云南省烟草镰刀菌根腐病病原鉴定

【背景和目的】烟草镰刀菌根腐病（Fusarium root rot）影响烟叶产量和品质,为明确云南省烟草镰刀菌根腐病病原种类。【方法】采用组织分离法分离病原并进行单孢纯化;结合形态学和分子生物学rDNA-ITS与EF-1α序列鉴定病原;采用灌根接种法测定病原菌的致病性。【结果】获得的300个菌株在PDA平板上均呈絮状,菌丝白色、紫色或粉红色,大型分生孢子无色、多孢、多为镰刀形;小型分生孢子无色、多无隔,呈椭圆形或纺锤形。经序列比对将300菌株鉴定为7个种,其中227株为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）,占比75.7%;43株为茄病镰刀菌（F. solani）;16株为共享镰刀菌（F. commune）;8株为木贼镰刀菌（F. equiseti）;3株为层出镰刀菌（F. proliferatum）;2株芬芳镰刀菌（F. redolens）和1株轮枝镰刀菌（F. verticillioides）。【结论】云南省烟草镰刀菌根腐病病原为尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌、共享镰刀菌、木贼镰刀菌、层出镰刀菌、芬芳镰刀菌和轮枝镰刀菌,其中尖孢镰刀菌为优势菌。     

烟草品种对镰刀菌根腐病的抗性鉴定

采用盆栽烟株带菌麦粒接种法测定12个烟草品种（系）对烟草镰刀菌根腐病的苗期抗病性,结果表明,中烟98、贵烟6号、云烟87、7478、NC89和豫烟13号对镰刀菌具有较高抗性,KRK26、中烟100和中烟205中等抗病,小黄金1025、豫烟10号和长脖黄对镰刀菌易感,在所有测试样品中,长脖黄抗性最低。长脖黄、小黄金1025和豫烟10号可作为对镰刀菌根腐病检测预警材料及镰刀菌根腐病的感病对照样品应用于相关研究中。      

广东韶关烟区烟草镰刀菌根腐病病原鉴定及致病性分析

为明确广东韶关烟草镰刀菌根腐病菌种类及致病力,在珠玑、始兴、南雄和乌茎采集根腐病样本,用组织分离法分离病原菌,盆栽接种带菌麦粒测定其致病性,观察菌株形态,基于EF-1α和β-Tub基因序列构建发育树鉴定病原菌。结果表明,获得45株镰刀菌,通过形态特征和分子技术鉴定为茄病镰刀菌Fusarium solani、共享镰刀菌F. commune、藤仓镰刀菌F. fujikuroi和尖孢镰刀菌F. oxysporum,分别占比42.22%,26.67%、20.00%和11.11%,对烟草均有致病性,强弱排列为F.commune≈F. fujikuroi>F. oxysporum>F. solani。本研究可为广东韶关地区烟草镰刀菌根腐病的防治提供依据。     

云南省烟草镰刀菌根腐病菌遗传多样性分析

【背景和目的】尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）引起的根腐病是烟草主要的土传病害,在云南烟区普遍发生。为分析云南省不同地理来源尖孢镰刀菌的遗传差异性和亲缘关系。【方法】采用ISSR(inter-simple sequence repeat)和SRAP(sequencerelated amplified polymorphism)分子标记技术分析40株菌株遗传多样性。【结果】（1）采用ISSR技术,供试的7条引物共扩增出53条条带,其中多态性条带44条,平均多态性条带83.02%。菌株间的遗传相似系数为0.49～0.96,存在遗传背景差异。遗传相似系数为0.68时,40株菌株可分为3个类群。（2）采用SRAP技术,供试的7对引物共扩增出44条条带,其中多态性条带32条,平均多态性条带72.73%,菌株间的遗传相似系数为0.55～0.96。遗传相似系数为0.70时,40株菌株可分为3个类群,结果与ISSR一致。【结论】云南省烟草尖孢镰刀菌菌株间遗传差异大,ISSR和SRAP分子标记技术可用于烟草尖孢镰刀菌的遗传多样性分析。     

