蛇床子素对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗作用的影响及作用机制

目的探讨蛇床子素(osthole)对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗作用的影响及其可能的机制。方法将鼻咽癌CNE2细胞株经NU/NU裸鼠右腋皮下接种,2×10~8个/只,待移植瘤长至150mm~3时,随机分为对照组(隔1 d经腹腔注射无菌生理盐水,0.2 m L/只)、单纯蛇床子素组[隔1 d经腹腔注射,1.5μg/(g·10μL)]、单纯放疗组(5 Gy/次,隔3 d X射线照射1次)、蛇床子素联合放疗组(经腹腔注射蛇床子素2 h后进行放射治疗,剂量与方法同单纯蛇床子素组及单纯放射组)。每3 d测量移植瘤体积,首次给药后第21天取出移植瘤,称瘤重;流式细胞术检测移植瘤细胞凋亡率;荧光定量PCR及Western blot法分别检测移植瘤细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及乏氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因m RNA转录和蛋白表达水平。结果与对照组比较,单纯蛇床子素组、单纯放疗组及蛇床子素联合放射组裸鼠移植瘤体积及瘤重均明显下降(P0.05),细胞凋亡率明显升高(P0.05),其中蛇床子素联合放射组最显著,且该组裸鼠移植瘤中VEGF及HIF-1α基因m RNA转录及蛋白表达水平明显低于单纯蛇床子素组及单纯放疗组(P0.05)。结论蛇床子素可增强鼻咽癌裸鼠移植瘤对放疗的敏感性,其机制可能与下调VEGF及HIF-1α表达,抑制血管生成有关。     

恩度对横纹肌肉瘤PLA-802细胞生长的抑制作用及其机制

目的探讨人血管内皮抑制素恩度(Endostar)对横纹肌肉瘤PLA-802细胞生长的抑制作用及其机制。方法将常规培养的横纹肌肉瘤细胞PLA-802分为对照组和恩度处理组(不同浓度处理不同时间),采用MTT法检测恩度对细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞周期的变化;RT-PCR和Western blot法检测恩度对细胞内血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA和蛋白表达的影响;ELISA检测细胞培养液上清中VEGF的生成水平。结果恩度可抑制PLA-802细胞增殖及VEGF的表达和生成,且上述作用具有显著的浓度-时间依赖性。结论恩度能够抑制PLA-802细胞的生长,其机制可能与阻断VEGF的表达相关。     

纳米氧化铈对人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的探讨纳米氧化铈(nm-Ce O2)对人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法建立人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为阴性对照组(等体积双蒸水)、阳性药组[九州虫草2 000 mg/(kg·次)]、nm-Ce O2高、中、低剂量组[300、100、33.33 mg/(kg·次)],共5组,各组荷瘤裸鼠均经口灌胃给药,每天1次,共17 d,观察各组裸鼠移植瘤生长情况,计算肿瘤体积(VT)、肿瘤生长抑制率,称量肿瘤重量,观察移植瘤组织病理变化,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(terminal dexynucleotidyl transferase mediated d UTP nick end la beling,TUNEL)法检测移植瘤细胞凋亡率。结果与阴性对照组比较,nm-Ce O2各剂量组均具有抑制人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠皮下移植瘤生长的作用,并能促进瘤细胞的变性、坏死和凋亡(P<0.05)。nm-Ce O2高剂量组的肿瘤生长抑制作用低于阳性药组(P<0.05),但nm-Ce O2高、中剂量组促进肿瘤细胞凋亡的作用高于阳性药组(P<0.05)。结论 nm-Ce O2对人乳腺癌Bcap-37细胞裸鼠皮下移植瘤具有显著的生长抑制作用。     

