南极磷虾多肽的组成及其抗氧化与A C E抑制活性

以冷冻南极磷虾为原料,经碱溶酸沉法与酶解法联用制备南极磷虾多肽,采用紫外-可见光谱、红外光谱、凝胶色谱和氨基酸分析解析了多肽的组成和结构,并重点评价了多肽的抗氧化活性和血管紧张素I转化酶（angiotensin-I converting enzyme,ACE）抑制活性。结果表明：采用碱溶酸沉法与碱性蛋白酶酶解法联用制备南极磷虾多肽,水解度和肽得率可达到（17.83±3.73）%和（57.20±0.24）%。南极磷虾多肽的紫外最大特征吸收波长在273.5 nm;多肽在3 390.84、2 917.66、1 648.36、1 547.59 cm-1和 1 402.21 cm-1处具有红外特征吸收峰;多肽的分子量主要在189 Da～6 500 Da范围内（98.93%）,其中,451 Da～1 450 Da占比最高（41.00±0.05）%;多肽的氨基酸组成理想,符合联合国粮农组织/世界卫生组织规定的标准。南极磷虾多肽具有显著的还原能力和良好的清除DPPH·、ABTS+自由基、·OH的能力,自由基清除IC50值分别为5.65、0.17、4.46 mg/mL;此外,多肽还具有良好的ACE抑制活性,当多肽浓度为0.5 mg/mL时,ACE抑制率为（55.91±2.63）%。     

优选南极磷虾蛋白肽抗氧化活性组分

目的制备南极磷虾抗氧化肽,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽成分。方法采用脱脂、酶解、超滤等手段制备南极磷虾抗氧化肽;以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、抗氧化能力指数3个抗氧化指标和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)活力2个酶活力指标为评价指标,优选出抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分;基于G-25凝胶层析技术对抗氧化活性最好的南极磷虾肽组分进行分离纯化,进一步基于电子顺磁共振(electron paramagnetic resonance,EPR)方法测定洗脱后各峰的DPPH自由基清除率,得到抗氧化活性最好的南极磷虾抗氧化肽组分。结果通过抗氧化指标测定,截留分子量3～10 KDa的肽的DPPH自由基清除率最高,为(30.10±1.10)%,截留分子量3 KDa的南极磷虾肽的ABTS清除能力和抗氧化指数较好,则IC50值为(0.74±0.08) mg/mL、氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity, ORAC)值为6.39±0.21;通过酶活力指标测定,截留分子量3 KDa的肽的SOD活力和CAT活力最好,分别为(45.7±0.13)U/mg和(17.1±0.19)U/mg蛋白质。对截留分子量3KDa和3～10KDa的南极磷虾肽进行G-25分离纯化后,测定各组分的DPPH自由基清除率,可知截留分子量3～10KDa的F2-2峰清除率最好,为(51.55±1.54)%。结论基于EPR方法优选出分子量为3～10 KDa的南极磷虾肽的F2-2组分的DPPH自由基清除率最高。     

南极磷虾蛋白水解产物超滤组分的抗氧化活性评价

目的 对南极磷虾(Euphausia superba)蛋白水解产物超滤组分进行系统的抗氧化活性评价。方法 利用胃蛋白酶和胰蛋白酶制备南极磷虾蛋白水解物(antioxidant hydrolysate of Euphausia superba protein, EPAH), 利用超滤技术制备抗氧化组分。以自由基清除实验、脂质过氧化抑制实验、体外DNA氧化损伤保护实验以及氧化损伤张氏肝细胞(Chang liver)模型进行抗氧化组分的活性研究。结果 利用超滤技术将EPAH按照分子量(molecular weight, MW)分为三个肽组分EPAH-I(MW<3.5 KDa)、EPAH-II(3.5 KDa5 KDa)。其中, EPAH-I显示出强的DPPH自由基和羟基自由基清除活性、脂质过氧化抑制作用和质粒DNA的氧化损伤保护作用以及对H2O2氧化损伤的张氏肝细胞显示出较强的保护作用。在5.0 mg/mL浓度下, EPAH-I可将氧化损伤张氏肝细胞(Chang liver)的活力由模型组的(49.51±4.18 )%显著提升至(70.58±4.52)% (P<0.05); 超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力分别提高至(176.34±10.92) U/mg prot和(35.83±2.55) U/mg prot, 活性氧自由基含量降至2.76±0.18%, 膜脂质氧化产物丙二醛的含量降至(5.75±0.16) nmol/mg prot。结论 本实验制备的南极磷虾抗氧化组分(EPAH-I)具有显著的生物活性, 可用于抗氧化相关功能产品的研发。     