河南烟区烟草镰刀菌根腐病病原鉴定及侵染烟草根系观察

为明确河南烟区烟草镰刀菌根腐病的病原组成结构及其侵染过程,通过形态学和分子生物学方法鉴定了从河南烟区分离的烟草镰刀菌根腐病病原菌,采用组织染色显微和荧光显微观察了病原菌对烟草根系的侵染过程。结果表明,豫南和豫西烟区尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）平均检出率最高,分别为53.04%和48.18%;其次是茄病镰刀菌（F. solani）和层出镰刀菌（F. proliferatum）,平均检出率分别为33.62%、37.24%和6.67%、9.91%。豫中烟区茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的平均检出率相近,分别为46.19%和45.48%,各烟区均检出共享镰刀菌（F. commune）、三线镰刀菌（F. tricinctum）和藤仓镰刀菌（F. fujikuroi）等新的病原菌。尖孢镰刀菌可通过根系表皮细胞间隙、根毛、根系破损细胞处、侧根生长处等位点侵染植物组织;附着在植株根系表面的病原孢子萌发形成芽管,通过植物表皮细胞间隙及根毛顶端侵入烟草组织,之后芽管生长分化形成菌丝,菌丝沿皮层薄壁细胞间隙逐渐扩展延伸,进入维管束并大量繁殖,进而堵塞导管管腔,阻止水分及营养运输,造成植物病变。...     

烟草镰刀菌根腐病（Fusarium spp.）拮抗菌L210的鉴定及生防潜力评价

为筛选烟草镰刀菌根腐病（Fusarium spp.）的高效拮抗菌株,通过平板对峙、盆栽和大田复筛试验,从平顶山烟区烟株根际土壤中分离筛选拮抗菌;利用形态观察、生理生化测试和16S rDNA序列分析对拮抗菌进行鉴定,并对拮抗菌抗镰刀菌根腐病的机理进行研究。结果表明：从10份土壤样品中共分离土壤微生物菌株512株,其中以L210菌株对镰刀菌根腐病抑制效果最好,平板对峙抑菌直径71.4 mm,抑菌率为68.2%;盆栽和大田防病试验的发病率分别为0、6%,病情指数分别为0、1.5,防治效果分别为100%和77.9%。初步鉴定L210菌株为液化沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）,其抑菌机理为溶解尖孢镰刀菌的菌丝,使其失去侵染能力,进而抑制病原菌的生长。菌株发酵液中含有几丁质酶和纤维素酶,可溶解病原菌的细胞壁,还可显著诱导提高烟苗中多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）等防御酶的活性。因此,菌株L210在烟草镰刀菌根腐病的生物防治中具有较大的应用潜力。     

烟草镰刀菌根腐病拮抗细菌的筛选鉴定及促生防病效果

为挖掘对烟草镰刀菌根腐病具有较强拮抗作用的生防菌株,采用稀释涂布平板法从健康烟株根际土壤中分离纯化对烟草镰刀菌根腐病（Fusarium root rot）主要病原具有一定拮抗作用的细菌,进行形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定,并测定促生防病效果。经平板对峙测定,筛选出2株对烟草镰刀菌根腐病病原具有较好抑制作用的菌株YX53和YX72,对茄病镰刀菌（F.solani）的抑制效率分别为83.66%和73.54%,对尖孢镰刀菌（F.oxysporum）的抑制效率分别为57.57%和55.89%;2菌株无菌发酵滤液对病原孢子萌发抑制率为84.82%～100%,其挥发性化合物可抑制病原菌丝生长或产孢,且对烟草疫霉菌（Phytophthora nicotianae）、根串珠霉菌（Thielaviopsis basicola）等也有抑制效果。鉴定结果表明,YZ53和YX72分别为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus和枯草芽孢杆菌B. subtilis。经2菌株处理的烟苗胚根增长率分别达到了67.86%和161.61%,盆栽烟苗根长、最大叶面积、鲜质量等均有所增加;YX53盆栽防...     