人参多糖对鼻咽癌细胞CNE-2裸鼠移植瘤的放疗增敏作用及其可能的机制

目的探讨人参多糖(ginseng polysaccharide,GPS)对人鼻咽癌细胞CNE-2裸鼠移植瘤的放疗增敏作用及可能的机制。方法取对数生长期的鼻咽癌CNE-2细胞,经裸鼠背部皮下注射,1×107个/(0.2 ml·只),待瘤体最大径为4~6 mm时,取20只模型裸鼠,随机分为4组:对照组(经腹腔注射生理盐水)、放疗组(每次每只裸鼠经肿瘤局部给予5 Gy X射线照射,每3 d照射1次,共3次)、GPS组(经腹腔注射GPS,30 mg/kg,每次0.3 ml,每72 h给药1次,共5次)和GPS联合放疗组(经腹腔注射GPS,30 mg/kg,每次0.3 ml,每72 h给药1次,共5次;末次给药48 h后开始放疗,每只每次经肿瘤局部给予5 Gy X射线照射,每3 d照射1次,共3次)。开始给药3周后处死裸鼠,取瘤体,称重,测量肿瘤的长、短径,计算肿瘤体积及抑制率;HE染色观察移植瘤组织病理学改变;Real-time PCR检测移植瘤组织中β-catenin基因mRNA的转录水平;免疫组织化学和Western blot法检测移植瘤组织中β-catenin蛋白的表达水平。结果与对照组相比,GPS组、放疗组和GPS联合放疗组的肿瘤体积及瘤重均明显下降(P0.05),抑制率分别为29.87%、52.60%和74.68%;镜下观察可见,GPS联合放疗组细胞凋亡明显,多数细胞核完全溶解,细胞结构消失,坏死的肿瘤组织呈现均质红染表现;GPS联合放疗组移植瘤中β-catenin mRNA及蛋白的表达水平均显著下降(P均0.05)。结论 GPS可抑制CNE-2细胞在裸鼠体内的生长,且对鼻咽癌的放疗具有增敏作用,其机制可能与抑制β-catenin的表达有关。     

慢病毒介导的人乳头瘤病毒16型E6基因shRNA对荷瘤裸鼠宫颈癌生长的抑制作用

目的探讨慢病毒介导的人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)16型E6基因shRNA在体内对荷瘤裸鼠宫颈癌生长的抑制作用。方法将BALB/c-nu裸鼠随机分为空白对照组、干扰组和无义干扰组,经皮下接种宫颈癌Caski细胞(2×106个),移植瘤直径达0.5 cm时,空白对照组于瘤体局部注射PBS,干扰组和无义干扰组分别于瘤体局部注射靶向HPV16型E6基因的shRNA-PLL3.7干扰慢病毒和无义干扰慢病毒(3×108TU/ml),2周后检测瘤体大小和重量的变化,采用免疫组化法检测肿瘤组织中HPV16型E6、P53和P21蛋白的表达。结果与无义干扰组和空白对照组比较,干扰组裸鼠体内肿瘤明显缩小,瘤体重量明显降低(P<0.000 1),无义干扰组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);干扰组肿瘤组织中HPV16型E6蛋白的表达被抑制,P53和P21蛋白的表达水平明显升高。结论慢病毒介导的HPV16型E6基因shRNA能有效抑制动物体内宫颈癌的生长,具有潜在的开发应用前景。     

白藜芦醇对人腺泡横纹肌肉瘤细胞株PLA-802增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人腺泡横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RMS)细胞株PLA-802增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养PLA-802细胞,用不同浓度的Res(25、50、100、200μmol/L)作用不同时间(24、48、72 h)。MTT法检测Res对PLA-802细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测Res对PLA-802细胞周期和凋亡的影响;采用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3酶的活性;Western blot法检测PLA-802细胞中与凋亡密切相关的Bax、Bcl-2、Survivin和Caspase-3酶蛋白的表达水平。结果 Res可明显抑制PLA-802细胞的增殖(P0.05)及提高Caspase-3酶活性(P0.001),且呈剂量-时间依赖性;同时可明显提高处于G0/G1及G2/M期的细胞比例(P0.01),减少S期细胞比例(P0.001),促进PLA-802细胞的凋亡,且可显著增加促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平(P0.05),降低抗凋亡蛋白Bcl-2和Survivin的表达水平(P0.05)。结论 Res可通过上调Bax、Caspase-3及下调Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平及激活Caspase-3酶活性,诱导PLA-802细胞的凋亡并抑制其增殖,为治疗RMS提供了实验依据。     

环磷酰胺暴露后Piwil2在人神经母细胞瘤移植瘤中的表达

目的探讨环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)暴露后Piwil2在人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)移植瘤中的表达。方法建立免疫活性C57BL/6j系小鼠的人NB SK-N-SH细胞株荷瘤模型,选择瘤体积在100~200 mm3之间的20只荷瘤小鼠,随机分为生理盐水对照组(NS组)和环磷酰胺组(CP组),每组10只,CP组每日经腹腔注射CP75 mg/kg,2次/周,连续2周;NS组每日经腹腔注射NS 2 ml。每2天测量肿瘤体积,计算相对肿瘤体积(RTV);停药后次日处死小鼠,称瘤重,计算抑瘤率(IR);并采用RT-PCR法检测各组移植瘤组织中Piwil2基因m RNA的转录水平,免疫组化法和Western blot法检测各组移植瘤组织中Piwil2蛋白的分布及表达水平。结果与NS组比较,CP组移植瘤的RTV和瘤重均显著降低(P0.05),CP组的平均抑瘤率为83.56%。两组移植瘤组织中Piwil2基因m RNA的转录水平差异无统计学意义(P0.05)。NS组移植瘤组织中Piwil2蛋白高表达于胞浆,而CP组大部分肿瘤细胞坏死,Piwil2蛋白表达下降,细胞核稀疏,核浓缩,细胞体积变小;CP组移植瘤组织中Piwil2蛋白的表达水平明显低于NS组(P0.05)。结论 CP干预后,移植瘤缩小,移植瘤组织中Piwil2基因m RNA的转录水平不变,但蛋白表达水平有改变,可能影响人NB抵抗性。     

