应用胶体金试纸条快速检测赭曲霉毒素A的研究

本文介绍了一种快速检测赭曲霉毒素A的胶体金试纸条的研制方法，其中包括胶体金的生产、金标抗体的制备、试纸条的组装和测试等步骤。测试结果表明赭曲霉毒素A快速检测试纸条的检测限为10ng／ml，检测时间为10min，加上使用方便，经济适用，使之适合于赭曲霉毒素A现场快速检测之用。     

赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制及与传统胶体金试纸条的比较

本实验介绍了赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制方法,其中包括胶体金的生产、金标抗体的制备、无毒体系试纸条的组装等步骤。所制备的赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条和传统的胶体金试纸条进行了比较,测试结果表明,赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的检测限和检测时间与传统的胶体金试纸条相同,适合于赭曲霉毒素A现场筛查之用。     

赭曲霉毒素A胶体金快速检测试剂条的研制

为建立一种快速检测饲料中赭曲霉毒素A的检测方法,应用胶体金免疫层析技术,研制了一种饲料中赭曲霉毒素A的免疫胶体金快速检测试剂条.将羊抗鼠IgG、特异性结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化,以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素膜和胶体金结合垫上,包被后的硝酸纤维素膜、样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试剂条.试剂条的最低检测限为25μg/kg,与其他霉菌毒素的交叉反应率小于1％.该试剂条可用于饲料中赭曲霉毒素A的快速检测.     

赭曲霉毒素A的研究进展

赭曲霉毒素A主要由赭曲霉和青霉属的某些菌株产生,广泛分布于谷物、其他植物性食品及相关产品和动物性食品,对动物和人体具有肾脏毒性、肝脏毒性,另外还有致畸、致突变和致癌作用,并有免疫抑制作用.随着对其研究的不断深入,现在愈来愈受到人们的关注,本文就赭曲霉毒素A对食品的污染、毒性、检测方法等方面进行综述.     

赭曲霉毒素A检测方法的研究进展

赭曲霉毒素A(ochratoxin A, OTA)是一种具有极端毒性、污染广泛及危害严重的次级代谢产物。由于赭曲霉毒素A具有这些特点且食品安全问题越来越被人们广泛关注, 所以确定食品和商品中的OTA污染水平非常重要。目前对于OTA的检测, 已经建立了非常多的分析手段, 如薄层色谱法(thin layer chromatography, TLC)、高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)、酶联免疫技术(enzyme linked immunosorlent assay, ELISA)、时间分辨荧光免疫分析技术(time-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA)等。本文综述了多种赭曲霉毒素A的检测分析方法, 简介了它们的优缺点及研究进展, 并进行了比较, 以期为食品中赭曲霉毒素A的检测研究提供一些参考。     

胶体金免疫层析法快速检测赭曲霉毒素A研究

该研究应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测食品和饲料中赭曲霉毒素A方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记抗赭曲霉毒素A单克隆抗体,标记胶体金抗体喷涂于玻璃纤维上,赭曲霉毒素A偶联抗原OTA-OVA和二抗兔抗鼠IgG分别喷涂于硝酸纤维膜上作为检测限和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装成试纸条并装卡。测试结果表明,赭曲霉毒素A快速检测试纸条灵敏度为5 ng/mL,检测时间为10 min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。该法简单方便,非常适于现场快速检测赭曲霉毒素A。     

胶体金技术快速测定葡萄酒中赭曲霉毒素A

目的利用胶体金免疫层析技术建立葡萄酒中赭曲霉毒素A的快速筛查方法。方法样品经过层析、孵育,通过i Check-单卡单测快检仪的图像分析进行定量检测,同时对进口与市售国产葡萄酒进行筛查。结果赭曲霉毒素A在添加水平为2.0、5.0μg/L时,红葡萄酒的平均回收率分别为92.5%、72.0%;相对标准偏差(RSD,n=6)分别为5.84%、2.59%;桃红葡萄酒的平均回收率分别为87.0%、76.6%;相对标准偏差(RSD,n=6)分别为7.70%、5.56%;白葡萄酒的平均回收率分别为84.0%、78.4%;相对标准偏差(RSD,n=6)分别为5.67%、3.54%。该方法定量限为1.0μg/L。同时与酶联免疫方法和液相色谱方法比较,通过t检验表明胶体金法不存在系统误差。市售葡萄酒赭曲霉毒素A的含量低于欧盟的限量标准(2.0μg/L)。结论胶体金的方法具有快捷、灵敏、特异性等特点,适合于大批量葡萄酒样品的现场快速筛查。     

胶体金测试条法对粮食中赭曲霉毒素快速定量测定的研究

利用胶体金测试条法对粮食中赭曲霉毒素A(OTA)进行快速定量检测,结果表明:OTA的检测限为3μg/kg,定量限为7μg/kg,在5～20μg/kg浓度范围内,相关系数r为0.9999.采用有证实物参考物质进行比较,正确度在84.3％～106.7％之间,变异系数在19.6％～30.3％之间.采用配对t-检验,与高效液相色谱法的测定结果相比较,二者无显著差异.     

