大豆生物活性肽的分离及其抗氧化活性研究

为制各具有抗氧化活性的大豆生物活性肽,本实验采用酶解处理大豆蛋白粉,对酶解产物进行葡聚糖Sephadex G-25凝胶柱层析分离,并对其各组分分子量分布及其抗氧化性进行了研究,对抗氧化活性最佳的肽段进行氨基酸组成分析。结果显示,大豆蛋白酶解物经Sephadex G-25分离后得到了六个肽片段,其中平均链长为4,即含有2～6个氨基酸残基的大豆功能短肽SPP4,对羟自由基具有最佳的清除作用,清除率达到80．13%,氨基酸组成分析发现该组分中缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸含量较高。结果表明,含2～6个氨基酸残基的大豆生理活性短肽具有较好的抗氧化活性。     

凝胶过滤色谱分离大豆抗氧化肽活性的研究

利用木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽的水解液,水解液经Sephadex G-25凝胶过滤色谱进行分子量分级,根据分离图谱确定柱层析的最佳条件。在最佳条件下绘制标准曲线,并根据标准曲线判断分离组分的分子量分布。采用铁离子还原/抗氧化能力测定法(FRAP)、二苯基苦基苯肼法(DPPH)以及金属铜离子螯合能力测定法研究不同分子量大豆肽的抗氧化能力,并对抗氧化活性最佳的肽段进行进一步的HPLC分离和氨基酸组成分析。     

黄粉虫抗氧化活性肽的分离纯化研究

为制备具有抗氧化活性的黄粉虫生物活性肽,采用双酶水解黄粉虫蛋白粉,对酶解产物进行葡聚糖SephadexG-25 凝胶柱层析和阳阴离子交换柱层析分离纯化,并对其各组分分子量分布及其抗氧化性进行研究,对抗氧化活性最佳的肽段进行氨基酸组成分析。结果显示,纯化得到的抗氧化多肽对羟自由基和超氧阴离子自由基具有很强的清除作用,清除率可分别达到74.20% 和87.32%。     

明胶抗氧化肽的分离、纯化及其清除羟自由基活性的研究

为制备具有抗氧化活性的明胶肽,本实验采用不同的酶水解明胶,并对酶解产物采用超滤技术分离,利用分光光度法检测超滤后所得多肽组分对羟基自由基(·OH)的清除能力;进一步对抗氧化活性较强的组分利用葡聚糖Sephadex C-25阳离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱和C18反向高效液相色谱进行分离、纯化,并对其各组分清除·OH活性进行了研究,最后对所得洗脱组分中具有最强清除自由基活性的多肽组分的分析氨基酸组成,结果显示:组分中甘氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸含量较高的肽具有较好的抗氧化活性,·OH清除率达到55.37%。     

澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析。结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC₅₀)6.18 mg/mL与还原能力IC₅₀ 2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC₅₀ 0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC₅₀ 0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有46个肽段,肽段长度均小于...     

诺邓火腿抗氧化肽的分离纯化与鉴定

提取诺邓火腿抗氧化肽,经过Sephadex G-25凝胶色谱进行分离纯化,对各组分进行体外抗氧化试验(清除·OH、清除DPPH自由基、螯合Fe~(2+))研究抗氧化活性;将抗氧化活性最强的组分经葡聚糖凝胶G-15(Sephadex G-15)凝胶色谱再次分离纯化,最后对抗氧化活性最强的组分通过基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)对抗氧化肽进行测序鉴定。试验结果:诺邓火腿抗氧化肽经Sephadex G-25凝胶色谱进行分离纯化后得到4个组分(A、B、C和D),其中组分C的抗氧化活性最强,质量浓度为1 mg/mL时,·OH清除率、DPPH自由基清除率和Fe~(2+)螯合率分别达到50.01%、48.32%和34.37%,与其他组分(A、B和D)相比,差异极显著(p0.01);组分C经Sephadex G-15凝胶色谱分离纯化的5个组分(C_1、C_2、C_3、C_4和C_5),其中C_3组分抗氧化活性最强,质量浓度为1 mg/m L时,·OH清除率、DPPH自由基清除率和螯合Fe~(2+)分别达到73.01%、51.21%和65.23%,与其他组分(C_1、C_2、C_4和C_5)相比,差异极显著(p0.01);通过MALDI-TOF-MS对C_3组分抗氧化肽进行测序鉴定,得到抗氧化肽序列。     

核桃多肽的抗氧化活性及其分子量、氨基酸组成特性研究

目的:为了提高核桃粕利用价值,阐明核桃多肽抗氧化活性及其构效关系。方法:采用DA 201-C大孔树脂和Sephadex G-15葡聚糖凝胶分离纯化核桃粕蛋白酶解液,分析比较不同疏水性和不同分子量核桃多肽抗氧化活性及氨基酸组成特性。结果:经DA 201-C大孔树脂分离的多肽组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的抗氧化活性随洗脱溶剂疏水性增大而增大。组分Ⅲ经Sephadex G-15分离纯化得到a、b、c、d四个不同分子量多肽组分。分子量分布在400~700 Da的组分c具有最高的羟自由基清除能力,并含有较高的谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸,与组分Ⅲ在氨基酸组成上具有相似性。结论:具有较好抗氧化活性的核桃多肽分子量小于800 Da,并具有疏水性较强,谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸组成含量相对较高的结构特性。     

