水产品中恩诺沙星残留酶联免疫检测体系的简化研究

针对水产品中的恩诺沙星残留,进行了样本添加顺序、竞争反应孵育时间以及洗涤时间的简化和优化。结果表明,顺序饱和法和平衡饱和法b为较好的竞争反应方式,其反应时间可以分别缩短至30、60min;酶标板的单次洗涤时间则可以缩短为3min,重复3次进行。根据简化结果分别建立了2种改进后的检测方法,并以鳗为样本进行了加标检测实验,结果表明,10～200μg/kg添加范围内,平均回收率为65·36%～107·63%,相对标准偏差低于15%,检测时间缩短至1·5h以内。      

水产品中恩诺沙星残留的一步法酶联免疫检测研究

采用过碘酸钠氧化法合成了辣根过氧化物酶(HRP)标记的恩诺沙星抗体,建立一步式直接竞争酶联免疫吸附检测(ELISA)技术,并以鳗鱼为样本进行了恩诺沙星残留的加标检测。结果表明,所制备的酶标记抗体效价达到10000 以上,与同族其他药物及族外药物没有显著的交叉反应;所建立的一步式ELISA 法检测限约为10μg/kg。在10～40μg/kg 浓度范围内,加标鳗鱼样本中恩诺沙星的检测回收率在70% 以上,相对平均偏差小于6%,检测时间缩短到2h 以内,约为传统两步式ELISA 法的一半左右。     

酶联免疫检测法测定水产品中残留氯霉素的研究

研究了水产品中残留氯霉素的检测方法。采用酶联免疫检测法(ELISA)测定鱼、虾类水产品中残留氯霉素含量,结果表明:检出限为0.009ng/mL,变异系数为3.0%,样品测定的相对偏差为3.4%～7.1%,回收率为92.5%～102.0%。在0.025～2.00ng/mL测定范围内呈良好的线性关系,相关系数R=0.9993。用ELISA测定水产品中氯霉素残留量,实验结果令人满意。     

鳗鱼中恩诺沙星残留量的酶联免疫检测方法

运用酶联免疫分析方法测定鳗鱼中恩诺沙星残留。测试曲线线性范围为0.3～10μg/kg,最低检测限为3μg/kg。向样品中分别添加25、50、100μg/kg 3个浓度水平的恩诺沙星, 平均回收率分别为74.5%、76.6%和66.5%,批内变异系数为7.62%～14.31%,批间变异系数为6.03%～7.00%,灵敏度达到0.3μg/kg。特异性试验结果表明与喹诺酮类中的其它药物以及其它类抗生素均无交叉反应。     

酶联免疫吸附法测定水产品中甲基睾酮残留

建立了测定水产品中甲基睾酮(MT)残留的间接竞争酶联免疫吸附法(ic ELISA)。采用琥珀酸酐法衍生化制备半抗原MT17,进一步偶联钥孔血蓝蛋白(KLH)制备免疫原MT17-KLH,经动物免疫成功获取特异性识别MT的多克隆抗体(与其它结构类似物交叉反应小于1%)。优化确立了ic ELISA最佳检测条件:包被原浓度100μg/L,MT多克隆抗体稀释度1/1.2×105,抗体反应时间40 min,药物稀释液为PBS,水产样品经乙腈提取,N-丙基乙二胺吸附剂(PSA)分散固相萃取(DSPE)净化后用于ic ELISA测定。本方法的抑制中浓度IC50为3.48μg/L,检测线性范围为0.77~13.06μg/L。水产样品加标回收率为81.02~103.19%,相对标准偏差为4.46%~13.14%,测定结果与液相色谱-质谱联用法具有良好的相关性(R=0.9971)。本方法可用于水产品中甲基睾酮残留的快速测定。     

