生孢梭菌半固体培养基菌落计数方法的研究

目的 :建立使用半固体培养基进行生孢梭菌菌落计数的方法,使菌落计数结果能够接近最大活菌数。方法 :接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐培养基中,30~35℃培养18~24小时,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释生孢梭菌菌液至与标准比浊管相同的浓度,用10倍稀释法分别稀释至1×10-6、1×10-7、1×10-8三个稀释级备用。分别配制琼脂浓度为0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%的6种硫乙醇酸盐培养基,分别取三个稀释级的菌液1m L接种至配制好的上述6种硫乙醇酸盐培养基中,同时在胰酪大豆胨琼脂培养基上接种等量菌液,并放入厌氧袋中,将接种好的上述培养基至35℃培养18~24小时,进行菌落计数并比较结果。结果 :半固体培养基计数法比厌氧袋计数法效果好,使用琼脂浓度为0.5%的硫乙醇酸盐培养基,30~35℃培养18小时,菌落计数最多,最接近最大活菌数。结论 :生孢梭菌半固体培养基计数法适用于生孢梭菌计数。     

硫乙醇酸盐培养基中的刃天青的作用分析

目的分析刃天青在硫乙醇酸盐培养基中的作用。方法按2000版《中国生物制品规程》中培养基灵敏度的测定方法,将0.1%刃天青以不同量加入硫乙醇酸盐培养基中,用厌氧菌株生孢子梭状芽胞杆菌、需氧菌株短芽胞杆菌及乙型溶血性链球菌分别进行不同含量刃天青、煮沸驱氧与未驱氧的灵敏度比较。结果不同刃天青含量与未加刃天青、煮沸驱氧与未驱氧的硫乙醇酸盐培养基的灵敏度无明显差异。结论用以上3个标准菌株检测不同刃天青含量的硫乙醇酸盐培养基的灵敏度,其指示剂的作用不明显。     

一株野生脉孢菌的鉴定及其纤维素乙醇发酵潜力研究

鉴定了一株野生型脉孢菌并研究了使用玉米芯为原料时的纤维素乙醇发酵潜力,对其形态特征和生理生化特性研究表明,该菌与脉孢菌属(Neurospora)菌株的特征一致;对其18S-28S rDNA的ITS区段进行序列分析,通过构建系统进化树和分析系统发育关系,确定该菌为脉孢菌属(Neurospora)的间型脉孢菌(Neurospora intermedia)。该脉孢菌能在以玉米芯粉和葡萄糖为碳源的液体培养基中快速生长,从接入孢子到形成有乙醇发酵能力的菌丝只需48h的时间。以10g·L-1的玉米芯配成培养基,分别进行脉胞菌、酿酒酵母直接乙醇发酵和脉孢菌与酿酒酵母共发酵试验。结果表明脉孢菌对玉米芯进行直接乙醇发酵时,乙醇产量为4.37g·L-1(产醇底物还包括培养菌丝时未用完的部分碳源),用酵母菌进行直接乙醇发酵时,乙醇产量仅为0.18g·L-1。而当培养脉孢菌菌丝后接入酿酒酵母同时糖化发酵时,得到的乙醇浓度提高到5.53g·L-1,因而,使用脉胞菌与酿酒酵母的同时糖化发酵更有利于玉米芯的纤维素乙醇发酵。     

成品硫乙醇酸盐流体培养基用于无菌检查效果的评价

目的对成品硫乙醇酸盐流体培养基用于无菌检查的外观、有效性及稳定性进行评价。方法选用1批成品硫乙醇酸盐流体培养基,以3个月为1个时间节点,连续进行5次无菌检查,每次试验采用3个不同厂家的生物制品。结果使用该批培养基进行5个时间节点的无菌检查结果均合格,且外观良好。结论该成品培养基用于无菌检查具有良好的外观、有效性和稳定性,完全可取代自行配制的培养基进行无菌检查,提高工作效率及减少人为误差。     

硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度的评价

目的对用于无菌检查的硫乙醇酸盐流体培养基的灵敏度进行评价。方法采用乙型溶血性链球菌(Streptococcus hemdytis-β)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和生孢梭菌(Clostridium sporogenes)6个质控菌作为评价菌株,对92批国产和进口的硫乙醇酸盐流体培养基脱水商业化成品进行灵敏度评价,以6个菌株检测结果均能达到的灵敏度判定为该培养基对6个菌株的总体灵敏度。结果所有培养基对短芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和生孢梭菌的灵敏度均达到1¹0 cfu水平,有2批培养基对枯草芽孢杆菌的灵敏度未达到110 cfu水平,有2批培养基对枯草芽孢杆菌的灵敏度未达到1¹0 cfu水平;对乙型溶血性链球菌的促生长能力差异较大,灵敏度达到110 cfu水平;对乙型溶血性链球菌的促生长能力差异较大,灵敏度达到1¹0 cfu水平的比例仅为65%;金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌检查92批培养基的灵敏度的差异无统计学意义(P均>0.05);金黄色葡萄球菌与乙型溶血性链球菌检查92批培养基的灵敏度差异有统计学意义(P均<0.05)。结论用乙型溶血性链球菌检测培养基的灵敏度表现出显著差异,部分国产培养基对乙型溶血性链球菌的灵敏度较差,需引起药品检验工作者高度重视。     

氯丁橡胶中游离硫的测定

浸泡液的配制 按体积比3:1配制丙酮-乙醇混合液。在500毫升丙酮-乙醇混合液中加入1克硫,在室温下放置2天,制得被硫饱和了的丙酮-乙醇混合液,过滤,除去未溶解的硫,即得浸泡液。     

我国生物制品国家标准的历史沿革

<正>《中国药典》三部是对生物制品质量标准和检定方法的技术规范,是生物制品生产、供应、使用和监管共同遵守的法定依据。《中国药典》三部的前身是《中国生物制品规程》,自第一部生物制品国家标准《生物制品法规》(1952年版)颁布以来,历经《生物制品制造及检定规程》(1959年版),《生物制品规程》(1979年版),《中国生物制品规程》(1990年版、     

两种微生物对山西晋城中高硫煤脱硫最佳工艺条件研究

燃烧含硫煤炭会释放硫氧化物,导致雾霾、酸雨等环境问题,因此,煤中硫的降低或脱除至关重要。选用能够降解多环芳烃的恶臭假单胞菌和能够降解长链烷烃的茫崖诺卡氏菌对含硫量为2.66%的山西晋城中高硫煤进行微生物脱硫,通过单因素实验和正交实验探究了煤样粒度、煤浆质量浓度、脱硫时间、细菌接种量、培养基pH和培养温度对微生物脱除煤中硫的影响。利用红外光谱仪、X射线衍射仪和扫描电镜对原煤和脱硫后煤样进行了分析表征。结果显示恶臭假单胞菌最佳脱硫条件是：煤样粒度0.075 mm～0.125 mm,煤浆质量浓度0.008 g/mL,培养时间10 d,细菌接种量0.2 mL/mL,培养基pH 6.0、培养温度30℃。茫崖诺卡氏菌的最佳脱硫条件除了培养基pH为7.0与恶臭假单胞菌培养基pH不一样外,其他条件均一致。恶臭假单胞菌和茫崖诺卡氏菌在最佳脱硫条件下的脱硫率分别为38.0%和39.8%,脱硫后煤样中的全硫质量分数分别为1.65%和1.60%,表明经微生物脱硫后煤样含硫量均符合发电用煤S4等级(1.50%t)≤2.00%)。与原煤相比,脱硫后煤样的黄铁矿峰强度有所降低,部...     