双酶法制得米糠蛋白肽抗氧化组分的分离纯化

利用双酶法水解制得了米糠蛋白。以制得的具有生物活性的米糠蛋白多肽混合液为原料,分离纯化得到了米糠蛋白抗氧化肽,为米糠及其蛋白的深加工奠定理论基础。利用木瓜蛋白酶和风味蛋白酶双酶水解制备米糠蛋白肽。以DPPH·,·OH清除率为主要指标,采用不同截留分子量(1.0×10~4和3×10~3 Da)的超滤膜对米糠蛋白肽进行初步分离,获得3种不同分子质量组分,再利用SP-Sephadex C-25离子交换色谱和Sephadex G-25凝胶色谱,逐步分离纯化出单一的抗氧化肽段。采用RP-HPLC证明了分离肽段的均一性,同时分析检测出该肽段的氨基酸组成,明确肽段抗氧化活性与其氨基酸组成的关系:它是由13种氨基酸组成,其中Glu和Asp摩尔分数分别为21.46%和15.57%,还有7种人体必需氨基酸,占米糠蛋白抗氧化肽氨基酸总含量的39.2%。     

蟹抗氧化肽的分离纯化及活性研究

酶解梭子蟹下脚料获得抗氧化肽粗品。采用葡聚糖凝胶G-50 与G-25 进行分离纯化,对纯化样品的相对分子质量分布、抗氧化特性和氨基酸组成进行测定。结果表明：经分离得到的组分3 抗氧化性较强,其相对分子质量在1096.5 左右,经HPLC 分析其已基本达到纯化;经氨基酸分析其由11 种氨基酸组成,其中具有抗氧化能力的酪氨酸、半胱氨酸和组氨酸所占比例很高。     

菜籽水解蛋白不同组分的体外功能性质研究

初步分析了水酶法工艺得到的菜籽水解蛋白的组成、体外抗氧化活性和抑制ACE活性,并用凝胶过滤色谱法分离水解蛋白得到不同组分,探讨了不同组分的体外抗氧化活性和抑制ACE活性与组分氨基酸组成、分子量分布的关系。结果表明,水解蛋白具有良好的体外功能性质,经Sephadex G-25分离后的9个峰中,峰2、峰4和峰5具有较好的体外功能性质,它们的分子量分布中90%以上低于1000,且含有较高量的疏水性氨基酸。     

面筋蛋白咸味肽的分离纯化及结构鉴定

为了明确面筋蛋白酶解液中的咸味肽序列，对面筋蛋白咸味酶解物进行了分离纯化和结构鉴定。对酶解物脱盐处理后进行分离纯化。经过分级超滤，选择咸味最高、分子质量1 000 Da以下的组分进行葡聚糖凝胶Sephadex G-15过滤层析，结合感官评定结果筛选出咸味最强的组分，并利用液相色谱-串联质谱鉴定其氨基酸序列。最终得到面筋蛋白中咸味肽氨基酸序列为PFGQQ、PFSPQ、QPFP、PDFP、FDDP，分子质量分别为576.28、575.28、488.25、475.22、493.21 Da。本研究为面筋蛋白咸味肽的开发提供了一定理论依据。     

Electrophoretic characterisation of low-molecular weight wheat protein of variable solubility

A low mol. wt protein (S protein) which has a high affinity for endogenous polar lipid was isolated from wheat gluten, partially purified and compared electrophoretically with low mol. wt components of several previously studied wheat protein preparations. Mobilities of S protein components in acidic polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) were very close to those of the chloroform/methanol soluble low mol. wt proteins (CM proteins). A fraction of S protein separated by gel filtration chromatography on Sephadex G-50 (S-III protein) was almost identical to CM proteins by two-dimensional electrophoresis. Bands with mobilities similar to those of S-III protein were present in PAGE patterns of gliadin, the low mol. wt fractions IV and V obtained from gliadin by gel filtration chromatography on Sephadex G-200, and the albumin/globulin fraction of flour prepared by the Osborne solubility fractionation. Because of its variable solubility S protein cannot be unambiguously classified according to the Osborne solubility classification of plant proteins.     