骨形态发生蛋白9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞溶骨性骨转移的抑制作用

目的探讨骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞溶骨性骨转移的抑制作用及其可能的机制。方法将人乳腺癌MDA-MB-231细胞分为试验组(感染BMP9腺病毒)、空白对照组(未感染)及GFP对照组(感染GFP腺病毒),RT-PCR法检测各组细胞中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)基因mRNA的转录水平,Western blot法分别检测各组细胞中BMP9及OPG蛋白的表达水平。将BALB/c裸鼠分为空白对照组(注射空白对照细胞)、GFP对照组(注射GFP对照组细胞)及试验组(注射试验组细胞),每组5只,均经胫骨贴骨注射,1×106个/(0.3μl·只),X片成像技术分析各组裸鼠溶骨区域变化,免疫组化法检测各组裸鼠瘤体组织中OPG蛋白的表达。结果试验组MDA-MB-231细胞中OPG基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显高于空白对照组和GFP对照组(P0.05),仅试验组细胞中有BMP9的表达。试验组裸鼠胫骨瘤体直径及溶骨区域均明显小于GFP对照组和空白对照组(P0.05),试验组裸鼠瘤体组织中OPG的表达量明显高于GFP对照组(P0.05)。结论BMP9可抑制MDA-MB-231细胞溶骨性骨转移,可能是通过上调OPG/RANKL/RANK系统中OPG的表达而发挥作用。本实验为探讨BMP9在肿瘤骨转移微环境中的作用机制奠定了基础。     

MMP-2反义寡核苷酸对膀胱癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)反义寡核苷酸对人膀胱癌裸鼠异体移植瘤生长的抑制作用。方法制备膀胱癌裸鼠移植瘤模型18只,随机分为3组:MMP-2反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、MMP-2正义寡核苷酸(SODN)治疗组及对照组,每组6只。待瘤结节直径≥5mm后,分别在肿瘤细胞接种部位周围及中心皮下注射反义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物、正义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物和生理盐水。每周2次,连续4周,断颈处死裸鼠,计算肿瘤体积,称量瘤重。常规切片,HE染色,观察组织学形态并进行病理学评估。结果与对照组瘤重(7.49±0.53)g比较,ASODN组瘤重(4.18±0.53)g明显降低(P<0.01);ASODN组、正义寡核苷酸(SODN)组抑瘤率分别为44.19%、8.41%(P<0.01);ASODN组瘤体病理学特征改善。结论MMP-2反义寡核苷酸能抑制裸鼠体内移植瘤生长,通过反义寡核苷酸下调MMP-2的表达,有效逆转肿瘤的恶性表型,为膀胱癌的基因治疗提供了实验依据。     

旋毛虫对BALB/c小鼠体内人结肠癌HCT-8细胞的作用

目的观察旋毛虫感染对BALB/c小鼠体内人结肠癌HCT-8细胞生长的作用。方法用不同剂量的旋毛虫感染BALB/c小鼠,并在不同时间接种HCT-8细胞,荷瘤20 d后解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤的体积、重量,计算抑瘤率,并检测T淋巴细胞亚群。结果各实验组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于对照组,CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值、未长瘤小鼠比例、小鼠死亡率和抑瘤率均显著高于对照组;先接虫后荷瘤组抑瘤效果优于先荷瘤后接虫组。结论旋毛虫对BALB/c小鼠体内的人结肠癌HCT-8细胞的生长有一定的抑制作用。     

