草鱼胰蛋白酶的亲和纯化及酶学性质

从草鱼肝胰腺中提取胰蛋白酶,经匀浆、硫酸铵分级沉淀、透析得到胰蛋白酶粗酶液,通过BTI-Sepharose亲和层析一步纯化得到电泳纯的草鱼胰蛋白酶,并进一步研究该胰蛋白酶的酶学性质.结果表明:草鱼胰蛋白酶的分子质量约为27?kDa,米氏常数Km为3.4×10-5?mol/L;最适反应温度为60?℃,在低于60?℃条件下...     

可溶性固定化胰蛋白酶的制备及性质研究

将胰蛋白酶偶联在亲水性高分子聚合物N-琥珀酰壳聚糖上,制备得到水溶性固定化胰蛋白酶,并对其部分酶学性质进行了研究。结果表明,可溶性固定化胰蛋白酶的最适pH为9·0,最适温度为60℃,Km值为0·28mg/mL;该酶在pH6·0以上能够完全溶解,在pH4·0左右基本不能溶解;可溶性固定化胰蛋白酶在60℃条件下,保温8h,仍有55%的活性;在4℃条件下,30d后活性保留达98%;在4℃下保存72h,活性没有明显降低。pH8·0~10·0稳定性最好(相对活性>90%)。     

草菇木聚糖酶的纯化提取和酶学性质

草菇产胞外木聚糖酶通过各级浓缩和纯化,获得接近电泳纯蛋白.通过SDS PAGE测得相对分子质量为24500.木聚糖酶为糖基化修饰的蛋白,含有质量分数20.24%的糖.O 糖基化能增加木聚糖酶的活性,O 和N 糖基化都能提高木聚糖酶的稳定性.5min反应,草菇木聚糖酶在60℃和pH值5.65时活性最高.在此条件下,该酶的Km值为3.87mg/mL,Vmax为1250IU/mg.纯酶的稳定pH值为6.54,57℃时半衰期为1h.     

白姑鱼胰蛋白酶的分离纯化及其性质分析

本研究从白姑鱼幽门垂组织中提取胰蛋白酶粗酶,然后经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析及Sephacryl S-200凝胶过滤层析等分离纯化技术,得到一种阴离子型胰蛋白酶（命名为：Trypsin A）,并对该阴离子型胰蛋白酶进行鉴定及性质分析。结果表明：Trypsin A的分子质量约为28 kD,其最适反应温度为50 ℃,能在低于65 ℃条件下保持稳定;最适pH值为9.5,酸碱耐受范围为pH 9.5～11.0;Western blotting分析表明,白姑鱼阴离子型胰蛋白酶可以与抗鲫鱼胰蛋白酶抗体反应,符合胰蛋白酶活性区域的高度保守性;丝氨酸类蛋白酶抑制剂对白姑鱼胰蛋白酶具有抑制作用。     

芫荽酸性磷酸酶的提取、纯化及酶学性质研究

采用硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析法,从新鲜芫荽中分离纯化出电泳纯的酸性磷酸酶（acid phosphatase,ACP）。该酶的酶活回收率为14.20%、纯化倍数为238.60、酶比活力为295.87 U/mg、亚基分子质量约为53.8 kD;芫荽ACP酶学性质研究结果表明：该酶的最适反应温度为55 ℃,在50 ℃以下时较稳定,因此该酶对温度较敏感;该酶的最适反应pH值为5.8,在pH?4.0～7.0之间较稳定,表明该酶耐受于酸性环境;芫荽ACP的对硝基苯酚磷酸二钠Km值为0.63 mmol/L,表明该酶与底物对硝基苯酚磷酸二钠具有较高的亲和力;甲醇、乙醇、异丙醇、抗坏血酸、草酸、Cu2＋、Pb2＋、Ag＋对该酶具有强烈的抑制作用;Mg2＋、Mn2＋、Ba2＋、K＋对该酶具有一定的激活作用。     

横梗霉产酯化酶的纯化及酶学性质

在研究浓香型白酒的过程中为了提高出酒率以及优质酒率可以从酯化酶的研究入手,酯化酶对提高出酒率和产优质酒有着积极的影响。本实验从五粮液大曲中经过严格的筛选得到一株高产酯化酶的菌株横梗霉。纯化分离横梗霉酯化酶发酵液使用盐析、透析、层析等步骤得到纯化的酯化酶,纯化提高到35.66倍,且具有2.54%的活性回收率,相对分子质量约为43000 u。通过酶学性质研究得出,酯化酶作用时的最佳温度是40℃,存在热敏感特性;60℃条件下反应30 min后有67.97%酶活残留;当p H为6～8时,酶活性较佳,当p H达到7.5时,最优;使用纯化后的酯化酶进行酶学性质研究发现金属离子对酯化酶有抑制作用的是Fe~(2+)、Zn~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)对酯化酶。得到结论该横梗霉所产的酯化酶有着高产、耐热性差、对热敏感、具有良好的耐碱性的性质,在使用过程中应该注意高温以及酸性环境对活性的影响。     