南极磷虾蛋白肽的抗氧化活性及稳定性研究

目的：分析探讨南极磷虾蛋白肽的抗氧化活性及稳定性。方法：通过测定自由基清除能力以及脂质过氧化抑制能力,系统评价南极磷虾蛋白肽的抗氧化活性,并考察温度、酸碱度、模拟胃肠道消化等条件对其稳定性的影响。结果：南极磷虾蛋白肽对DPPH自由基、ABTS自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基均具有较强的清除作用,IC₅₀分别为5.68、0.32、9.54、1.68 mg/mL;同时,南极磷虾蛋白肽对亚油酸、蛋黄卵磷脂等脂质过氧化具有良好的抑制作用。南极磷虾蛋白肽在温度>60℃条件下,抗氧化活性显著下降(P<0.05);在中性及弱酸性条件下较稳定,在碱性条件下抗氧化活性急剧下降(P<0.05);经体外模拟胃肠道消化后仍能保持较高的抗氧化活性。结论：南极磷虾蛋白肽具有较好的抗氧化活性,其相关产品的加工贮藏应避免高温、强酸、强碱条件的影响。研究结果可为南极磷虾蛋白肽的品质保持和相关高值产品开发提供科学指导。     

南极磷虾磷脂的分离纯化及其对核桃油的氧化稳定性的影响

采用高压溶剂萃取法提取南极磷虾油,建立基于蒸汽光散射检测器(ELSD)的高效液相色谱法(HPLC)对南极磷虾油中的磷脂组分进行分离鉴定,结果表明南极磷虾油中主要含有卵磷脂和脑磷脂两种磷脂组分。采用Schaal烘箱法研究了南极磷虾油、南极磷虾卵磷脂和脑磷脂以及两种磷脂组分与赖氨酸复配对核桃油氧化稳定性的影响。结果表明,南极磷虾油对核桃油具有抗氧化能力,0.25%的南极磷虾油添加量就能较好地抑制核桃油过氧化值和酸价增加,而且随着浓度增加抗氧化能力增强。纯化出来的南极磷虾卵磷脂和脑磷脂都具有较强的抗氧化活性,尤其是脑磷脂及脑磷脂与赖氨酸的复配对核桃油氧化稳定性的提高具有显著的效果。     

三种低氟南极磷虾肽的ACE抑制作用及抗氧化活性研究

以高效回收脱脂磷虾粉中的蛋白质为出发点,以低氟南极磷虾肽的制备为切入点,旨在通过探究不同磷虾肽的基本性质及体外功能活性,为磷虾肽的应用奠定理论基础。研究以脱脂南极磷虾粉为原料,以三种蛋白酶为水解酶,经酶解、脱氟、脱盐、干燥制备得到三种低氟磷虾肽。通过对三种磷虾肽的得率、基本组成、分子量分布及红外光谱进行分析,评估三种磷虾肽制备工艺的可行性及产物的基本性质。通过对三种产物的体外ACE抑制作用及抗氧化活性进行测定,比较三种磷虾肽的体外功能活性。结果表明,三种磷虾肽的回收率高、蛋白质含量高、分子量集中分布在200~2000 u范围内;中性蛋白酶水解肽和碱性蛋白酶水解肽的ACE抑制作用显著优于胰蛋白酶水解肽(p<0.05),胰蛋白酶水解肽的抗氧化活性显著高于中性蛋白酶水解肽和碱性蛋白酶水解肽(p<0.05);磷虾肽的体外活性与其氨基酸组成、分子量分布和二级结构相关。      