恩诺沙星快速酶联免疫吸附法检测试剂盒的研制

目的：研制恩诺沙星酶联免疫吸附法检测试剂盒。方法：采用EDC-NHS 法制备ENR-M-BSA 免疫原和ENR-OVA 检测抗原,用ENR-M-BSA 免疫BALB/C 小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法筛选单克隆抗体并采用间接竞争ELISA 对其进行分析。结果：通过公式计算ENR-M-BSA 摩尔偶联比为15:1,ENR-OVA 摩尔偶联比为7.2:1。筛选出1 株特异性分泌株3E9,其腹水纯化后间接竞争ELISA 测其效价为107,分型试剂盒测试显示此抗体属于IgG1 型;检测限为1ng/mL,线性范围在1～100ng/mL 之间,半量抑制浓度(IC50 值)为10ng/mL,与4 种结构类似物交叉反应均小于1%。结论：此株单克隆抗体可以用来建立恩诺沙星ELISA 检测试剂盒。     

酶联免疫检测试剂盒检测水产品中孔雀石绿的应用研究

利用酶联免疫试剂盒检测水产品中孔雀石绿残留量,研究了国产试剂盒检测性能,并与高效液相色谱法进行了比较。结果表明：孔雀石绿含量在0．5μg／kg,8μg／kg范围时,试剂盒具有良好线性,最低检出限为0．16μg／kg;试剂盒测得孔雀石绿总量的加标回收率在7l％-120％,批内变异系数介于5．61％-18．6％;检测鳜鱼实际样品时,试剂盒和高效液相色谱法定性判定结果一致,定量结果有所差异,试荆盒测得鳜鱼样品中孔雀石绿残留量为37．75μg／kg,高效液相色谱法测得结果为46．29μg／kg,但准确度偏差范围尚符合国家质量监督检验检疫总局《残留分析质量控制》的要求。综上所述,国产酶联免疫检测试剂盒操作方便快速,灵敏度较高,重现性较好,适用于大量样品的快速检测。     

水产品中氯霉素酶联免疫吸附分析法的构建与应用

以氯霉素(CAP)为研究对象,通过系统优化反应条件,构建CAP的间接竞争酶联免疫分析法,并应用于水产品中CAP残留量的检测。氯霉素间接竞争酶联免疫分析方法的最佳工作条件为：0.05μg/孔包被量(CAP-OVA),4℃包被14 h,0.5%脱脂乳粉封闭液,CAP抗体稀释倍数为1∶16 000。结果表明：构建的间接竞争酶联免疫分析方法的灵敏度(IC₅₀)为4.88μg/mL,检测限(IC15)为0.29μg/mL,方法特异性良好,对氯霉素结构类似物和同类抗生素的交叉率低于0.1%。对大黄鱼、缢蛏、牛蛙进行5.0,10.0μg/kg和20.0μg/kg加标回收试验,回收率在83.90%～100.73%范围。本方法的日内和日间变异系数范围为2.28%～6.96%,该检测结果与LC-MS/MS分析结果具有良好的一致。本研究构建的CAP酶联免疫吸附分析法操作简单,灵敏度高,可应用于多种水产品中氯霉素残留量的快速定量检测,同时也为其它小分子危害物的酶联免疫分析方法的构建提供技术借鉴。     

间接竞争酶联免疫吸附测定水产品中的组胺残留

本文通过制备特异性识别组胺衍生物的多克隆抗体,建立了针对水产品中组胺的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。以组胺等为反应原料经三步化学反应合成组胺半抗原,采用活泼酯法将组胺半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联作为包被原和免疫原,用紫外扫描法进行鉴定,结果显示组胺半抗原与载体蛋白偶联成功。通过免疫新西兰大白兔制备组胺抗血清,采用辛酸-硫酸铵方法纯化血清获得了相应的特异性多克隆抗体。通过对ic ELISA系列反应条件的摸索,确定了各组分的最适工作条件。试验结果表明:该方法对于组胺的IC50为0.91 ng/mL,与组氨酸、N-酰基组氨酸、3-甲基组胺等多种类似物及其衍生物均无交叉反应,方法特异性良好;线性检测范围为0.1～8.1 ng/mL,检出限为0.10 ng/mL;按照10、20、30 ng/g的添加量添加组胺至鱼、虾和贝类样品中,测得其回收率为98.9%～130.1%。方法检测的准确性好灵敏度高,适用于实际水产样品中组胺的检测。     