粘质沙雷氏菌G1利用玉米浆干粉和磷酸氢二铵生产2,3-丁二醇的研究

研究了几种工业氮源对粘质沙雷氏菌G1发酵生产2,3-丁二醇的影响,在确定玉米浆干粉为氮源的基础上,利用Plackett-Burman(PB)实验和响应面法(RSM)实验对玉米浆干粉和磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]的浓度进行了优化,确定优化培养基(g·L-1)为:蔗糖90,玉米浆干粉20.32,(NH4)2HPO47.21,NaAc 4,柠檬酸钠14,MgSO40.5,Fe-SO40.02,MnSO40.01。并以此优化培养基进行了摇瓶和分批补料发酵,结果表明,摇瓶发酵中,90g·L-1的蔗糖最终被转化成43.06g·L-1的2,3-丁二醇;分批补料发酵中,2,3-丁二醇浓度为128.28g·L-1,产率为2.67g·L-1·h-1,转化率为0.48g·g-1蔗糖。以玉米浆干粉和(NH4)2HPO4为氮源,2,3-丁二醇浓度较高,培养基的成本大幅降低,为工业化生产奠定了基础。     

高通量测序技术辅助筛选脱硫菌

将脱硫菌的筛选与新一代高通量测序技术相结合,探索脱硫菌筛选的新方法,为生物甲烷的高值化利用提供技术支持。实验将富含硫细菌的环境土样及经过培养基富集培养后的液样分别进行16S rDNA V6区的高通量测序,并分析了物种组成和丰度、Alpha多样性和菌群结构。结果表明,高通量测序的平均数据利用率达99.177%,测序量能够充分反映样品在该区域细菌的群落组成和结构。取自环境的土壤样品物种组成丰富,含有Pseudomonadales(假单胞菌目)、Rhizobiales(根瘤菌目)、Desulfuromonadales(除硫单孢菌目)、Desulfobacterales(脱硫杆菌目)、Acidithiobacillales(酸硫杆状菌目)等脱硫菌目。经过培养基富集后,菌群多样性显著降低,主要组成菌为Pseudomonadales(假单胞菌目)和Rhizobiales(根瘤菌目)。通过高通量测序技术,能够在筛选脱硫菌之前就了解实验样品的菌群结构和组成,为有针对性地设计筛选脱硫菌实验提供了一种新的方法。     

中药柴苓护肝颗粒剂的微生物限度检查研究

目的:建立中药柴苓护肝颗粒剂微生物限度检查方法并对其进行微生物限度检查。方法:按2015年版《中国药典》对口服固体制剂微生物检查对象,包括需氧菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉)、霉菌和酵母菌(白色念珠菌和黑曲霉)、控制菌(大肠埃希菌),采用平皿法和控制菌检查法进行微生物限度检查方法学研究,在此基础上,对柴苓护肝颗粒剂进行微生物限度检查。结果:本品的需氧菌总数可用平皿法(1︰20供试液,1 m L/皿)检查,霉菌和酵母菌总数可用平皿法(1︰10供试液,1 m L/皿)检查,控制菌用大肠埃希菌检查法(胰酪大豆胨液体培养基体积不少于100 m L)检查;供试品中的需氧菌总数约为240 cfu,不含霉菌和酵母菌及大肠埃希菌。结论:本文所建立的柴苓护肝颗粒剂的微生物限度检查方法可用于该产品的微生物检查;经检验,三批中试产品微生物限度检查均符合药典规定,说明该医院的生产条件符合相关规定的要求。     

注射用水生产中的微生物污染及防护

注射用水是配制注射剂或胃肠外用药品的主要溶媒,水质的要求十分严格,除应符合一般蒸馏水或纯水的质量标准外,美国药典还规定注射用水、灭菌注射用水、灭菌冲洗用水、抑菌注射用水、灭菌吸入药品用水不仅要求无热原,而且内毒素还要符合有关规定。中国药典规定注射用水必须用蒸馏水制得,而美国药典则规定用蒸馏法或反渗透法制备。     

在无血清无蛋白培养基中培养Vero细胞

目的开发在无血清无蛋白培养基(PF)中培养Vero细胞的技术。方法在DMEM/F12培养基中添加酵母提取物和大豆水解物,配制成无血清无蛋白培养基。使用配制好的无血清无蛋白培养基,分别在玻璃、聚乙烯醇缩丁醛(PVB)和聚苯乙烯(PS-TC)培养面上培养Vero细胞,观察细胞生长情况,并绘制细胞生长曲线,以含血清培养基BM为对照。结果与BM培养基比较,在玻璃培养面上,PF培养基不支持Vero细胞生长和分裂;在PVB培养面上,PF培养基支持Vero细胞生长,但不支持分裂;在PS-TC培养面上,PF培养基支持Vero细胞的生长和分裂。结论在PS-TC培养面上,PF培养基适合培养Vero细胞。     