南极磷虾磷脂微胶囊制备工艺优化及表征

为提升南极磷虾磷脂稳定性与高值化利用效果,采用壳聚糖与麦芽糊精复配为混合壁材,南极磷虾磷脂为芯材,以南极磷虾磷脂包封率为指标,以芯壁比、固形物含量、进风温度、进料速度为实验因素,设计4因素3水平正交实验优化南极磷虾磷脂微胶囊制备工艺,并检测南极磷虾磷脂微胶囊的理化性质。结果表明：当芯壁比为1:5、固形物含量5%、超声时间10 min、进风温度170℃、进料速度8 mL/min时,南极磷虾磷脂微胶囊包封率达到90.38%,在此条件下得到的南极磷虾磷脂微胶囊水分含量为1.43%,体积密度为0.26 g/mL,堆积密度为0.33 g/mL,流动性为19.60。微观及红外光谱表征表明,南极磷虾磷脂微胶囊颗粒大小较为均一,形状近球状,表面光滑无破裂。体外模拟胃肠道消化结果表明,微胶囊芯材在胃中的释放率非常低,而在肠道中的释放率高达93.5%,表明磷虾磷脂微胶囊化后稳定性提高,并可通过缓释作用提升其高值化利用效果。     

枯草芽胞杆菌发酵制备南极磷虾肽及其体外抗氧化活性研究

采用枯草芽胞杆菌发酵脱脂南极磷虾粉,制备南极磷虾蛋白肽,通过单因素和正交试验对发酵条件进行优化,并对所得粗多肽进行体外抗氧化活性测定。结果表明,在保障多肽得率的基础上,高水解度的最佳发酵条件为发酵时间3 d、料液比3∶100（g∶mL）、初始接种量1.5×10⁸ CFU/mL,高蛋白回收率的最佳发酵条件为发酵时间3 d、料液比1∶100（g∶mL）、初始接种量1.5×10⁸ CFU/mL。结果表明,2种发酵条件下所得的南极磷虾粗多肽均具有良好的抗氧化活性,其中高水解度发酵组的总抗氧化能力更强,高蛋白回收率发酵组的自由基清除率更强。综上,利用枯草芽胞杆菌发酵制备具有良好抗氧化性的南极磷虾蛋白肽是可行的,为南极磷虾的精深加工和综合利用提供参考。     

南极磷虾抗氧化多肽制备的研究

以清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基和羟基自由基能力为指标,筛选制备南极磷虾抗氧化多肽的水解条件,得到高效的抗氧化多肽制品。结果表明:胰蛋白酶、中性蛋白酶复合,酶解南极磷虾6h后得多肽的抗氧化能力最强,超氧阴离子自由基的清除率达到11.5%,DPPH自由基的清除率达到72.7%,羟基自由基的清除率达到84.8%。经超滤分离,分子量范围在5¹0ku的多肽表现出较强的清除三种自由基的能力。对其进行tricine-SDS-PAGE电泳,结果显示电泳图谱上出现了两个条带。      

南极磷虾肽制备工艺优化及抗氧化测定

目的:优化南极磷虾肽的提取工艺。方法:选取料液比、加酶量、温度、pH以及时间5因素,在单因素实验的基础上采用L9(34)正交实验,计算各组酶解液的水解度。结果:正交分析软件得到木瓜蛋白酶对磷虾最佳的酶解条件为:料液比1:2,加酶量3000U/g,酶解温度55℃,酶解pH7.0,酶解时间3h,验证实验测得最优条件下水解度达24.73%。结论:酶解液经浓缩、喷雾干燥后,得到淡黄色具虾香味的粉末,得率6.48%,多肽含量达87.32%,通过与维生素E的比较,表明其在抗氧化方面具有良好的清除自由基的能力,说明该方法制备得到的南极磷虾肽在实际生产中有较为广阔的应用前景。      