盐酸克伦特罗残留酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的研究

建立了间接ELISA检测盐酸克伦特罗的方法,并对其参数进行了分析计算。在该检测方法中,抗盐酸克伦特罗(CL)抗体最适稀释度为1∶1000,羊抗兔酶联抗体(HRP-IgG)的最适稀释度为1∶1500。该检测方法的检测灵敏度可达0·1046μg/L,生物检测限为1·452μg/L,线性检测范围为7·26~90·75μg/L。     

ELISA法测定热加工食品中的丙烯酰胺

该研究建立了热加工食品中丙烯酰胺的间接竞争ELISA检测方法.首先用戊二醛法合成丙烯酰胺-BSA免疫抗原,注入兔体内以产生抗丙烯酰胺多克隆抗体.结果显示,在包被抗原为1.5μg/mL,抗体稀释度为1∶16000倍的优化条件下,间接ELISA法检测范围为50μg/L～1280μg/L,IC50为检测限为350μg/L,最低检测限为50μg/L.加标回收率为92.6%～95.5%.该检测方法准确快速,特异性强,适用于热加工食品中丙烯酰胺的快速检测.     

一种喹诺酮类药物的酶联免疫快速检测试剂盒的研制

利用酶联免疫技术研制了一种快速检测鱼肉中的喹诺酮类药物试剂盒,经过测试,该试剂盒对鱼肉样本中氧氟沙星、环丙沙星、氨氟沙星等3种喹诺酮类药物的检测限为1μg/kg,批内、批间相对标准偏差均小于10%;稳定性测试结果表明,试剂盒能够在4℃条件下保存12个月,37℃条件下保存7d。喹诺酮类药物单克隆抗体与氧氟沙星、环丙沙星、氨氟沙星的交叉反应率均为100%。该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。     

一种叶酸的酶联免疫快速检测试剂盒的研制

利用酶联免疫技术研制一种快速检测食品中的叶酸试剂盒,经过测试,该试剂盒对牛奶样本的检测限为10.0μg/L,批内、批间相对标准偏差均小于10%;稳定性测试结果表明,试剂盒能够在4℃保存12个月,37℃保存7d。叶酸单克隆抗体与二氢叶酸、四氢叶酸的交叉反应率均小于4%。该方法准确,可靠,使用简便,适合大量样品的现场检测。      

呋喃唑酮代谢物间接竞争酶联免疫检测方法的研究

建立了呋喃唑酮代谢物间接竞争酶联免疫检测法。用活化酯法将卵清蛋白和半抗原连接成为包被原,对包被原和单克隆抗体的稀释倍数,封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗孵育时间和显色反应时间进行优化,同时通过灵敏度、特异性、精密度和准确度等指标进行方法学评价。结果显示,最佳条件为:包被原和单克隆抗体稀释倍数分别为800倍和6 400倍,封闭液是1%脱脂乳,竞争时间是60 min,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗孵育时间是45 min,显色时间是15 min。通过建立的标准曲线计算得到线性方程是Y=-0.253X+1.336(R2=0.995),IC50是2.015 ng/m L,线性范围是0.131~30.911 ng/m L,空白猪肉添加回收率是84.8%~90.3%,批内和批间变异系数分别为3.3%~4.1%和4.6%~6.7%。此方法特异性强,准确性、精密度和重现性均良好,可用于动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的快速筛查。     