大豆谷氨酸脱羧酶分离纯化及酶学性质研究

对大豆中的谷氨酸脱羧酶(GAD)进行了提取、纯化及酶学性质的研究.采用硫酸铵分级沉淀技术对大豆中GAD进行了纯化,该酶被纯化了4.7倍.纯化后的大豆GAD最适温度为40℃,最适pH为5.9,大豆GAD的热稳定性较差,在80℃几乎失去活性,但该酶在pH5.0～8.0较稳定,能保持很好的酶活.大豆GAD对底物谷氨酸的Km值为19.4 mmol/L.Mg2、KCl对大豆GAD活性影响不大,但KI、Ag+、SDS对大豆GAD有抑制作用.Ca2+对大豆GAD有激活作用,当Ca2浓度为1 500 μmol/L时,对大豆GAD激活作用最强,相对酶活能达到160％.大豆GAD与其他植物GAD相比存在差异,并证实可被Ca2+激活.     

海洋来源产低温几丁质酶菌株的诱变选育及酶学性质研究

为研究菌株Photobacterium sp.LG-1理化性质,提高其产酶活性.利用BIOLOG对其进行生理生化实验,通过紫外诱变、化学诱变及复合诱变进行育种,并对其进行酶学性质及抑菌性研究.结果表明,该菌株复合诱变后酶活达2.690 U/mL,酶活提高率为139.78％;最适反应温度为35℃,0℃仍具有催化活性;最适...     

蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质测定

大蒜中功能成分含硫化合物是由蒜氨酸酶(alliinase,E C4.4.1.4)催化蒜氨酸(alliin)生成的。本实验通过提取、盐析、透析及层析,自新鲜大蒜中分离纯化出蒜氨酸酶,并测定了蒜氨酸酶的酶学性质。蒜氨酸酶的适宜分离纯化过程及条件为:pH7.0Na /K 磷酸缓冲液提取,45%饱和度NH4(SO4)2盐析,10000×g离心沉淀30min,pH6.5的Na /K 磷酸缓冲液溶解,截留1.4万分子量透析袋透析,Sephadex G-200层析,收集洗脱时间4.75h的洗脱液。蒜氨酸酶最适温度和pH值分别为30℃和6.3,Mg2 、Zn2 、Fe2 、Fe3 、EDTA-Na金属离子对蒜氨酸酶有激活作用,Fe3 激活作用最明显,Cu2 严重抑制蒜氨酸酶活性。以合成S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜为底物,蒜氨酸酶的Km为5.91mmol/L、Vmax为1.55μmol/min。     

藕带过氧化物酶的分离纯化及酶学性质

研究藕带中过氧化物酶(POD)的提取和纯化技术,以及温度、pH值和部分化学物质对POD酶活性的影响。结果表明:藕带中的过氧化物酶提取物经过40%饱和度的硫酸铵除杂、80%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-52纤维素柱层析(100mL,0.1 mol/L NaCl的pH 7.2的磷酸缓冲溶液洗脱)、葡聚糖凝胶G-75柱层析(pH 7.2的磷酸缓冲溶液洗脱)进行分离纯化后,经SDS—PAGE鉴定为单一带,其分子量约为42kD,纯化倍数及蛋白质产率分别为32.68倍和2.11%。藕带中POD的最适温度为40℃,最适pH值为5.0。温度高于80℃基本失活,pH值小于2.0或大于8.0也基本失活。抗坏血酸对POD有明显的抑制作用;尿素、SDS、KSCN对POD具有轻微的抑制作用;草酸在低浓度时对POD具有激活作用,高于0.01 mol/L时有明显的抑制作用。     

双酶法提取大豆多糖及其抗氧化性研究

本文以大豆粕为原料,采用双酶法提取大豆多糖,探讨了酶种类、双酶组合、酶解时间、pH、固液比等对提取率的影响,通过正交试验优化工艺条件,并对其抗氧化活性进行研究.结果表明,大豆多糖提取的最佳工艺条件为pH为6.0,酶解时间为6h,固液比1∶20,加酶量为酸性蛋白酶10％+风味酶8％,大豆多糖提取率为9.28％.大豆多糖对·OH、·O2-自由基表现出较强的清除能力,其IC5o分别为0.083mg/mL和0.078mg/mL.说明从大豆粕中提取的大豆多糖具有良好的抗氧化活性,可作为功能性食品基料添加到乳制品、饮料、面包、饼干等食品中,既增加了产品的保健功能,同时又提高了大豆粕的附加值,为大豆粕的综合开发利用提供技术支撑.     