南极磷虾肽制备工艺优化及抗氧化测定

目的:优化南极磷虾肽的提取工艺。方法:选取料液比、加酶量、温度、pH以及时间5因素,在单因素实验的基础上采用L9(34)正交实验,计算各组酶解液的水解度。结果:正交分析软件得到木瓜蛋白酶对磷虾最佳的酶解条件为:料液比1:2,加酶量3000U/g,酶解温度55℃,酶解pH7.0,酶解时间3h,验证实验测得最优条件下水解度达24.73%。结论:酶解液经浓缩、喷雾干燥后,得到淡黄色具虾香味的粉末,得率6.48%,多肽含量达87.32%,通过与维生素E的比较,表明其在抗氧化方面具有良好的清除自由基的能力,说明该方法制备得到的南极磷虾肽在实际生产中有较为广阔的应用前景。     

南极磷虾抗氧化多肽制备的研究

以清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基和羟基自由基能力为指标,筛选制备南极磷虾抗氧化多肽的水解条件,得到高效的抗氧化多肽制品。结果表明:胰蛋白酶、中性蛋白酶复合,酶解南极磷虾6h后得多肽的抗氧化能力最强,超氧阴离子自由基的清除率达到11.5%,DPPH自由基的清除率达到72.7%,羟基自由基的清除率达到84.8%。经超滤分离,分子量范围在5~10ku的多肽表现出较强的清除三种自由基的能力。对其进行tricine-SDS-PAGE电泳,结果显示电泳图谱上出现了两个条带。     

南极磷虾脂质的亚临界提取及磷脂分析

研究了南极磷虾脂质的亚临界丁烷提取工艺。测定了南极磷虾脂质的酸值、过氧化值、氟含量、生育酚含量、虾青素含量、磷脂含量及磷脂种类组成、脂肪酸组成。结果表明,通过单因素试验确定了亚临界丁烷提取南极磷虾脂质的较佳工艺条件为:动态提取时间120 min(单次提取时间30min、提取4次)、提取压力1.0 MPa、提取温度40℃;在较佳工艺条件下南极磷虾脂质提取率为21.39%;提取的南极磷虾脂质的酸值(KOH)10.6 mg/g,过氧化值3.01 meq/kg,虾青素含量248.4mg/kg,生育酚含量67.7 mg/kg,磷脂含量28.68%,其中磷脂中磷脂酰胆碱占71.20%;磷脂酰胆碱中脂肪酸组成与甘三酯的基本一致,但磷脂酰胆碱中EPA和DHA含量明显高于甘三酯的。     

南极磷虾肽的脱氟工艺和体外抗氧化作用

以南极磷虾为原料,选取超声水洗时间、Ca(OH)2添加量、反应温度、反应时间进行单因素试验,利用正交试验法确定了南极磷虾酶解液脱氟的最佳工艺,即超声水洗时间20 min、Ca(OH)2添加量0.6%、反应温度40℃、反应时间60 min,此时酶解液氟含量为24.78 mg/kg;此外,分析了南极磷虾肽的分子量分布、氨基酸组成及抗氧化活性。结果表明:南极磷虾肽的分子质量小于1 000 U的组分高达93.233%,氨基酸组成丰富,尤其富含谷氨酸、天冬氨酸及其酰胺;南极磷虾肽的抗氧化能力与其浓度呈现一定的依赖性,其清除DPPH·、·OH和O2-·的IC50值分别是2.12, 5.72和16.43 mg/mL,同时具有一定的还原力,说明南极磷虾肽具有良好的抗氧化能力,为南极磷虾肽应用于相应的保健食品、药品等领域奠定了理论和应用基础。     