烟草镰刀菌根腐病的病原鉴定

为了探明烟草镰刀菌根腐病的病原菌分类地位,2015-2017年从福建省三明市主要烟区采集的烟草根腐病病样中分离获得31个镰孢菌属菌株（F1~F31）。对所分离的菌株进行形态学甄别、系统进化分析、种特异分子鉴定及致病性测定,结果表明分离菌株显微形态特征与尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）和共享镰刀菌（F. commune）相似;采用贝叶斯法（Bayesian Analysis）对4株分离菌F-04、F-18、F-19和F-28的rDNA基因内间隔区（IGS）基因作系统发育分析,结果显示这4个菌株同F. commune聚为一类并与F. oxysporum明确区分;特异性引物扩增鉴定结果表明分离菌株均为F. commune。通过室内与田间接种试验验证了分离菌株F. commune的致病性,明确其为烟草根腐病的主要病原物,这是我国首次报道共享镰刀菌F. commune引起烟草根腐病。      

烟草镰刀菌根腐病生防假单胞菌的筛选与鉴定

【背景和目的】镰刀菌引起的根腐病是烟草主要土传病害之一,为筛选对烟草镰刀菌根腐病菌具有较好抑制作用的假单胞菌。【方法】采用稀释涂布平板法从健康烟株根际土壤中分离纯化对烟草镰刀菌根腐病（Fusariumrootrot）主要病原具有一定拮抗作用的假单胞菌;采用形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定,并测定促生防病效果。【结果】（1）分离纯化的2株假单胞菌分别为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa YZ66和绿针假单胞菌P. chlororaphis YX33;(2)YZ66和YX33对茄病镰刀菌（F.solani）菌丝的抑制效率分别为79.66%和76.68%,对尖孢镰刀菌（F.oxysporum）的抑制效率分别为79.93%和57.48%,对烟草疫霉菌（Phytophthora nicotianae）、根串珠霉菌（Thielaviopsis basicola）等也有抑制效果;（3）2株菌株具有显著的促生防病作用,YZ66盆栽防病效果在81.21%以上,YX33在67.55%以上;最大叶面积、鲜重等有所增加;（4）2菌株均含吩嗪-1-羧酸（Phenazine...     

基于FUNGuild的镰刀菌根腐病发病烟株根际真菌群落研究

为了解镰刀菌根腐病发病烟株与未发病烟株在根际真菌群落结构与功能上的差异,联合应用高通量测序和FUNGuild技术研究了镰刀菌根腐病发病烟株与未发病烟株根际土壤中的真菌群落,结果表明:（1）镰刀菌根腐病发病烟株根际真菌群落的Shannon指数为4.14,而未发病烟株则高达4.71,未发病烟株根际真菌群落多样性显著高于发病烟株,镰刀菌根腐病发病烟株与未发病烟株根际土壤中的真菌群落在组成上有显著差异;（2）镰刀菌根腐病发病烟株根际真菌以病理营养型为主,占54.64%,而未发病烟株根际真菌则以腐生营养型为主,占46.10%;（3）镰刀菌根腐病发病烟株根际的病原菌相对丰度为30.73%,显著高于未发病烟株的1.12%,镰刀菌在病原菌群落中占绝对优势地位。高通量测序与FUNGuild联用可对土传病害感病烟株的根际优势病原真菌群落进行准确鉴定,可为烟草病害的防控提供科学参考。      

