用冷冻技术保存生物品系的研究

美国农业部设于北达科他州法戈的农业研究所的科研人员报道说,冷冻昆虫的胚胎是保存特定昆虫品系的一种手段。在-20℃下冷冻的家蝇胚于解冻后仍具有活力。而冷冻保藏昆虫和哺乳类的胚胎的困难是不一样的,因为昆虫的胚处于卵内,而卵黄极易冻伤。他们取体节已分化的处于发育晚期的胚胎进行研究,其目标是设法把胚胎冰冻到液氮的温度(-196℃)以便储藏和运输。     

无血清培养的牛体外受精胚胎超快速玻璃化冷冻

采用BSA替代体外发育培养系统SOFaaECS中的怀孕母牛血清来培养牛的体外受精早期胚胎，并且利用OPS超快速玻璃化冷冻技术对处于囊胚期的胚胎加以冷冻。研究结果表明，BEA在SOFaa培养体系当中完全可以替代血清的作用，并且取得了稳定可靠培养的效果，囊胚发育可以达到47％，胚胎的生产效率在稳定基础上得到提高。无血清培养体系生产的OPS玻璃化冷冻胚胎解冻后经培养，存活率达87．8％。利用这一培养系统和冷冻技术能够降低胚胎生产的成本，简洁有效，提高体外受精技术的实用性，为这一技术的推广提供了有益的参考。     

用液氮冷冻借腹怀胎生羊羔

<正>在低温下保存生命,是一门新科学。1980年我国绵羊冷冻胚胎移植获得成功:在一只母羊的腹内移植三个冷冻胚胎,结果生了三只羊羔。冷冻采用液氮。那为什么要采用液氮冷冻胚胎呢?因为给良种母羊注射激素后,一次能排出多达几十个卵子,受精后就形成几十个胚胎,但一只母羊怀不了这么多的羊羔,而要移植到另一些普通母羊的子宫里去借腹怀胎。但取出的胚胎放久了就会死掉,所以要用冷冻的方法把胚胎放到-196℃的液氮罐里,这时胚胎的新陈代谢几乎等于零,它的生命活动暂时停滞了,胚胎就能长期保存。当解冻后,在适当的温度条件下,它又能恢复原来的生命力。     

骨髓,胎肝和外周血造血干细胞的低温生物效应

用生物降温仪、低温显微镜和细胞化学、细胞培养等技术研究证明,低温保存液的相变温度随降温速率的加快而增高,以1℃/min降温时,其相交点在—13.9℃,骨髓细胞浓度对相变温度无影响。液氮(—196℃)冻存后,外用血淋巴细胞体积无明显变化,其糖原和非特异性酯酶含量明显降低。胎肝细胞冻存1098天染色体正常,冻存930天后氧耗量与新鲜值无明显差别,冻存7天后超微弱发光强度为新鲜值的92％。小鼠骨髓和皮肤冻存后,移植免疫排斥反应降低。人骨髓冻存3～300天,胎肝冻存1～1257天,外周血冻存6～53天,其CFU—GM回收率分别为68.9％、62.0％和77.3％。造血细胞活力不随保存时间延长而降低。     

静电解冻箱

目前日本大部分冷冻食品的解冻是利用超声波或音频,这种方法会使食品本身发热,因而在解冻过程中常会导致细菌繁殖,影响食品的质量。日本钢铁工业公司新开发出一种静电解冻箱,箱壁板采用特殊钢板制成。与外部绝缘,通过内装的小型变压器,把约200伏的交流电输送到箱内后,箱内便产生静电,利用静电解冻食品。其特点是杀菌效果     

湖羊精液与胚胎的冷冻保存

五年来,通过对湖羊精液冷冻稀释液、冷冻工艺、输精方法等多项试验,已选出一套技术程序.冻精活力达0.45.在37℃条件下,精子生存时间10.6小时,生存指数3.33,谷草转氡酶(GOT)含量2.33单位/亿,呼吸强度(耗氧量)7.768微升/亿.在农村进行了1416头羊的试验,受胎率逐年提高,情期受胎率41.8%.1983年最高组合达75%(42/56).用1.5M DMSO/PBS冷冻保存液,对43枚湖羊早期胚胎进行冷冻并在液氮里保存.解冻34枚胚胎有24枚正常(占70.58%),其中10枚胚胎用外科手术法移植给3头受体母羊,2头怀孕(占66.6%),共产活羔3头.     