酶辅助提取南极磷虾磷脂及脂质组学研究

南极磷虾中含有丰富的磷脂资源,是磷脂的生物富集库。采用蛋白酶辅助Bligh & Dyer法提取南极磷虾磷脂技术,研究温度、pH值、时间以及酶的种类对南极磷虾磷脂提取率的影响;采用气相色谱法研究磷脂脂肪酸链结构组成,建立亲水色谱串联质谱法（HILIC-QTOF/MS）法对磷脂进行定量和鉴定。研究发现胰蛋白酶为最优提取酶,通过Box-Benhnken方法优化提取南极磷虾磷脂的最佳条件为：提取温度41 ℃,pH 9,提取时间3 h。该条件下得到的磷脂提取量为（3.66 ± 0.03）%。经测定,本试验中提取的南极磷虾磷脂的脂肪酸链结构主要为C16:0（31.58%）、EPA（31.94%）、DHA（20.64%）等。采用酶辅助Bligh & Dyer法提取得到的脂肪酸中不饱和脂肪酸所占比例比较高,EPA和DHA达到52.58%。通过HILIC-QTOF/MS 脂质组学研究成功分离磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）和磷脂酰肌醇（PI）三大类磷脂。对磷脂类中各磷脂分子实现离子源内分离后成功测定59种磷脂分子,经数据库比对和二级质谱佐证得到磷脂脂肪酸链结构信息：南极磷虾中存在大量含有EPA和DHA链的磷脂分子。本研究结果为南极磷虾磷脂的开发和综合利用提供了试验依据。     

水相体系中磷脂酶A1酶解南极磷虾磷脂制备溶血磷脂的分析

采用磷脂酶A1（phospholipase A1,PLA1）在水相体系中酶解南极磷虾磷脂,以期得到富含二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）的溶血磷脂。以酸价衡量磷脂酶解程度,通过高效液相色谱对酶解前后磷脂组分进行分析,结合甘油磷脂酰胆碱（glycerol phosphatidylcholine,GPC）含量分析进一步证实酰基位移现象,并利用气相色谱-质谱分析磷脂酶解前后脂肪酸组成。结果表明：酸价随加酶量的增加呈现先上升后下降的趋势。随着酶解时间的延长,Sn-2-溶血磷脂酰胆碱（Sn-2-lysophosphatidylcholine,Sn-2-LPC）含量先增加后趋于平衡,Sn-1-溶血磷脂酰胆碱（Sn-1-lysophosphatidylcholine,Sn-1-LPC）含量先升高后降低,这是由于部分Sn-2-LPC发生酰基位移生成Sn-1-LPC,而Sn-1-LPC又进一步被PLA1酶解生成GPC,且在较短酶解时间内,温度对酰基位移的影响不大。最后通过气相色谱-质谱分析得出酶解产物Sn-2-LPC中EPA和DHA含量较高,且其乳化稳定性也得到了提高。     

正己烷-乙醇-水三元双相溶剂浸提法富集南极磷虾磷脂

为研究利用正己烷-乙醇-水三元双相溶剂浸提法从南极磷虾中提取富集磷脂,采用乙醇提取南极磷虾的总脂质,以总脂质得率为评价指标,考察料液比、浸提时间、浸提温度、浸提次数对总脂质提取效果的影响;而后以脂质得率、磷脂含量、磷脂得率为评价指标,优化采用正己烷-乙醇-水三元双相溶剂从南极磷虾总脂质中萃取富集磷脂的最佳条件。结果表明,采用乙醇提取南极磷虾总脂质的最佳条件为料液比1∶3（g/mL）、浸提时间3 h、浸提温度40 ℃、浸提3 次,在该条件下,南极磷虾总脂质得率为（4.69±0.13）%。正己烷-乙醇-水三元双相溶剂从南极磷虾总脂质中萃取富集磷脂的最佳体积比为0.275∶0.600∶0.125,获得的南极磷虾磷脂中磷脂含量为（85.46±0.31）%。南极磷虾磷脂主要为磷脂酰胆碱,磷脂中二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）的总量达到总脂肪酸含量的（53.39±0.76）%。     