棘孢木霉与30%霜霉·嘧菌酯协同防治烟草镰刀菌根腐病

为筛选防治烟草镰刀菌根腐病高效、安全的复配剂,采用菌丝生长速率法测定生防棘孢木霉Tr-0111、化学杀菌剂30%霜霉·嘧菌酯对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的毒力及两者的相容性,同时测定两者混配对尖孢镰刀菌的毒力系数,并通过盆栽试验评价其对烟草镰刀菌根腐病的防治效果。结果表明,30%霜霉·嘧菌酯和棘孢木霉Tr-0111对尖孢镰刀菌均具有较强的毒力,其EC₅₀值分别为0.064 3 mL/L、2.36×10² cfu/mL,且两者相容性好。除V_{30%霜霉·嘧菌酯}∶V_Tr-0111=4∶6时无增效作用,其他8个混配比例均具有增效作用,其中V_{30%霜霉·嘧菌酯}∶V_Tr-0111=7∶3时增效比率最高,为1.16,抑菌率为68.37%。盆栽试验结果表明,V_{30%霜霉·嘧菌酯}∶V_Tr-0111=5∶5时,对烟草镰刀菌根腐病的防效最好,为78.18%,其次为7∶3和1∶9,防效分别为77.27%和72.7...     

禾谷镰刀菌脱氧雪腐镰刀菌烯醇生物合成及其分子调控研究进展

禾谷镰刀菌是感染小麦、玉米等主要粮食作物的一种重要的病原真菌,在引发严重小麦赤霉病害的同时,可分泌产生脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）,污染食品后不易被清除,严重威胁人和动物的健康。禾谷镰刀菌产DON的生物合成路径及分子调控机制一直是国内外的研究热点、焦点和难点,也是防控DON的基础。本文综述了禾谷镰刀菌DON生物合成过程中涉及产毒基因簇TRI的各个基因、编码蛋白及其生物学功能,以及目前对禾谷镰刀菌中对呕吐毒素生物合成调控机制的研究进展。这些基础信息将直接为安全控制主要粮食及其制品中真菌毒素污染提供有价值的参考资料。     

烟草茎腐病的病原鉴定及生物学特性

为有效防治烟草茎腐病,采集了漂浮育苗温室大棚中发病烟苗,通过致病性测定及形态学观察,鉴定出烟草茎腐病痛原茵为Botrytis cinerea Pers..生物学特性研究表明,温度22～26℃,pH 5～7适宜病原茵的生长发育,分生孢子的致死温度为55℃经历20 min.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）又名呕吐毒素,是一种有很强细胞毒性、胚胎毒性、一定致畸性、弱致癌性且影响免疫系统的真菌毒素。重点介绍了脱氧雪腐镰刀菌烯醇ELISA试剂盒检测法,以及用此法检测的抚顺地区2008年产部分玉米样品在2009年夏季DON的平均含量。     

烟草品种对低头黑病的抗病性鉴定

室内采用孢子悬浮液和病菌毒素滤液浸根法及盆栽烟株幼茎刺伤菌块接种法测定了２７个烟草品种和品系对低头黑病的苗期抗病性。自然重病地鉴定了６个生产推广品种的成株期抗病性。结果表明：烟草品种对低头黑病的抗病性有明显差异，苗期抗病性与田间成株期抗病性反应一致。筛选鉴定出中烟１４和Ｇ－８０两个抗病品种。比较了几种接种方法，证明病菌毒素滤液浸根法测定品种抗病性优于其它方法。苗期抗性测定可用作初筛，选出抗病和中抗     

河南烟草镰刀菌的初步分子鉴定

为了明确河南烟田危害烟草的镰刀菌种类,以烟叶主产区典型病株为样本,用组织分离法获得纯菌株,并对所得菌株进行形态学鉴定、rDNA-ITS序列分析及致病性测定.形态学观察结果表明,分离获得的22个菌株在PDA培养基上均产生茂密的菌丝,呈棉絮状,能产生黄、红、紫等色素,大型分生孢子镰刀形或椭圆形,无色、多胞;小型分生孢子卵形至椭圆形,无色、单胞或双胞.BLAST比对结果表明,在GenBank序列数据库中,菌株1～11号的DNA序列与登陆号为KC429789.1的Fusarium oxysporum (F.oxysporum)序列同源性达到95.77％以上;菌株12～18号与登陆号为JQ910159.1的Fusarium solani (F.solani)序列的同源性达到88.01％以上;菌株19～21号与登陆号HQ176444.1的Fusarium verticillioides (F.verticillioides)序列的同源性达到89.72％以上;菌株22号与登陆号为JX045841.1的Fusarium proliferatum(F.proliferatum)序列的同源性为90.74％.接种试验表明,4种镰刀菌均能侵染活体烟苗并产生典型症状.因此,河南烟田危害烟草的镰刀菌鉴定为F.oxysporum,F.solani,F.verticillioides及F.proliferatum.其中,F.proliferatum侵染烟草在河南为首次报道.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇酶联免疫检测方法的建立

