登革病毒反向遗传学技术的研究进展

登革病毒(dengue virus,DENV)是流行于世界范围内的重要虫媒病毒之一,近年来其传播范围的不断扩大给疾病防控带来了极大困难。反向遗传学技术作为一种重要手段,广泛应用于RNA病毒的相关研究,自1991年第1次成功构建DENV感染性克隆以来,明显加速了DENV相关领域的研究。本文总结了DENV反向遗传学技术的构建策略及技术突破,为DENV致病机制研究及疫苗研发提供新思路。     

核酸疫苗的研究进展

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因（DNA或RNA）直接导入动物细胞内，并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。因此，核酸疫苗又称基因疫苗或基因免疫。但目前研究最多的是DNA疫苗，由于其不需要任何化学载体，因此，又称裸DNA疫苗。一、核酸疫苗的发展简史课DNA疫苗最早是由Wolff等[1]于1990年在一次基因治疗的实验研究中意外发现的。他们用化学试剂处理小鼠骨路肌细胞，以提高其摄取质粒DNA的能力，结果发现，未作任何处理的对照动物，其骨铭肌细胞也能吸…     

结核病疫苗研究进展

据ＷＨＯ估计,目前全世界约有２０亿人隐性感染结核分枝杆菌（ＭＴＢ）,每年有８００万新发病人和３００万患者死亡。近年来,人口流动的增加,多重耐药菌株的流行,以及ＭＴＢ和ＨＩＶ的双重感染,导致ＴＢ的发病率和死亡率大幅度上升。因而,ＴＢ的预防再次被提上重要日程。ＢＣＧ虽广泛用于预防ＴＢ,但对其效果争议很多。研究认为ＢＣＧ可预防和减轻儿童严重ＴＢ,但对成人肺结核的预防作用从０到８０％不等［１］。导致此变化的原因在于ＢＣＧ菌株的变异使保护性抗原丢失,人群间遗传或营养的差异以及环境等因素的影响。另外,ＢＣＧ…     

辛德毕斯病毒载体的研究进展

辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SINV)是一种具有广泛宿主嗜性的正链RNA病毒,能够在许多脊椎动物和无脊椎动物细胞中有效复制。其单股基因组RNA被分成两个开放阅读框(ORF),第1个ORF编码非结构蛋白,负责病毒RNA的转录和复制;第2个ORF在亚基因组启动子控制下编码病毒结构蛋白,负责病毒RNA的包裹和病毒粒子的组装。近年来,许多基于SINV的复制子载体已被开发,这些载体能够自我复制,但只有在与表达结构蛋白的辅助RNA共转染时,才能包装成病毒样粒子。目前,SINV复制子载体已广泛应用于疫苗开发和癌症基因治疗,能够激发有效的体液免疫和细胞免疫反应。本文就SINV载体的研究进展作一综述。     

甲型肝炎疫苗研究进展

甲型肝炎是一种由甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)引起的急性传染性疾病,HAV在人群中主要通过粪口途径传播。甲肝流行情况与当地的卫生状况密切相关,有明显的季节性,常呈周期性爆发流行,传染源是急性期病人和亚临床感染者。每年大约有150万人因感染HAV而表现出临床症状,接种甲肝疫苗是预防和控制甲肝流行的最有效措施。本文通过检索和分析大量期刊和专利文献,对甲型肝炎疫苗的研究进展进行了总结。     

新型结核疫苗的研究进展

结核病是由结核分枝杆菌复合群引起的慢性传染病。卡介苗是目前应用最广泛的抗结核疫苗,但其免疫保护效果并不理想。近年来,随着耐多药和泛耐药菌株的增多以及HIV合并感染等问题的日益凸显,抗结核新疫苗的研发势在必行。目前已有多种候选疫苗处于临床研究阶段,主要包括用于增强卡介苗免疫效力的蛋白亚单位疫苗和病毒载体疫苗、用于取代卡介苗的活疫苗及治疗性疫苗,其中亚单位疫苗的作用对象主要针对青少年及成人,因其对全球结核病疫情影响最大,当前阶段备受关注。本文就近年新型结核疫苗的研究进展作一综述。     

口蹄疫疫苗的研究进展

口蹄疫是被列为A类疫病的家畜传染病之一,接种疫苗是防止该病流行的有效措施。本文就口蹄疫灭活疫苗、基因工程亚单位疫苗、转基因植物可饲疫苗、合成肽疫苗、蛋白质载体疫苗、基因工程弱毒疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗及空病毒衣壳蛋白疫苗的最新研究进展作一综述。     