脱脂羊脑蛋白水解多肽的分离纯化及抗氧化活性

为制备羊脑蛋白抗氧化肽,本实验对脱脂羊脑蛋白含量及氨基酸组成进行了分析;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）对枯草芽孢杆菌中性蛋白酶不同酶解时间的酶解液分子质量进行了分析;采用交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25和Sephadex G-15对羊脑酶解产物进行了逐级分离纯化,以羟自由基（·OH）和亚硝酸根离子清除能力为指标对分离组分进行抗氧活性评价,并对纯化后的组分抗氧化活性进行了测定。结果表明,脱脂羊脑粉中蛋白含量为60.55%,在测定的17 种氨基酸中,谷氨酸和天冬氨酸这两种酸性氨基酸含量最高,且含有7 种必需氨基酸;羊脑蛋白经酶解后,分子质量集中在10 kD以下;经Sephadex G-25纯化后,得到了6 个组分,其中组分F4的抗氧化活性最强,组分F4经SephadexG-15纯化后,得到3 个组分,其中组分F4-2的抗氧化活性最强,组分F4-2对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、·OH、超氧阴离子自由基（O2－·）、亚硝酸根离子的半数抑制率IC50分别为1.64、2.47、7.98、5.14 mg/mL。     

合浦珠母贝肉短肽的分离及其抗氧化活性研究

为制备具有抗氧化能力的合浦珠母贝肉活性肽,本文采用Sephadex G-25分子筛层析法对合浦珠母贝肉酶解产物进行分离,测定分离到的各活性组分分子量及其总抗氧化活性、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。结果表明,合浦珠母贝肉酶解产物经Sephadex G-25分离得到6个主要活性组分,相对分子量分别为1437.5、833.7、421.9、244.7、89.0、17.4u,其中功能短肽F1(1437.5u)、F2(833.7u)、F4(244.7u)的抗氧化效果较强,特别是F2(833.7u)短肽具有最强的总抗氧化能力、DPPH自由基清除能力及羟自由基清除能力。该研究为合浦珠母贝肉抗氧化活性肽的开发提供理论技术依据。     

小麦谷朊蛋白ACE抑制肽分离纯化研究

为了探讨和研究小麦谷朊蛋白ACE抑制肽分离提纯方法、技术参数及分离效果,首先采用超滤、纳滤膜技术将谷朊蛋白水解液按照相对分子质量的不同进行分离纯化,采用高效液相色谱法和SHR大鼠实验检ACE抑制抑制效果,并对高抑制活性的组分采用凝胶排阻色谱(Sephadex G-25)进一步分离纯化。结果显示膜过滤和凝胶排阻色谱(Sephadex G-25)能够有效分离和纯化谷朊蛋白抑制肽,IC50由0.125mg/mL降低到0.106mg/mL。一次性灌胃SHR大鼠一星期后动脉血压降低(8.86±2.23)mmHg,证明谷朊蛋白抑制肽经过分离纯化后具有良好的降血压效果。     

中国林蛙皮抗菌肽的提取纯化及抑菌活性检测

采用酸化甲醇法提取中国林蛙皮肤中的抗菌肽,并采用凝胶色谱的方法对提取物进行纯化。结果表明：采用Sephadex G-50 和Sephadex G-25 串联凝胶层析法获取的F2 组分,即纯化后的抗菌肽的抑菌率可达90% 以上。抗菌肽对革兰氏阴性菌和阳性菌以及真菌均有一定抑制效果。对各受试菌株的最小抑菌浓度(MIC)分别为：金黄色葡萄球菌和链球菌为0.2mg/mL;枯草芽孢杆菌和大肠杆菌为0.4mg/mL;蜡样芽孢杆菌为0.8mg/mL;白色念珠菌为1.2mg/mL;酿酒酵母和毛霉为1.5mg/mL;根霉为2.0mg/mL。     

Multiplicity of Glucoamylase of Aspergillus oryzae Part 1. Separation and Purification of Three Forms of Glucoamylase

The glucoamylase system of Aspergillus oryzae cultured on wheat bran was separated into 3 active fractions by (NH₄)₂SO₄, rivanol and ethanol precipitation followed by ion exchange chromatography on DEAE-Sephadex A-25. One of these fractions, referred to as glucoamylase I was purified by further chromatography on hydroxyapatite gel and Sephadex G-200. The other two fractions referred to as glucoamylase II and III were purified by further gel filtration on Sephadex G-200. The purified glucoamylases were found to be homogeneous on 7.5% polyacrylamide gel electrophoresis and isoelectric focusing by carrier ampholites.     

Some new results from isolation and fractionation of low molecular weight wheat proteins]

The alcohol-soluble wheat gluten fraction (gliadine) and the petroleum-ether-soluble wheat protein fraction (purothionine) were isolated and analysed. The gliadine fraction was itself fractionated by gel chromatography (Sephadex G-100). The partial hydrolysis of sub-fractions (molecular weight 20000-30000) yielded (after separation by gel and ion-exchange chromatography) several peptide fractions. The amino-acid composition and the N- and C-terminal groups of the gliadine fractions were determined. Characteristic differences were stated between various fractions. By means of gel chromatography, purothionine was separated into 4-6 fractions. The study of the amino-acid composition and of the N-terminal groups of the fractions revealed differences in both properties.     

波纹巴非蛤生物活性肽的分离与提纯研究

以波纹巴非蛤为原料,根据最佳酶解条件制备酶解液。通过凝胶层析柱(Sephadex G-25)分离水解所得粗品波纹巴非蛤酶解液,并用紫外可见分光光度计测定收集后的各管溶液,然后根据各吸光度值绘制的管数-吸光度曲线图得出第三个峰附近的管数为小分子段。根据标准曲线计算出活性肽的分子量为753.58D,最后通过反相高效液相色谱-质谱联用技术测出活性肽的分子量为679.4D。