∶H7的抑菌研究,通过理化指标和感官评价研究对豆腐干的保鲜作用。结果表明提取的最佳条件为提取温度77.80℃,提取时间7.58 h,料液比1∶9.61(g/mL),5%甘草提取液使大肠杆菌O157∶H7在豆腐干中的停滞期达5.8 d,同时能延缓豆腐干的pH值和可滴定酸度、失水率、感官品质等变化。甘草提取液对大肠杆菌O157∶H7有较好的抑制作用,对豆腐干有一定的保鲜作用。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7的检测方法进展

肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7为新近报道的食源性强致病菌,对病原菌快速、简便、准确、灵敏的检测方法是预防控制的关键,本文对国内外常用的鉴别培养、免疫检测以及PCR等检测方法进行了系统的综述。     

出血性大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体制备及免疫胶体金试纸条的研制

将骨髓瘤细胞SP2/0与出血性大肠杆菌O157∶H7免疫小鼠得到的脾细胞融合,通过筛选得到3株稳定分泌抗出血性大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体的杂交瘤细胞株D3、E7、B9,D3和B9亚类为IgG1,E7亚类为IgG2a,轻链亚型均为κ。交叉反应结果显示这3株单抗仅结合出血性大肠杆菌O157∶H7,对15株其他细菌无反应,测得胶体金标记单抗最佳pH、最佳结合量分别为D3:pH 7.5⁸.0、24μg/mL;B9:pH 7.5、12μg/mL;E7∶pH7.5、18μg/mL,抗体配对选择胶体金结合D3喷涂金标垫、E7以1 mg/mL喷涂NC膜作T线为最优组合,试纸条检测出血性大肠杆菌O157∶H7灵敏度为2.1×106CFU/mL,且仅可检出出血性大肠杆菌O157∶H7,对25株其他细菌均无交叉反应,模拟带菌实验表明,对市售面包、牛奶、果冻各25 g(mL)均添加约200 CFU出血性大肠杆菌O157∶H7,增菌培养8、10、10 h即可检出。研究表明,实验自主制备的抗体性能良好,试纸条特异性、灵敏度达到国外同类产品,可在政府食源性致病菌监管部门、食品企业推广运用。     

应用DPO-PCR技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

利用双启动寡核苷酸引物（dual-priming oligonucleotide,DPO）聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7。根据DPO引物设计原则,以肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE 基因为靶基因设计一对DPO引物,经过反应体系的优化,建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7 DPO-PCR检测方法, 其检测灵敏度约为94 CFU/mL。与常规PCR方法相比,所建立的DPO-PCR方法对退火温度不敏感,在引物设计和实 验过程中不需要对引物及其退火温度反复优化,同时基于DPO引物的特殊结构又增强了其特异性。DPO-PCR方法 设计简易、特异性强,为致病性微生物的快速准确检测提供了新途径。     

大肠杆菌O157∶H7胶体金试纸的制备与检测

目的:制作大肠杆菌O157:H7胶体金金标试纸,检测试纸的灵敏度和特异性效果。方法:利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157,并对该法进行敏感性、特异性效果进行评估。结果:该试纸可在15min内检测大肠杆菌O157,灵敏度最低检测浓度为1×106cfu/mL。对于不同的肠道菌群(沙门氏菌、单增李斯特菌、空肠弯曲杆菌、副溶血弧菌),未发现有交叉反应,特异性良好。结论:大肠杆菌O157:H7金标试纸检测速度快、灵敏度高,适用于快速检测。     

冷等离子体技术对黄瓜表面大肠杆菌O157∶H7生物膜的清除作用研究

利用冷源氮气等离子体杀菌技术清除新鲜黄瓜表面的大肠杆菌O157∶H7生物膜。试管实验结果表明,等离子体对大肠杆菌O157∶H7生物膜有较好的清除作用,在作用功率为500 W,连续作用4 min后对生物膜清除率达到99.99%。当等离子体应用于黄瓜表面时,作用4 min时,杀菌率达到99.21%。激光共聚焦显微镜结果显示:等离子体作用后,菌落数量和细菌生物膜厚度明显小于对照组。场发射扫描电子显微镜结果显示:与对照组比较,等离子组4 min处理后细菌群落附着数量显著变少。总之,等离子体技术在基本维持食品感官的前提下提高了新鲜黄瓜的微生物安全性。      

武汉肉类食品中大肠杆菌O157∶H7分离株stx亚型和毒力特征分析

从22 家市场销售的117 份肉类食品中分离出4 株大肠杆菌O157∶H7菌株,经PCR检测这4 株菌的stx、hly、 eae毒力基因均为阳性。采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）法对这4 株菌的stx亚型进行鉴定。 3 株菌同时携带stx1、stx2基因,且均为stx1a、stx2a亚型。菌株EC5.11仅携带stx2基因,但在所有的stx2分型PCR反 应中都为阴性。用PCR扩增该菌株stx2基因全长并克隆测序,序列分析结果表明EC5.11志贺毒素基因为stx2c亚型。 采用Vero细胞毒性实验检测这4 株菌产志贺毒素的状况,结果显示这些菌株都具有一定的Vero细胞毒性。     