双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞生长及Survivin表达的影响

目的观察双氢青蒿素(DHA)对前列腺癌PC-3细胞生长及Survivin表达的影响,并探讨其作用机制。方法PC-3细胞经不同浓度的DHA处理后,MTT法检测细胞增殖抑制率;将PC-3细胞注入裸鼠右侧腋窝下,建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机分为空白对照组、DMSO对照组、DHA高剂量组(200μmol/kg体重)和低剂量组(100μmol/kg体重),经13d干预后,计算抑瘤率;光镜及电镜观察肿瘤组织形态学改变,免疫组织化学法检测Survivin的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果DHA可显著抑制PC-3细胞的增殖,并具有时间、浓度依赖性;DHA对裸鼠种植瘤生长具有明显的抑制作用,抑瘤率达60%以上;光镜及电镜观察到DHA两剂量组肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;DHA两剂量组细胞Survivin表达减弱,凋亡率明显升高。结论DHA可明显抑制PC-3细胞生长,其机制与下调Survivin的表达并诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

骨桥蛋白反义基因对乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长及肺转移的影响

目的探讨骨桥蛋白反义基因(ANOPN)对乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长及肺转移的影响。方法构建人骨桥蛋白反义基因真核表达质粒pcDNA3.1-ANOPN,将质粒pcDNA3.1-ANOPN、空载体pcDNA3.1(+)和等量的脂质体分别转染人乳腺癌细胞系MDA-MA-231,将转染细胞分别命名为MDA-ANOPN、MDA-vect和MDA,接种至裸鼠,观察肿瘤的生长、转移情况,并用免疫组化法检测肿瘤组织切片中OPN的表达。结果重组质粒pcDNA3.1-ANOPN经酶切、PCR及测序,证明构建正确。MDA-ANOPN组裸鼠出瘤时间、肿瘤体积及重量较MDA-vect和MDA组均显著降低,肿瘤肺转移灶数量减少,OPN表达较低。结论ANOPN可抑制裸鼠移植瘤的生长及肺转移。     

Myricanol Induces Apoptotic Cell Death and Anti-Tumor Activity in Non-Small Cell Lung Carcinoma in Vivo

This study explored the inhibiting effect and mechanism of myricanol on lung adenocarcinoma A549 xenografts in nude mice. Forty nude mice with subcutaneous A549 xenografts were randomly divided into five groups: high-dose myricanol (40 mg/kg body weight) group; middle-dose myricanol (20 mg/kg body weight) group; low-dose myricanol (10 mg/kg body weight) group; polyethylene glycol 400 vehicle group (1 mL/kg); and tumor model group. Nude mice were sacrificed after 14 days of treatment and the tumor inhibition rate (TIR, %) was then calculated. The relative mRNA expression levels of Bax, Bcl-2, VEGF, HIF-1α, and survivin in the tumor tissues were determined by real-time PCR. TUNEL assay was applied to determine cellular apoptosis, while IHC test was performed to detect the protein expression levels of Bax, Bcl-2, VEGF, HIF-1α, and survivin. The TIR of the three myricanol-treated groups ranged from 14.9% to 38.5%. The IHC results showed that the protein expression of Bcl-2, VEGF, HIF-1α, and survivin were consistently downregulated, whereas that of Bax was upregulated after myricanol treatment. Myricanol also significantly upregulated the mRNA expression of Bax and downregulated that of Bcl-2, VEGF, HIF-1α, and survivin in a dose-dependent manner (p < 0.05 to 0.001). These results are consistent with those of IHC. The TUNEL assay results indicated that apoptotic-positive cells significantly increased in the myricanol-treated tumor tissues compared with the cells of the vehicle control group (p < 0.01 to 0.001). These data suggest that myricanol could significantly decelerate tumor growth in vivo by inducing apoptosis.     

肝动脉栓塞化疗与恩度联合应用对兔VX2肝移植瘤血管生成的影响

目的探讨肝动脉栓塞化疗(Transcatheter arterial chemoembolization,TACE)与恩度联合应用对兔VX2肝移植瘤血管生成的影响。方法建立兔VX2肝移植瘤模型,并随机分为TACE组、抗血管生成组(TACE+动脉给予恩度)和生理盐水对照组。TACE术后14d,应用实时定量荧光PCR检测残癌组织血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA的转录水平,免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度(Microvessel density,MVD),并分析二者的相关性。结果TACE组VEGF mRNA的转录水平明显高于抗血管生成组和对照组(P均<0.05);抗血管生成组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。抗血管生成组MVD(33.17±6.69)明显低于TACE组(59.96±12.19)和对照组(58.88±7.82),且差异均有统计学意义(P均<0.05);TACE组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。各组肿瘤组织VEGF mRNA的转录水平与MVD的分布均呈正相关(r=0.40)。结论TACE与恩度联合应用与单纯应用TACE相比,可明显抑制肿瘤的血管生成。     