牙鲆胚胎玻璃化冷冻技术研究

对名优经济鱼类牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎的玻璃化冷冻技术方法进行了研究。筛选出了适合于牙鲆胚胎平衡和培养的基础液BS2,对牙鲆不同时期胚胎在玻璃化液VS2中的耐受能力进行了研究,随着平衡时间的延长,胚胎成活率逐渐降低,4-5对肌节期、16-20对肌节期、尾芽期表现出对玻璃化液较强的适应能力。对洗脱液的种类和浓度进行了筛选,结果显示0．125mol／L．蔗糖洗脱成活率最高。在室温(21～22％)和6℃下分别对牙鲆不同时期胚胎在VS1中的成活率进行了比较研究,结果显示出15—20对肌节期在室温下的成活率高于低温,其它时期胚胎低温下的成活率高于室温。利用VS4、VS2、VS3分别对牙鲆尾芽期、肌效应期、出膜前期胚胎进行玻璃化冷冻保存,取得了5粒成活胚,4粒孵化出膜,成活时间为14～67h。     

花鲈胚胎干细胞移植及嵌合体的构建

旨在通过花鲈胚胎干细胞(LJES1)移植构建嵌合体,证实LJES1细胞的体内分化能力和发育全能性.采用脂质体介导法将线性化pCMV-EGFP质粒导入到长期培养的LJES1细胞内,细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达率为5%～10%,以此为供体,通过显微注射方法把20～50个LJES1细胞移植到花鲈囊胚中,共移植囊胚478枚,获得了20枚表达GFP的嵌合体胚胎,其中的15枚胚胎发育成鱼苗.荧光显微观察和PCR检测显示了LJES1细胞可在宿主胚胎内片状嵌合和单细胞分散嵌合,嵌合部位可分布于胚体的三个胚层;同时也证明GFP是一种优良的遗传标记.本实验结果为证实LJES1细胞的发育全能性提供了有力证据.     

洗脱二甲基亚砜对冻存胎肝造血细胞活力的影响

人胚胎肝细胞在-196℃低温保存后,其重建大剂量化疗或放疗患者的造血功能主要取决于造血祖细胞(GM—CFU—C)的含量。为了有效的保存造血细胞活力,目前常用的方法是在冷冻保存液中添加冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)。在用体外琼脂培养的方法测定冻存骨髓样品中 GM—CFU—C 产率时,我们曾发现 DMSO 对集落生长有一定的抑制作用,因此在体外培养时需要洗脱 DMSO。为了判定低温保存效果,并为临床应用提供较准确的 GM—CFU—C 数量,我们研究了人胎肝细胞冻存后洗脱 DMSO 对 GM—CFU—C 产率的影响。     

冷冻保护剂添加-去除过程对猪MII期卵母细胞损伤研究

在卵母细胞的低温保存过程中,冷冻保护剂的添加与去除是一个必不可少的步骤,但高浓度的冷冻保护剂会对细胞造成渗透损伤和毒性损伤。为研究冷冻保护剂添加与去除过程对猪MII期卵母细胞的损伤,本文采用传统的方法(一步法、两步法)来添加和去除冷冻保护剂,探究冷冻液、解冻液、稀释液对细胞存活率的影响。实验结果表明:在冷冻保护剂添加-去除过程中,卵母细胞的渗透损伤主要发生在卵母细胞从冷冻液转移至解冻液,以及保护剂去除阶段;解冻液浓度与平衡时间对卵母细胞存活率有很大影响;卵母细胞保护剂的去除与添加过程是相关的,解冻液浓度和平衡时间的选择依赖于细胞在冷冻液中的浓度和平衡时间。此研究结果将为猪MII期卵母细胞的低温保存方案提供参考。     

大鼠W256癌肉瘤冷冻免疫的初步研究

本文报告了W256冷冻免疫反应初步结果,提出了体外冷冻方法和冷冻同种瘤浆制剂加强冷冻抗肿瘤作用。冷冻可明显抑制W256特异性移植生长,其抑瘤率为88.86%,冻十同种冻融瘤浆组为99.10％,二者有统计学差异。被冻融瘤浆经接种动物观察至20天未见癌肿生长,对照组100％出现肿物。冷冻与注射同种冻融瘤浆对大鼠W256免疫动态观察表明,荷瘤和冷冻及冻十同种瘤浆各组动物不同时间,经脾脏、胸腺与体重比值、血清溶血素及总补体测定,结果显示冷冻后第8至23天,与荷瘤未冻组比较出现不同程度而有益于机体的免疫反应。作者认为体外冷冻方法的建立与提高临床疗效的可能途径,对肿瘤冷冻治疗的理论基础,提供了进一步的解释依据。     

冷冻肿瘤的特异性免疫效应初步观察

本文用实验性肿瘤免疫模型以探讨冷冻因素对肿瘤治疗的作用。应用纯系C_(57)Bl/6小鼠和艾氏腹水癌株及S_(180)A瘤株。随机分五组。初步实验证明:1.体外冷冻瘤细胞经二次免疫以同种活瘤细胞攻击其保护率为92.3％,用异种活细胞攻击其保护率为0％,而自然死亡瘤苗免疫则无特异性保护作用。说明冷冻因素可能是暴露和保存肿瘤特异性抗原的有效方法。2.免疫组小鼠的脾匀浆组织学观察:表现为脾脏T细胞依赖区增生及非特异性酯酶阳性细胞上升。又从组织学及超微结构证明:可见吞噬细胞活性加强和瘤细胞变性坏死等均提示细胞免疫反应性增强。     