应用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体12D1建立了竞争间接ELISA方法,用于检测小麦、玉米中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),最低检出限为20ng/mL,检测范围为20￣460ng/mL。用蒸馏水提取掺合DON(250￣4000ng/g)的小麦样品,回收率为82.1%￣96.6%,变异系数为0.6%￣7.1%。     

小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与雪腐镰刀菌烯醇的免疫亲和净化-高效液相色谱检测方法研究

目的建立小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与雪腐镰刀菌烯醇的免疫亲和净化-高效液相色谱检测方法。方法样品经纯水提取后,用免疫亲和柱净化,经甲醇洗脱,在C18色谱柱上等度洗脱分离,采用紫外检测器检测。结果标准曲线在0.1~2.0 mg/kg范围内线性良好。小麦基质中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的回收率为72.8%~110.1%,精密度为3.6%~10.8%,实验室内Hor Rat值为0.24~0.48;玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的回收率为72.2%~90.6%,精密度为1.2%~5.2%,实验室内Hor Rat值为0.07~0.31。小麦基质中雪腐镰刀菌烯醇的回收率为58.9%~100.4%,精密度为3.6%~11.3%,实验室内Hor Rat值为0.23~0.63;玉米中雪腐镰刀菌烯醇的回收率为56.9%~91.9%,精密度为2.5%~7.8%,实验室内Hor Rat值为0.11~0.43。结论该方法具有灵敏度高、重现性好、操作简便、准确可靠等特点,适用于小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇与雪腐镰刀菌烯醇的测定。     

烟草品种对低头黑病的抗病性鉴定

室内采用孢子悬浮液和病菌毒素滤液浸根法及盆栽烟株幼茎刺伤菌块接种法测定了27个烟草品种和品系对低头黑病的苗期抗病性。自然重病地鉴定了6个生产推广品种的成株期抗病性。结果表明：烟草品种对低头黑病的抗病性有明显差异，苗期抗病性与田间成株期抗病性反应一致。筛选鉴定出中烟14和G─80两个抗病品种。比较了几种接种方法，证明病菌毒素滤液浸根法测定品种抗病性优于其它方法。苗期抗性测定可用作初筛，选出抗病和中抗品种（系），再进一步进行田间成株期抗病性的鉴定。     

河南烟草镰刀菌的分子鉴定及致病性分析

为明确河南省不同烟叶产区危害烟草的镰刀菌种类,以河南省烟叶产区典型镰刀菌根腐病烟株及烟田土壤为供试样品,采用组织分离法和土壤分离法获得纯化菌株,根据菌株形态和rDNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定,并采用无创接种法测定病原菌对烟草的致病性。结果表明,获得的98个菌株在PDA培养基上均产生白色菌丝,大型分生孢子呈镰刀形或马特形,无色、多孢;小型分生孢子呈肾形、椭圆形或卵形,无色、多无分隔。序列比对结果显示,所分离的98株菌分属尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、茄病镰刀菌（Fusarium solani）、层出镰刀菌（Fusarium proliferatum）、木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）和Fusarium nematophilum。致病性分析结果表明,尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌对烟苗具有致病性;48株致病菌中豫南烟区烟草镰刀菌根腐病致病性病原菌为尖孢镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌,以尖孢镰刀菌为主;豫中为尖孢镰刀菌;豫东、豫西为茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌。因此,尖孢镰刀菌为全省烟区重点防控对象,豫南烟区还需加强层出镰刀菌和木贼镰刀菌的防控,豫东、豫西需防范茄病镰刀菌的发生。