免疫学法检测赭曲霉毒素A研究进展

赭曲霉毒素A是曲霉属和青霉属某些真菌次级代谢产物,其毒性大、污染范围广、与人类健康关系密切。对赭曲霉毒素A检测是利用其本身荧光特性进行高灵敏度荧光检测,易受其它本底物荧光干扰,造成检测周期长,成本高;免疫化学分析具有高度特异性、灵敏性和快速简便等优点,在赭曲霉毒素A检测中应用广泛,其中,免疫传感器具有独特专一性和选择性,在赭曲霉毒素A检测领域能发挥更大优势。     

食品中赭曲霉毒素A检测方法研究进展

赭曲霉毒素A(ochratoxin A, OTA)是曲霉属和青霉属等有毒真菌产生的一类次级代谢产物,是常见污染食品的五大真菌毒素之一,具有较强的肾毒性、肝毒性、神经毒性和免疫毒性,以及致畸、致癌和致突变作用。OTA广泛存在于各种谷物及其制品、葡萄与葡萄酒、咖啡等多种食品原料及其成品中,严重威胁人体健康,因此有必要建立快速、准确、灵敏的OTA检测方法。针对食品中OTA的检测,目前已经拥有许多方法,如薄层色谱法,高效液相色谱法,液相-质谱联用法以及酶联免疫吸附法等。本研究对赭曲霉毒素A不同检测方法的原理、优缺点等进行归纳总结,旨在为食品中OTA的检测提供支持。     

单增李斯特菌胶体金免疫层析试纸条的研制

以单增李斯特菌(LM)内化素A蛋白(InlA)单克隆抗体为基础,研制其胶体金免疫层析检测试纸条。方法 采用DNAStar软件对LM inlA全长基因编码蛋白进行抗原表位分析,截取部分inlA基因片段构建原核表达质粒,诱导表达和纯化获得重组蛋白。以该蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体;以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性、稳定性进行评价。结果 筛选到2株高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体属于IgG1亚类,小鼠腹水抗体效价为1∶64000;研制的试纸条可与LM发生阳性反应,而与非LM李斯特菌、链球菌、鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌O157∶H7等食源性致病菌均不发生阳性反应;LM纯培养物敏感性为2.4×10^5cfu/ml,模拟猪肉样品敏感性为4.0×10⁶ cfu/ml;4℃保存期可达16周以上。结论 研制的胶体金免疫层析试纸条具有快速、特异、敏感等优点,可以用于样品中LM的快速检测。     

一种多氯联苯胶体金免疫快速检测试纸条的研制

该研究制备了多氯联苯（PCB118）半抗原,基于该半抗原研制出一种能够检测饲料中多氯联苯的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试剂条检测限为10 μg/kg,检测时间约为15 min,假阳性率和假阴性率均为0。与多氯联苯PCB52、PCB101、PCB28、PCB138、PCB153、PCB180等药物无交叉反应,特异性较好,12个月内稳定性指标均符合要求,技术指标均符合《农残办技术材料要求及审查程序》对快速检测产品的要求,该试纸条适用于基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义。     

Ultrasensitive and simultaneous detection of 6 nonsteroidal anti-inflammatory drugs by colloidal gold strip sensor

In this work, an oxicam group–selective monoclonal antibody against 6 nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAID; meloxicam, lornoxicam, piroxicam, sudoxicam, droxicam, and tenoxicam) was prepared. Also, a spacer arm with carboxyl group was derived at the hydroxyl of meloxicam to generate the meloxicam hapten. The half-maximal inhibitory concentrations (IC₅₀) were, respectively, 0.31 ng/mL for meloxicam, 0.49 ng/mL for lornoxicam, 2.90 ng/mL for piroxicam, 1.95 ng/mL for sudoxicam, 3.08 ng/mL for droxicam, and 5.36 ng/mL for tenoxicam. A colloidal gold immunochromatographic strip based on the monoclonal antibody was developed for the detection of these 6 NSAID in milk. The results could be obtained by the naked eye in 10 min, and the cut-off values and the visual limits of detection in real samples were 5, 5, 10, 10, 25, and 25 ng/mL, and 0.25, 1, 0.5, 0.5, 1, and 1 ng/mL, respectively. This immunochromatopgraphic strip is a suitable tool for on-site detection and screening of oxicam NSAID in milk samples.     