基于单克隆抗体的食品中乳酸链球菌素酶联免疫方法

建立了乳酸链球菌素的酶联免疫检测方法。以乳酸链球菌素A偶联牛血清白蛋白作为抗原制备了单克隆抗体,该抗体能等同识别乳酸链球菌素A和Z,对其他多肽类抗生素无交叉反应。所建立的乳酸链球菌素检测方法 IC_(50)为0.49μg/mL,线性范围为0.05μg/mL~5.4μg/mL(y=-0.12ln(x)+0.385,R~2=0.98)。该方法适用于热加工样品的检测,前处理简单,整个检测过程仅需60min,为乳酸链球菌素速测提供了有力的技术手段。     

酶联免疫吸附技术和噬菌体表面展示技术在食品检测中的应用

介绍食品中可能存在的一些有害小分子物质,综述酶联免疫吸附技术和噬菌体表面展示技术在检测食品有害小分子物质中的应用,展望这两种技术目前存在的不足与今后发展的方向.     

双抗夹心酶联免疫吸附法检测荞麦过敏蛋白

提取制备荞麦过敏原蛋白（TBt）并免疫动物,分别制备鼠多克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了双抗夹心酶联免疫吸附检测法（ELISA）用于检测食品中的荞麦过敏原。SDS-PAGE结果表明,纯化的TBt纯度达到98%以上,鼠抗血清效价为1∶6400。建立的双抗夹心ELISA法对荞麦过敏原蛋白的最低检测限为0.16μg/m L,线性范围为0.16¹6μg/m L。并采用建立的双抗夹心ELISA法对市场出售的15种食品中荞麦过敏成分进行了检测。结果显示,该方法对绝大多数食品中的荞麦过敏原都有很好的特异性及灵敏性,说明该法可用于食物过敏原的诊断及食品中微量荞麦过敏成分的检测。      

双抗夹心酶联免疫吸附法检测荞麦过敏蛋白

提取制备荞麦过敏原蛋白(TBt)并免疫动物,分别制备鼠多克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了双抗夹心酶联免疫吸附检测法(ELISA)用于检测食品中的荞麦过敏原。SDS-PAGE结果表明,纯化的TBt纯度达到98%以上,鼠抗血清效价为1∶6400。建立的双抗夹心ELISA法对荞麦过敏原蛋白的最低检测限为0.16μg/m L,线性范围为0.16~16μg/m L。并采用建立的双抗夹心ELISA法对市场出售的15种食品中荞麦过敏成分进行了检测。结果显示,该方法对绝大多数食品中的荞麦过敏原都有很好的特异性及灵敏性,说明该法可用于食物过敏原的诊断及食品中微量荞麦过敏成分的检测。     

呋喃它酮代谢物间接竞争酶联免疫检测方法的建立

目的建立呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(5-morpholine-methyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)间接竞争酶联免疫检测法。方法通过衍生化反应制备了人工抗原CPAMOZ并用活化酯法将其与鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)连接成为包被原CPAMOZ-OVA。对包被原和单克隆抗体的最佳工作浓度、封闭液浓度、竞争时间、辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗(horseradish peroxidase labelled goat antimouse Ig G conjugate,HRP-Ig G)、孵育时间和显色反应时间进行优化,并对方法灵敏度、特异性、精密度和准确度进行方法学评价。结果最优条件下,包被原和单克隆抗体稀释倍数分别为500倍和2000倍,封闭液浓度为2%,竞争时间为30 min,二抗孵育时间为30 min,显色时间为15 min。所建立标准曲线的对应线性方程是Y=-0.439X+0.670(r~2=0.992),IC_50为2.439 ng/m L,线性范围为0.506~11.765 ng/m L,回收率为86.7%~90.1%,批内和批间变异系数分别为1.4%~5.8%和2.1%~4.9%。结论该方法特异性强,准确性、精密度和重现性良好,可用于对AMOZ的快速筛查。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇酶联免疫检测方法的建立

应用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体12D1建立了竞争间接ELISA方法,用于检测小麦、玉米中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),最低检出限为20ng/mL,检测范围为20￣460ng/mL。用蒸馏水提取掺合DON(250￣4000ng/g)的小麦样品,回收率为82.1%￣96.6%,变异系数为0.6%￣7.1%。