轮状病毒疫苗的研究进展

轮状病毒（Ｒｏｔａｖｉｒｕｓ,ＲＶ）属呼肠病毒科。人类轮状病毒（ＨＲＶ）是婴幼儿腹泻的主要病原之一。在美国,仅１９９７年７月至１９９８年６月的一年内,就有２７０万５岁以下婴幼儿因ＲＶ感染而患胃肠炎。世界各国,每年有约１００万儿童死于ＲＶ所致腹泻［１］。在我国,初步资料表明每年也有约１０万死亡病例。卫生状况对ＲＶ的传播影响很小,营养状况与发病危险的关系也不如细菌性腹泻那样密切;无论在卫生条件较好的发达国家,还是在卫生条件较差的发展中国家,３岁以下的婴幼儿约有９０％都要受到ＲＶ的感染［２］,另外,治…     

新型乙型肝炎疫苗的研究进展

<正>曾在国内外广泛用于乙型肝炎预防的血源性乙型肝炎疫苗（PDV）因血源供应有限及具有潜在危险性,已逐步被基因工程疫苗所取代。近年来,一些新型治疗性疫苗也相继用于慢性乙型肝炎的治疗研究。本文将对预防性及治疗性乙型肝炎疫苗的研究进展作一综述。     

狂犬病减毒活疫苗的研究进展

减毒活疫苗是新一代狂犬病疫苗的发展方向,应用最近十余年发展起来的反向遗传学技术,有可能在不久的将来,研制出高效、安全、廉价且使用方便的狂犬病减毒活疫苗。本文就反向遗传系统及4种类型的狂犬病减毒活疫苗的研究进展作一简要综述。     

Molecular Determinants of West Nile Virus Virulence and Pathogenesis in Vertebrate and Invertebrate Hosts

West Nile virus (WNV), like the dengue virus (DENV) and yellow fever virus (YFV), are major arboviruses belonging to the Flavivirus genus. WNV is emerging or endemic in many countries around the world, affecting humans and other vertebrates. Since 1999, it has been considered to be a major public and veterinary health problem, causing diverse pathologies, ranging from a mild febrile state to severe neurological damage and death. WNV is transmitted in a bird–mosquito–bird cycle, and can occasionally infect humans and horses, both highly susceptible to the virus but considered dead-end hosts. Many studies have investigated the molecular determinants of WNV virulence, mainly with the ultimate objective of guiding vaccine development. Several vaccines are used in horses in different parts of the world, but there are no licensed WNV vaccines for humans, suggesting the need for greater understanding of the molecular determinants of virulence and antigenicity in different hosts. Owing to technical and economic considerations, WNV virulence factors have essentially been studied in rodent models, and the results cannot always be transported to mosquito vectors or to avian hosts. In this review, the known molecular determinants of WNV virulence, according to invertebrate (mosquitoes) or vertebrate hosts (mammalian and avian), are presented and discussed. This overview will highlight the differences and similarities found between WNV hosts and models, to provide a foundation for the prediction and anticipation of WNV re-emergence and its risk of global spread.     

亚洲西尼罗河病毒的系统发育及E蛋白分子进化特征分析

目的 分析亚洲区西尼罗河病毒(West Nile virus,WNV)的流行情况,探讨其系统发育和分子进化特征.方法 从NCBI数据库中分别获取亚洲区流行的WNV 全基因组序列和E 蛋白序列,进行比对和同源性分析后构建系统进化树,分析来自不同株型病毒的结构蛋白E 的核苷酸和氨基酸的突变率,进一步找出氨基酸的替代位点.结...     

Structure-Based Macrocyclization of Substrate Analogue NS2B-NS3 Protease Inhibitors of Zika,West Nile and Dengue viruses

A series of cyclic active-site-directed inhibitors of the NS2B-NS3 proteases from Zika (ZIKV), West Nile (WNV), and dengue-4 (DENV4) viruses has been designed. The most potent compounds contain a reversely incorporated d -lysine residue in the P1 position. Its side chain is connected to the P2 backbone, its α-amino group is converted into a guanidine to interact with the conserved Asp129 side chain in the S1 pocket, and its C terminus is connected to the P3 residue via different linker segments. The most potent compounds inhibit the ZIKV protease with K_i values <5 nM. Crystal structures of seven ZIKV protease inhibitor complexes were determined to support the inhibitor design. All the cyclic compounds possess high selectivity against trypsin-like serine proteases and furin-like proprotein convertases. Both WNV and DENV4 proteases are inhibited less efficiently. Nonetheless, similar structure-activity relationships were observed for these enzymes, thus suggesting their potential application as pan-flaviviral protease inhibitors.     