不同体长南极磷虾的脂质组成差异分析北大核心CSCD

旨在为南极磷虾渔业捕捞以及陆基精准加工利用提供科学指导,研究了不同体长南极磷虾的脂质组成差异。以脂质含量、甘油酯含量、磷脂含量、胆固醇含量、游离脂肪酸含量、磷脂组成和脂肪酸组成为评价指标,结合多元统计分析技术比较不同体长(<30 mm、30~40 mm、40~50 mm、>50 mm)南极磷虾脂质组成的差异。结果显示:不同体长南极磷虾脂质含量占干基的(17.57±2.43)%~(24.35±0.31)%;甘油酯和磷脂是主要的脂质组分,分别占脂质的(41.40±1.22)%~(43.54±2.02)%和(39.70±0.70)%~(41.89±2.69)%;磷脂主要由磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和溶血磷脂酰胆碱(LPC)组成,分别占总磷脂的(80.04±0.73)%~(85.94±0.58)%、(13.13±0.59)%~(19.17±0.75)%、(0.79±0.05)%~(1.16±0.03)%;脂质中主要脂肪酸为C14∶0、C16∶0、C18∶1、C20∶5(EPA)、C22∶6(DHA),分别占总脂肪酸含量的(12.00±0.37)%~(12.85±0.15)%、(24.64±0.15)%~(27.11±0.16)%、(13.21±0.35)%~(15.09±0.14)%、(18.41±0.18)%~(18.86±0.56)%、(10.17±0.18)%~(12.84±0.16)%;不同体长南极磷虾的脂质含量、磷脂中PC和PE比例、脂肪酸中C16∶0、C18∶1和DHA比例等总体差异显著(p<0.05)。结合聚类分析和主成分分析,根据体长可将南极磷虾样品明显区分为<30 mm、30~40 mm、>40 mm 3大类。研究结果表明南极磷虾的脂质组成与其体长关系显著。     

南极大磷虾油脂的提取及其脂肪酸组成分析

通过单因素实验和正交实验对有机溶剂萃取南极大磷虾油脂的工艺参数进行了优化,并利用气相色谱分析了所提油脂的脂肪酸组成。研究结果表明无水乙醇为南极大磷虾油脂的最佳提取试剂,当提取温度为65℃,时间为3h,料液比为1:9(w:v)时,可获得最高提取率为19.60g/100g(干基)。气相分析发现南极大磷虾油脂中含有14种脂肪酸,其中不饱和脂肪酸占34.73%,饱和脂肪酸占65.26%;主要脂肪酸种类包括棕榈酸(29.3%)、二十二酸(20.1%)、油酸(13.7%)、十四酸(11.7%)、二十二碳六烯酸(10.2%)、十六烯酸(7.39%)、亚油酸(2.04%)。     

南极磷虾油磷脂富集工艺的优化

借鉴水化脱胶原理,对南极磷虾油磷脂富集工艺进行优化。通过单因素实验考察了反应溶液类型、质量分数、加入量,反应温度,反应时间及搅拌速度对南极磷虾油磷脂富集效果及富集后各功能成分的影响,得到南极磷虾油磷脂富集的最佳工艺条件为南极磷虾油中加入4倍南极磷虾油磷脂量的2%柠檬酸溶液、反应温度60 ℃、搅拌速度60 r/min、反应时间30 min。在最佳条件下磷脂富集效果明显,分离得到的磷脂溶液经冻干后磷脂含量可达70.78%,EPA和DHA含量分别为151.93 mg/g和113.70 mg/g;而分离得到的甘油三酯中虾青素含量最高可达780.49 mg/kg。