Effect of Combined Ozone and Organic Acid Treatment for Control of Escherichia coli O157:H7 and Listeria monocytogenes on Lettuce

ABSTRACT: This study was conducted to determine the effects of ozonated water (1, 3, and 5 ppm) alone with different exposure times (0.5,1,3, or5min), and combinations of 3 ppm ozone with 1% organic acids (acetic, citric, or lactic acids) during 1-min exposure for inactivating Escherichia coli O157:H7 and Listeria monocytogenes on lettuce and to observe the regrowth of these pathogenic bacteria on treated lettuce during storage for 10 d at 15°C. Results showed that 5 ppm ozone treatment for 5 min gave 1.09-log and 0.94-log reductions of E. coli O157:H7 and L. monocytogenes , respectively, indicating insignificant reductions compared with 3 ppm ozone treatment for 5 min. Treatment with 3 ppm ozone combined with 1 % citric acid for 1 min immersing resulted in 2.31 - and 1.84-log reductions ( P < 0.05), respectively. During storage at 15°C for 10 d after combined treatment and packaging, populations of E. coli O157:H7 and L. monocytogenes increased to approximately 9.0-log colony forming unit (CFU) /g, indicating that this treatment did not have a residual antimicrobial effect during storage. Although the storage study did not show control of these pathogens, the combined ozone-organic acid treatment was more effective in reducing population levels of these pathogens on lettuce than individual treatments.     

Effectiveness of Active Packaging on Control of Escherichia Coli O157:H7 and Total Aerobic Bacteria on Iceberg Lettuce

Contaminated leafy green vegetables have been linked to several outbreaks of human gastrointestinal infections. Antimicrobial interventions that are adoptable by the fresh produce industry for control of pathogen contamination are in great demand. This study was undertaken to evaluate the efficacy of sustained active packaging on control of Escherichia coli O157:H7 and total aerobic bacteria on lettuce. Commercial Iceberg lettuce was inoculated with a 3‐strain mixture of E. coli O157:H7 at 10² or 10⁴ CFU/g. The contaminated lettuce and un‐inoculated controls were placed respectively in 5 different active packaging structures. Traditional, nonactive packaging structure was included as controls. Packaged lettuce was stored at 4, 10, or 22 °C for 3 wk and sampled weekly for the population of E. coli O157:H7 and total aerobic bacteria. Results showed that packaging structures with ClO₂ generator, CO₂ generator, or one of the O₂ scavengers effectively controlled the growth of E. coli O157:H7 and total aerobic bacteria under all storage conditions. Packaging structure with the ClO₂ generator was most effective and no E. coli O157:H7 was detected in samples packaged in this structure except for those that were inoculated with 4 log CFU/g of E. coli O157:H7 and stored at 22 °C. Packaging structures with an oxygen scavenger and the allyl isothiocyanate generator were mostly ineffective in control of the growth of the bacteria on Iceberg lettuce. The research suggests that some of the packaging structures evaluated in the study can be used to control the presence of foodborne pathogens on leafy green vegetables.     

酸应激对大肠杆菌O157:H7生物菌膜形成的影响

本实验探究较长时间酸应激对大肠杆菌O157:H7生物菌膜形成的影响。首先采用微孔板联合结晶紫染色法比较大肠杆菌O157:H7不同菌株黏附性能差异,分析不同黏附力菌株菌膜形成曲线,进而选择代表菌株采用平板计数法分析在较长时间酸应激时其菌膜的形成规律,最后采用共聚焦激光扫描显微镜（confocal laser scanning microscope,CLSM）比较黏附力不同的菌株在酸性环境下菌膜形态结构变化。结果表明,14 株菌株黏附能力有差异;不同黏附力菌株均在2 h开始产生黏附现象,但菌膜形成曲线有明显差异。以中等黏附力菌株ATCC43895作为代表菌株进行酸应激实验,结果表明pH值越低菌膜形成量越少,pH值相同时乳酸对浮游菌数和菌膜形成的抑制效应显著高于盐酸（P＜0.05）。CLSM观察结果表明,成膜能力较强的菌株J29和较弱的菌株CICC21530在中性和酸性培养液中均能形成一定结构的生物菌膜,但前者的菌膜形成量多于后者,酸性条件对成膜过程有抑制作用。提示乳酸能有效抑制大肠杆菌O157:H7菌膜形成过程,可为食品实际加工中该菌菌膜的消除技术提供科学思路。     

Escherichia coli O157:H7 facilitates the penetration of Staphylococcus aureus into table eggs