抑制乳腺癌耐药蛋白基因逆转肝癌多药耐药的体内实验

目的探讨小片段RNA干扰抑制乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因及其蛋白表达在裸鼠体内逆转人肝癌组织多药耐药(MDR)的可行性。方法建立裸鼠多药耐药肝细胞癌模型,随机分为A组和B组,A组(对照)注射生理盐水40μl+Lipo-fectamine200010μl,B组注射BCRP基因RNAi质粒pSUPER-BCRP40μl+Lipofectamine200010μl,两组均行瘤内注射1次。5d后,各组均经腹腔注射阿霉素5mg/kg化疗,每5d给药1次,共4次。彩色B超测量肿瘤体积;化疗结束后1周处死裸鼠,RT-PCR及Westernblot法检测各组裸鼠肿瘤组织中BCRP基因mRNA的转录水平及其蛋白的表达水平。结果B组每次化疗后肿瘤体积均明显缩小;除第1次化疗外,其余各次化疗后肿瘤体积均小于A组;化疗结束后,B组与A组相比,肿瘤组织中BCRP基因mRNA的转录水平和BCRP蛋白的表达水平均明显降低。结论BCRP基因RNAi质粒pSUPER-BCRP可有效降低裸鼠肝癌组织BCRP基因mRNA的转录水平及其蛋白的表达水平,在一定程度上逆转MDR,为从基因水平逆转MDR提供了初步的实验依据。     

抗旋毛虫硒蛋白T单克隆抗体的制备及其对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果

目的制备抗旋毛虫与肝癌H7402细胞相关抗原硒蛋白T单克隆抗体,并观察其对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果。方法用纯化的旋毛虫硒蛋白T重组蛋白常规免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备其单克隆抗体;将肝癌H7402细胞经大腿内侧皮下接种BALB/c裸鼠,1×10^7个细胞/只,采用制备的高效价单抗,按20、50及100μg/只剂量接种裸鼠,隔日1次,共5次,评价单抗对裸鼠肝癌H7402细胞的抑制效果。结果成功获得了3株稳定分泌抗旋毛虫硒蛋白T的单抗的细胞株:4D4、4H2及4F1,效价均达1∶204800以上,其中4H2抗体效价最高;20、50及100μg/只剂量组的抑瘤率分别为51.6%、56.2%和80.3%。结论制备的抗旋毛虫与肝癌H7402细胞相关抗原硒蛋白T单克隆抗体对裸鼠体内肝癌H7402细胞具有明显的抑制效果。     

Effect of transplanted human ovarian cancer tissue on liver lipid metabolism of nude mice

The changes in the lipids of liver tissues of nude mice with and without transplanted human cancerous tissues were studied to clarify the effect of transplanted human tumor tissues on host liver lipid metabolism. The total lipid was extracted and separated into phospholipid, triglyceride, and other fractions by thin layer chromatography. The amounts of methyl esters of fatty acids of each lipid fraction were measured by quantitative gas liquid chromatography after each lipid fraction had been subjected to methanolysis by 5% HCl-methanol. The phospholipid content of liver tissues of six tumor bearing nude mice was increased and the triglyceride content decreased in comparison with these fractions in three control nude mice. The ratio of the phospholipid fatty acid content to the triglyceride fatty acid content (phospholipid∶triglyceride [PL∶TG]) of six tumor bearing nude mice was distributed between 7.6 and 33.5, whereas PL∶TG ratios of three control nude mice were distributed between 1.7 and 3.8. This result was similar to that reported for human liver tissues of patients with malignant neoplastic disease, indicating that nude mice with transplanted human cancer may be useful for clarifying the mechanisms of the lipid-chemical changes of liver tissues of patients with malignancies.     

融合蛋白IFNα2a-α-MSH对小鼠黑色素瘤生长的抑制作用

目的观察融合蛋白IFNα2a-α-MSH对小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用。方法将小鼠黑色素瘤细胞株B16接种于C57BL/6小鼠背部皮下,待肿瘤直径长至4mm以上时,将小鼠分为4组,分别经肌肉注射生理盐水(阴性对照)、IFNα2a(9×106U/kg鼠重)、IFNα2a-α-MSH(9×106U/kg鼠重)及腹腔注射环磷酰胺(20mg/kg鼠重,阳性对照),前3组1次/d,阳性对照组隔日1次,共11d。隔日测量肿瘤大小;末次给药后24h,处死小鼠,称瘤重,并计算肿瘤抑制率。结果 IFNα2a-α-MSH可明显抑制小鼠黑色素瘤的生长,且其抑瘤作用明显强于IFNα2a。结论 IFNα2a-α-MSH对小鼠黑色素瘤生长有较强的抑制作用,为IFNα2a-α-MSH临床治疗黑色素瘤提供了实验依据。