苯甲酸免疫胶体金快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,制备苯甲酸胶体金免疫层析快速检测试纸条,采用柠檬酸三钠还原法制备颗粒直径为17nm的胶体金,将苯甲酸金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上制成胶体金结合垫,将包被抗原和二抗羊抗兔分别结合于硝酸纤维膜作为检测线(T线)和质控线(C线),组装成胶体金免疫层析试纸条并进行灵敏度测试。结果显示,胶体金试纸条检测限为100μg/L,可在5～7min内完成测试,与苯酚、甲苯、苯乙酸、苯丙氨酸等药物均无交叉反应,检测结果与酶联免疫吸附法完全一致。该方法具有操作简便、快速、特异性强、灵敏度高等特点,适用于现场快速检测和筛选工作,具有广泛的商业开发应用前景。      

玉米赤霉烯酮胶体金试纸条质量验证试验

目的验证玉米赤霉烯酮胶体金试纸条对玉米基质、小麦基质样品中玉米赤霉烯酮检测的准确性。方法根据试纸条说明书方法,将不同浓度系列的玉米基体和小麦基体质控样品进行前处理后,用试纸条测定其浓度。结果检测样品为玉米基体时试纸条间无显著性差异,相对准确率为99.5%,检测结果准确;小麦基体时,试纸条显著性差异为39.03(自由度df=1),相对准确率为80.5%,检测结果差异较大。结论该方法基本可行,适合对玉米中玉米赤霉烯酮的含量进行定性检测,不适合对小麦中玉米赤霉烯酮含量进行定性检测。     

三氯杀螨醇胶体金免疫快速检测试纸条研制及在茶叶中的应用

目的 建立一种基于胶体金免疫层析法的三氯杀螨醇快速检测试纸条的研制方法,并阐述其在新鲜茶叶中的应用。方法 以三氯杀螨醇为原料,用琥珀酸酐对其衍生化合成半抗原;用活化酯法将半抗原与白蛋白偶联得到人工抗原;用人工抗原免疫小鼠获得单克隆抗体。用上述原料制备出本研究试纸条。结果 所研制试纸条对茶叶中三氯杀螨醇检测限为0.2mg/kg,检测时间8min;可特异性地检测三氯杀螨醇的残留量,而对其他与三氯杀螨醇结构或功能相似的农药无交叉反应;准确性高;稳定性好;操作简便;检测成本低。结论 本研究提供的试纸条适宜基层实验室的大批量样本检测和田间现场快速检测,能够实现从源头上控制污染茶叶的流通上市。     

牛奶样品中志贺氏菌胶体金免疫试纸条检测方法的建立

通过用超声波破碎的宋内氏志贺氏菌和福氏志贺氏菌的菌体碎片为免疫原免疫BALB/c小鼠,获得4株能稳定分泌抗志贺氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取其中一株制备单抗,并用胶体金标记。同时抗志贺氏菌的兔多抗和驴抗鼠抗体(二抗)分别喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线(T线)和质控线(C线),研制了志贺氏菌胶体金快速检测试纸条。结果显示试纸条的灵敏度为105mL-1,并只与两株志贺氏菌有阳性反应外,而与其它23株常见的细菌无交叉反应。同时在检测添加有阪崎肠杆菌和长双歧杆菌的牛奶样品中,结果显示试纸条的灵敏度为106mL-1。志贺氏菌免疫胶体金试纸条的建立,为加强食品中志贺氏菌的检测工作,建立一种快速、简便的筛查方法具有重要的意义。     

组胺胶体金免疫快速检测试纸条研制及其在水产品检测中的应用

目的 研制基于胶体金免疫层析法的组胺快速检测试纸条,并探究其在水产品中的应用.方法 以组胺为原料,采用琥珀酸酐对其衍生化合成半抗原;活泼酯法将半抗原与白蛋白偶联得到人工抗原;用人工抗原免疫小鼠获得单克隆抗体.采用上述原料制备出本研究试纸条,依据国家《食品快速检测方法评价技术规范》进行评价.结果 所研制试纸条对水产品中组...     

玉米赤霉烯酮胶体金快速检测试剂板的研制

目的 应用胶体金免疫层析技术, 研制一种玉米等谷物中玉米赤霉烯酮残留免疫胶体金快速检测试剂板。方法 将制备的羊抗鼠IgG、人工结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化, 以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素膜和胶体金结合垫上。包被后的硝酸纤维素膜和样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试纸条。结果 该试剂板的最低检测限为100 μg/kg, 整个检测过程仅15 min, 与其他霉菌毒素无交叉反应。结论 该试剂板可用于玉米赤霉烯酮残留快速检测。