水提醇沉法提取昭通野生黄丝菌中的多糖

以云南省昭通市山上的野生鲜黄丝菌为原料,去除泥土,阴干,捣碎研磨,过筛,采用水提醇沉法提取野生黄丝菌干粉中的多糖,粗多糖经Sevage法(氯仿-正丁醇体积比为4︰1)脱蛋白,乙醇沉淀,黄丝菌多糖纯品干燥,提取率约为0.95%。     

二硝基硫氰代苯的配制方法

二硝基疏氰代苯可以配制成粉剂、可湿性制剂与乳剂等方式使用。 1.15％可湿性粉剂依以下比例经过加工磨制而成: 二硝基硫氰代苯15％二硝基硫氰代苯15％氧氯化铜 8％或纸浆废液干粉10％紙浆废液干粉 10％陶土 75％陶土 67％ 2.2.5％粉剂依以下比例磨制而成:     

生物制品洁净厂房的特点与设计

生物制品是用微生物(细菌、噬菌体、立克次体、病毒)、微生物代谢产物、寄生虫、动物毒素、人或动物的血液或组织等直接制备或用现代生物技术、化学方法制成,作为预防、高疗、诊断特定传染病的制剂。我国的《药品生产质量管理规范》(GMP)于1988年颁布,对药品的生产环境提出了相应于工艺的不同洁净要求,生物制品是药品中的特殊制品,由于它不能像大部份水针制药生产那样最后可以进行一次灭菌,故在整个生产工艺全过程中,对无菌条件的要求是很严格的。空气洁净技术应用于生物制品生产工     

在合成气生产中使用CO_2的方法

正本发明涉及一种用于从含有H_2、CO和CO_2的生物合成气(112)生产生物制品(115)例如沼气、生物甲醇、生物乙醇、生物柴油、生物汽油或者塑料的方法,此生物合成气通过融合富氢合成气流(109)形成,在气流重整器(107)中通过转化富甲烷气体     

硫乙醇酸盐流体培养基的特点及问题分析

文章对硫乙醇酸盐流体培养基的成分及特点进行归纳,对该培养基在使用中出现的问题进行小结,并对硫乙醇酸盐流体培养基在药品无菌检查过程中的局限性进行了分析讨论。     

三磷酸腺苷生物发光快速微生物检测法在疫苗中间品无菌试验中的应用

目的探讨三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)生物发光快速微生物检测法应用于疫苗中间品无菌试验的可行性。方法测定各种培养基与疫苗培养上清液(不含细胞碎片)的本底值,并确定阳性限值;确定测试仪的检测限及线性范围;考察非细菌来源的ATP对测定值的影响;筛选适宜培养基;比较ATP生物发光法与无菌试验检测结果的一致性。结果除199培养基外,其他培养基的RLU本底值均低于205,阳性限值为500;测试仪的最低检测限为10-15mol/L,在10-15～10-6mol/L范围内,线性关系良好;采用增菌法进行试验,可不考虑非细菌来源的ATP的影响;筛选出的适宜培养基为硫乙醇酸盐流体培养基(不含琼脂);ATP生物发光法和无菌试验检测结果的阳性符合率为80%,2种方法各有1个样品另一种方法未检出。结论 ATP生物发光法操作简便,应用范围广泛,可应用于疫苗中间品的无菌试验。     

对杀菌剂二硫氰基甲烷分解的测定

二硫氰基甲烷是一种优异的非氧化性广谱杀菌灭藻剂,对各种真菌、藻类和细菌,包括好气菌和厌气菌都有良好的杀灭效果,广泛应用于工业循环水及油田注水处理中。它的分子结构式为SCN—CH_2—SCN。据研究,二硫氰基甲烷在水中会缓慢分解,产生新生态硫氰基。新生态硫氰基能通过与Fe~( )结合而阻断微生物呼吸过程中的电子转移,从而直接杀死微生物。