细胞因子疫苗的研究进展

细胞因子是由免疫细胞(单核巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞及NK细胞)及相关细胞(如血管内皮细胞、纤维母细胞等)产生的一类可调节细胞功能的高活性、多功能的多肽分子。在病理状态下,细胞因子在介导和调节自身免疫性疾病、慢性炎症、肿瘤及HIV感染中具有重要作用。细胞因子具有双重效应,既可抵御和治疗某些疾病,也可能导致和促进某些疾病的发生。细胞因子调节疗法有补充/添加疗法和阻断/拮抗疗法两类。早期细胞因子阻断/拮抗疗法是被动免疫抗细胞因子抗体,但此种疗法存在明显的缺陷和不足。主动免疫疫苗可激发体内产生自身细胞因子抗体,阻断细胞因子活性,是近年来细胞因子调节疗法的主要进展之一,本文对此领域的研究进展作一综述。     

金葡菌疫苗的研究进展

金葡菌(Staphylococcus aureus,SA)是人体感染的常见病原菌,随着抗菌素的广泛使用,其耐药性也日趋严重,临床用药面临着严峻的挑战。20世纪60年代以来,人们不断尝试各种防治SA感染的免疫手段,到目前为止,虽尚未发现一种行之有效的免疫手段应用于临床,但在探索过程中,人们发现,免疫预防与治疗具有广阔的应用前景。本文对近年来SA疫苗的研究进展作一综述。     

鸡胚细胞制备17D黄热疫苗

目的应用鸡胚细胞制备17D黄热疫苗。方法细胞与病毒同时接种,选择病毒增殖的适宜条件,收获病毒液,加入稳定剂,制备成冻干鸡胚细胞黄热疫苗,并进行鉴别试验、病毒滴定和疫苗保护力试验。结果病毒增殖的最适MOI为0.00046PFU/cell;最适培养温度为37℃;第2天洗换,第4天收获更合适;最适病毒感染细胞数为6.80×105～7.00×105个/ml。病毒感染鸡胚细胞后,滴度可达6.15～6.97LgPFU/ml。疫苗主要指标均达到《中国生物制品规程》(2000版)和WHO对疫苗的要求。免疫小鼠45d后,用卵黄囊疫苗4×103PFU脑内攻击,小鼠全部存活。结论在适宜的条件下,用鸡胚细胞制备17D黄热疫苗,能达到WHO疫苗人用标准。鸡胚细胞有取代鸡胚卵黄囊制备黄热疫苗的可能。     

疫苗免疫毒理学评价的研究进展

由于疫苗引起的不良反应多与免疫反应相关,因此免疫毒理学评价在疫苗的安全性评价中显得尤为重要。本文就疫苗免疫毒性包括超敏反应、免疫抑制和自身免疫反应的发生机理及其评价方法的研究进展作一综述。     

Development and Characterization of New Peptidomimetic Inhibitors of the West Nile Virus NS2B–NS3 Protease

A series of new substrate analogue inhibitors of the WNV NS2B–NS3 protease containing decarboxylated arginine mimetics at the P1 position was developed. Among the various analogues, trans‐(4‐guanidino)cyclohexylmethylamide (GCMA) was identified as the most suitable P1 residue. In combination with dichloro‐substituted phenylacetyl groups at the P4 position, three inhibitors with inhibition constants of <0.2 μM were obtained. These GCMA inhibitors have a better selectivity profile than the previously described agmatine analogues, and possess negligible affinity for the trypsin‐like serine proteases thrombin, factor Xa, and matriptase. A crystal structure in complex with the WNV protease was determined for one of the most potent inhibitors, 3,4‐dichlorophenylacetyl‐Lys‐Lys‐GCMA (K_i=0.13 μM ). The inhibitor adopts a horseshoe‐like conformation, most likely due to a hydrophobic contact between the P4 phenyl ring and the P1 cyclohexyl group, which is further stabilized by an intramolecular hydrogen bond between the P1 guanidino group and the P4 carbonyl oxygen atom. These inhibitors are stable, readily accessible, and have a noncovalent binding mode. Therefore, they may serve as suitable lead structures for further development.