中国被毛孢发酵虫草菌丝体多糖的提取、纯化及其理化性质

利用中国被毛孢虫草菌液体深层发酵培养得到的菌丝体,通过正交试验优化得到了虫草多糖的提取工艺条件为:提取温度100℃,提取时间120 min,料液比1∶15,提取次数4次。粗多糖经Sevag法脱蛋白、透析袋透析、DEAE-cellulose离子交换和Sephadex G-100柱层析纯化后,得到3种多糖(命名为HSP-1、HSP-2和HSP-3)。经紫外扫描、Sephacryl S-300 HR柱层析检测确定HSP-1和HSP-2为均一组分,HSP-3为非均一组分。苯酚-硫酸法测得HSP-1和HSP-2的含糖量分别为89.42%和85.63%。Sephacryl S-300 HR柱层析测得HSP-1和HSP-2的相对分子质量分别为1.7×104Da和9.8×103Da。GC-MS测得HSP-1的单糖组成及比例为:D-葡萄糖∶D-甘露糖∶D-半乳糖=4.522∶1∶1.378,HSP-2的单糖组成及比例为:D-葡萄糖∶D-甘露糖∶D-半乳糖∶D-阿拉伯糖=2.687∶4.591∶1∶0.212。红外光谱测定结果显示HSP-1和HSP-2都含有α型糖苷键。     

酶法提取树莓汁的研究

以澳洲红、早红、美国22三个品种树莓为原料,通过不同的酶处理方法来制取原果汁,优选适于制汁的品种和酶处理方法.     

冬瓜多糖的提取和纯化研究

冬瓜多糖具有许多重要的生理功能,研究了其提取和纯化方法。依次经热水浸提、无水乙醇沉淀和盐酸脱蛋白三步骤得到冬瓜粗多糖。冬瓜粗多糖经凝胶柱层析得纯多糖。红外(IR)光谱分析表明该多糖具有β-D-吡喃糖苷键,凝胶渗透色谱法(GPC)测得其分子量约为22800。紫外(UV)吸收光谱分析和苯酚—硫酸法分析表明所得冬瓜多糖具有较高的纯度。薄层层析(TLC)分析表明冬瓜多糖是由半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖和鼠李糖这6种单糖组成。     

辣椒红色素提取与分离纯化工艺研究进展

辣椒红色素是一种天然色素,因其具有色泽鲜艳、无毒副作用等优点被广泛应用于食品、化妆品和医药等业。该文介绍辣椒红色素提取、分离纯化工艺技术研究进展,并对辣椒红色素发展前景进行展望。     

谷维素提取及纯化方法研究进展

谷维素是一种具有多种生理功能的生物活性成分,存在于稻米等粮食作物中。综述谷维素提取、纯化方法的研究进展,指出了谷维素的应用前景。     

植物甾醇提取纯化方法研究进展

为了提高植物甾醇的提取效率和纯度,对植物甾醇的结构和来源,提取纯化方法及其辅助技术的原理、种类、特点以及应用等进行归纳分析,并对今后的研究方向提出了建议。植物甾醇来源广泛,但传统的植物甾醇提取纯化方法如溶剂萃取法等存在收率低、纯度低以及影响环境等缺点,具有一定局限性。新型的植物甾醇提取纯化方法如超临界CO₂法等具有操作简单、无毒、产品纯度高等优点,是一种环保高效的提取方法。辅助提取技术如酶、微波、超声波和磁场等能够优化对植物甾醇的提取纯化工艺,提高提取纯化效率。通过将传统方法进行改良、与新型方法结合、优化工艺参数以及开发新的提取纯化技术等措施,实现植物甾醇的高效提取纯化。     

水酶法制油工艺研究进展

主要论述了水酶法制油工艺的特点、原理及国内水酶法提油的应用现状,总结了水酶法制油发展过程中有待改进的问题,并对水酶法制油的发展前景进行了展望。     

啤酒糟中蛋白质的酶法提取及功能特性研究

对啤酒糟中蛋白质的酶法提取工艺条件及其功能特性进行了研究.结果表明,pH9.5、固液比1:15、加酶量50U/g、温度45℃和时间80min为最佳提取条件.在此条件下,蛋白质提取率达77.64%,产品纯度为75.33%.对其功能特性研究表明,该蛋白具有很高的溶解性和乳化能力,且优于国产分离蛋白,在食品工业中有很高的应用价值.     

栀子黄色素提取与精制研究进展

栀子黄色素作为一种天然的、具有保健功能的食用色素需求量日益增多，本文对栀子黄色素的性质、质量劣变、提取精制方法作了论述，着重阐述栀子黄色素的提取与精制方法，以期能为高品质栀子黄色素的生产提供参考。