Abstract: Fresh eggshells collected from a local farm were subjected to different levels of surface contamination with feces containing different levels (3 to 5 log₁₀) of Escherichia coli O157:H7 or Staphylococcus aureus and incubated at 3 different temperatures (10, 25, and 32 °C). The penetration rates of contaminating bacteria were followed throughout the incubation period by tracing bacterial presence in shell, shell membranes, albumen, and yolk. The study revealed the ability of both E. coli O157:H7 and enterotoxigenic S. aureus to grow on shell in feces, penetrate the shell, and move and multiply within egg contents at different rates and periods depending on bacterial type and incubation conditions. High temperatures (25 and 32 °C) increased penetration rate, whereas storage at 10 °C decreased significantly the rate of penetration. High levels of contamination with E. coli O157:H7 also shortened the time needed for the penetration process. Results showed that when eggshells were contaminated with both organisms simultaneously, the penetration of E. coli O157:H7 preceded that of S. aureus and facilitated the invasion of the latter bacteria.     

大肠杆菌O157:H7快速培养的初步研究

本研究将Oxyrase酶加入到接种了大肠杆菌O157:H7的培养基中以促进这种兼性厌氧微生物的生长。与不加Oxyrase酶的对照组相比,添加了Oxyrase酶的培养基中的大肠杆菌O157:H7的浓度明显提高。实验结果表明,Oxyrase酶在大肠杆菌O157:H7 快速培养中具有潜在的利用价值。     

抗大肠杆菌O157:H7的卵黄特异性IgY的研究

以大肠杆菌O157:H7为抗原免疫产蛋母鸡,从鸡卵黄中提取免疫球蛋白,建立抗大肠杆菌O157:H7的特异性IgY的效价检测方法,并研究母鸡的免疫应答性,以及抗体的提取方法和体外抑菌效果.研究结果表明,初次免疫后第6d,在卵黄中可以检测到抗大肠杆菌O157:H7 IgY,效价为1:7200;经加强免疫后效价迅速上升,至第44d达到最高效价1:230400;免疫后360 d,效价仍维持在1:7200.用水稀释法、硫酸铵分级盐析和Sephadex G-25凝胶过滤以提取IgY,提纯后IgY的效价是之前的4倍.SDS-PAGE鉴定抗体的纯度,电泳图谱中出现抗体的轻链和重链两条带.体外抑菌实验表明,IgY能抑制大肠杆菌O157:H7的生长.     

食源性致病菌大肠杆菌O157:H7检测方法的研究进展

食源性致病菌是引起食物中毒的重要病原微生物,严重威胁人类健康,对食源性致病菌进行快速、准确的鉴定检测,是预防和控制致病菌的有效方法,而大肠杆菌O157:H7因其感染剂量低,致病性强,引起公众的广泛关注。本文综述了目前用于检测食源性致病菌大肠杆菌O157:H7的主要方法,包括细菌分离法,免疫学检测方法,分子生物学检测方法,并简单介绍了这些方法的优缺点,以期为检测大肠杆菌O157:H7时提供参考。     

生物传感器检测食源性大肠杆菌O157:H7研究新进展

近年来, 生物传感器因具有快速、简便、灵敏度高、低成本等优势被广泛应用到临床检测、环境监测等领域。该技术在食品安全领域也逐步得到重视, 尤其在病原微生物的快速检测方面。本文从免疫识别和核酸识别两方面简要介绍生物传感器技术检测食源性大肠杆菌O157:H7研究的最新进展, 对生物传感器技术存在的问题及未来的研究方向进行了总结及展望。     

大肠杆菌O157:H7胶体金试纸条的研制

采用胶体金标记抗大肠杆菌O157:H7 单克隆抗体(鼠源),通过将大肠杆菌O157:H7 多克隆抗体和驴抗鼠抗体(二抗)喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,研制大肠杆菌O157:H7 胶体金快速检测试纸条。通过优化实验,确定最佳条件为标记量16.8μg/mL、标记pH8.0、封闭剂PEG20000、检测时样品最佳pH7.0～7.5。对26 株常见细菌交叉反应结果表明,该试纸条除与鼠伤寒沙门氏菌ATCC 13311 和金黄色葡萄球菌CMCC 26003 有轻微交叉反应外,与其他24 株菌均无交叉反应。该试纸条灵敏度为104CFU/mL。用该试纸条检测大肠杆菌O157:H7操作简便、快捷、灵敏度高、特异性强。     

大肠杆菌O157:H7量子点免疫层析试纸条的研制

研制一种大肠杆菌O157:H7量子点免疫层析试纸。利用自制水溶性量子点静电偶联大肠杆菌O157:H7单克隆抗体,将大肠杆菌O157:H7单克隆抗体和羊抗兔二抗划线于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,制备双抗体夹心法检测大肠杆菌O157:H7的量子点免疫层析试纸。该试纸条能在5min内完成检测,检测限制为1×104 CFU/mL,对常见的8种食源菌无交叉反应。基于量子点的大肠杆菌O157:H7免疫层析试纸操作简便,灵敏度和特异性较好,可用于食品快速检测。