新型真空解冻方法及其系统性能实验

针对目前食品餐饮业中冷冻肉解冻速度慢和效率低下的问题,提出一种新型的真空解冻方法:即在真空状态下使冻品中冰晶升华失水,然后再通过复水升温实现解冻。搭建了系统性能实验台,以初始温度为-18℃、500 g五花肉为解冻对象,冻品中心温度达到0℃为解冻完成的判断标准,通过控制升华时间,进行了解冻性能初步实验。结果表明:不同升华时间对解冻时长和效率有较大影响;升华时间为10 min时,解冻总用时为22 min,与自然空气解冻方法用时85 min相比,解冻时间大幅缩短,且解冻后肉泽鲜艳,品质不变,具有广阔的应用前景。     

350例尖锐湿疣冷冻后二年随访

尖锐湿疣是一种常见的性传播疾病,发病率逐年增加,国内资料统计,其发病率占第二位。我科于1982年至1990年采用冷冻治愈350例尖锐湿疣,并且进行冷冻治疗后二年随访观察报告如下。 一、一般资料: 350例患者中,男性210例,女性140例。年龄最小者14岁,最大者65岁,青壮年310例,占患者总数88.57％。     

L—DRA／A46冷冻机油的氧化安定性问题的解决及抗氧剂的筛选

L—DRA／A46冷冻机油是中油大港石化公司主要的润滑油品种之一。氧化安定性是L—DRA／A46冷冻机油的一项重要质量指标，但2005年4月份至2006年6月份，L—DRA／A46冷冻机油因为氧化后酸值和氧化后沉淀物过大而不合格。本文通过对油品性质和加工深度、抗氧剂的效果和品种的筛选及成品油调舍等几个方面对该问题进行了分析，找到了解决该问题的方法。     

液氮低温冷冻治疗子宫颈息肉止血效应及疗效探讨

叙述了应用切冻法(即手术切除后再用自行设计的长蕊探头进行液氮低温冷冻)治疗子宫颈甚肉145例。通过测试观察，证明止血效果好，术后毋需压追止血，治愈了以往认为难以经阴道彻底治愈的蒂粗短附着于宫颈管中上段多次复发的息肉，对42例术后三个月至一年半观察证明，一次治愈率为93％，二次治愈率为100％，且患者无痛苦，无宫颈瘢痕狭窄，不影响分娩，对需要生育的患者应列为首选疗法。     

院士风采

姚鑫 实验生物学、肿瘤生物学家。江苏常熟人。1937年毕业于浙江大学生物系。1949年获英国爱丁堡大学哲学博士学位。中国科学院上海细胞生物学研究所研究员。从事实验肝癌等研究,建立了肝癌模型,发现化学物质诱发肝癌的发生率和肝癌组织学类型的性差别与营养因素有关。他和合作者建立了甲胎蛋白分离提纯和免疫检测方法,首先用于普查,为早期发现肝癌做出了贡献,并发现人体肝癌细胞还具有一种新的膜相关胚胎抗原。组织和主持了抗人肝癌单克隆抗体的研究,在国际上首次获得了具有较好选择性的抗人肝癌单抗,经用放射性点标记后已成功地用于临床肝癌患者定位诊断和治疗。开展对小鼠胚胎肝癌细胞和胚胎干细胞的研究,建立了许多克隆细胞株,进行体外诱导分化和转基因等研究。     

冷冻治疗口腔颌面部恶性肿瘤和癌前病变的近期观察

本文介绍了我们从1979年3月以来,经冷冻治疗的38例恶性肿瘤和癌前病变的近期疗效,随访3个月至2年,恶性肿瘤原发灶控制率94.4％,近愈率83.3％,癌前病变近愈率85％。说明冷冻治疗对早期恶性肿瘤和一些癌前病变有肯定疗效,它为该类肿瘤又提供了一个新的治愈途径。但是,只有严格掌握冷冻治疗适应症和治疗条件,并且积极地采取综合治疗和术后严密观察,才能提高恶性肿瘤和癌前病变的冷冻治愈率和生存率。     

冷冻治疗慢性宫颈炎24000例临床体会

Summing—UpofCryotherapyof24000CasesofChronicCervicitis慢性宫颈炎是妇科疾病中最常见的一种病，发病率可高达50％以上，而且和宫颈癌的发生有一定关系，应及早防治。本院自1978年至1992年应用液氮或液氧冷冻治疗慢性宫颈炎24000多例，经过3个月至13年的不定期观察，有效率     

人类精子库的建立与应用

本研究是根据低温生物学原理,选择合适的稀释液配方作冷冻保护剂,将人类精子稀释后置液氮(—196℃)中贮存。已建立了一套能长期稳定保存人类精子的冷冻保存技术和体外质量监测技术。对264例样品试验结果表明,经冷冻贮存复苏后,精子平均活力达到54.6±5.9％,对去透明带金黄地鼠(Mesocricetws auratus)卵的穿入率平均为66.6％(43.4—80％)。对301例男性不育夫妇实行冷冻精液作人工授精共430个周期,确知成功怀孕者128例,周期成功率为29.7％。